RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡的影响

目的研究RNA干扰Caspase-3基因对镉致转化人胚肾293细胞凋亡的影响,探讨Caspase-3基因在镉致细胞凋亡中的作用。方法选择转化人胚肾293细胞进行体外培养,以小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)处理细胞36h后,再以40μmol/L氯化镉分别处理12～24h,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测Caspase-3基因表达水平和蛋白表达水平,以流式细胞仪Annexin-Ⅴ-PI双染法检测细胞凋亡率。结果40μmol/L氯化镉处理转化人胚肾293细胞12h后,Caspase-3基因mRNA水平显著增高,相对分子质量为20kDa的活性亚单位条带显著增强;24h后,细胞凋亡率显著增加(n=4,P<0.01),RNA干扰显著抑制镉诱导的细胞Caspase-3基因mRNA和相对分子质量为20kDa的蛋白表达水平,使细胞凋亡率显著降低(n=4,P<0.01)。结论体外实验表明,RNA干扰Caspase-3基因对镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡具有明显的抑制作用,Caspase-3基因在镉诱导转化人胚肾293细胞凋亡过程中起着重要的作用。