利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CF-435为出发菌株,制备原生质体,在原生质体形成率和再生率最佳的条件下,利用紫外线、利福平、氯化锂对原生质体进行复合处理,获得再生突变株,从中挑取单独菌落进行摇瓶发酵,筛选出高产菌株UV_3-29,在含有葡萄糖10%的培养基中发酵72h可积累L-亮氨酸26.73mg/ml,比原始菌种产酸量提高26%.

由DL-5-苯乙内酰脲酶法生产D-苯甘氨酸的菌种选育

本实验以假单孢菌Pseudomonas SP.27为出发菌株由DL-5-苯乙内酰脲发酵生产D-苯甘氨酸。野生菌产量为15.85μg/ml.首先对其进行紫外诱变处理1min,筛选出菌株Q_6,其产量为256.7μg/ml.然后用Q-6制备球形体,进行亚硝基胍诱变处理60min,得到Q_(68)菌株,其产量为453.4μg/ml.

磁场在麦迪霉素菌种选育中的应用研究

本文论述磁场对麦迪霉素产生菌的磁致诱变效应。在所采用的磁场条件处理下,菌的死亡率在60%以上,正变率范围为2.0%～47.4%,变异率在10%以上。摇瓶初筛,生产能力高于对照菌株的菌株数占过筛菌株数的18.6%,其中生产能力提高30%以上的菌株数占2.8%.

磁场在庆大霉素菌种选育中的应用

本文报道磁场对庆大霉素产生菌降红小单孢菌GB_5的孢子、发芽孢子和原生质体的磁致诱变效应。在所选用的九种磁场剂量处理后,三种状态的菌种的死亡率均在60％以上,其中原生质体的死亡率达96％以上,正变率12％以上,最高达49.1％,变异率在21％以上,摇瓶初筛获得抗生素产量提高10％以上的菌种占过筛菌株数的6.1％,其中产量提高30％以上的占1.5％.

七尾霉素的研究 1 玫瑰链霉菌高产菌株的筛选

玫瑰链霉菌能登亚种OS-3966(Streptomyces rosa subsp.notoensis OS-3966)经紫外线和亚硝基胍处理,研究了变株产生七尾霉素能力的变化。利用紫外线和咖啡因复合诱变处理母株,筛得了500-90-1,500-90-5,500-150-1和500-120-1等高产变株,七尾霉素的产量比母株提高了近3倍,其产物组分与母株相同。同时观察了这些变株在各种培养基上的培养特征。

通过双亲株灭活原生质体融合方法提高链霉素产量

关于带遗传标记的链霉菌原生质体融合已有报道。近年来,国内外研究人员为了节约杂交育种时间,避免进行遗传标记可带来的不利于生产的突变株,故在摆脱遗传标记方面做了一定的工作。我们在进行链霉素产生菌灰色链霉菌的细胞融合工作中,采用高产菌株两株和野生菌株两株均不带遗传标记,将4株菌的原生质体混合在一起,然后分成两份,分别用热和UV灭活,使原生质体的存活率接近于零,融合得到重组子。其重组率低于文献报道。通过筛选,得到一株生长快、效价与对照相当的菌株,并得到10株摇瓶效价提高10～35%的菌株,其中前者已通过中试。这就为缩短微生物杂交育种时间提供了可行途径。

两株麦迪霉素产生菌的稳定性试验

通过对两株麦迪霉素产生菌突变株N-2、Bm-7的稳定性试验结果表明,N-2菌株于4℃条件下,其母斜面保存1个月左右,子斜面保存5天对发酵无影响,第二代子斜面的生产能力亦无变化。而Bm-7菌株是不稳定的。

紫外线诱变原生质体选育苏氨酸高产菌株

以黄色短杆菌T6-13的苏氨酸产生菌GSR8-25为出发菌株,利用溶菌酶制备其原生质体后进行紫外线(UV)诱变处理,从再生株中筛选出苏氨酸高产菌株。经多次连续诱变处理得到一苏氨酸高产菌株25-20,在含10%葡萄糖的培养基中摇瓶发酵60小时可积累苏氨酸19.5mg/ml。分离纯化后得菌株25-202,其苏氨酸产量可达21.5mg/ml,比出发菌株提高43.3%。

L-苏氨酸产生菌选育的研究

用亚硝基胍(NTG)和紫外线(UV)诱变处理出发菌株T_(6-13),定向筛选α-氨基β-羟基戊酸(AHV)和S-(2-氯基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)抗性突变株和蛋氨酸缺陷型,得一苏氨酸产生菌M_(8-31)(AHV^rAEC^rMet^-),可积累L-苏氨酸6.7mg/ml。再以M_(8-31)为出发菌株,进一步提高抗性和筛选α-氨基-4-乙硫丁酸(Eth)敏感突变株,获得一苏氨酸高产菌株ME7(AHV^rAEC^rMet^-Eth^s),在含有葡萄糖10%的培养基中发酵48h可积累L-苏氨酸17.5mg/ml。

利福霉素产生菌发酵培养基的研究

本文考查了各种无机、有机氮源和黄豆饼粉酶解液对地中海诺卡氏菌(Nocardiamediterranei)C_(?)-8菌株生物合成利福霉素SV的影响。结果以蛋白胨、硝酸钾的效果为最佳。通过均匀设计的实验,获得了最佳发酵培养基的组成,使利福霉素SV的产量提高30%.

麦迪霉素高产菌株的筛选

通过紫外线和紫外线-咖啡因对生米加链霉菌1748变株进行处理,筛选出5株产麦迪霉素高产菌株。经紫外线照射40sec和50sec并加500μg/ml咖啡因处理所产生的变异菌株比原株产量提高30%,且稳定。我们还研究了变异菌株的形态与产量的关系。

苏氨酸产生菌原生质体的研究

考察苏氨酸产生菌GSR 8-25的原生质体制备及再生的最佳条件,并用紫外线(uv)诱变处理其原生质体,从再生株中筛选苏氨酸高产菌株。经多次连续诱变处理得一再生株25-20,其苏氨酸产量由出发菌株的15mg/ml提高到21.5mg/ml,提高率达43.3％.

氨基酰化酶高产菌株的选育与发酵

本实验以赭曲霉F_(449)为出发菌株,发酵产生氨基酰化酶,其野生型菌株产酶单位为12.2μ/ml发酵液。我们首先以紫外线诱变处理2min,得到其变异株F_9,产酶16μ/ml发酵液,然后对F_9菌株的原生质体进行亚硝基胍诱变处理15min,得F_(28)菌株,产酶24.7μ/ml发酵液,将F_(28)菌株在优化培养基中发酵培养,其产酰化酶单位提高到32.4μ/ml发酵液,与此同时,提取得到粗品酰化酶,其酶活为15,000μ/g。