利用紫外线、利福平、氯化锂诱变原生质体筛选L—亮氨酸高产菌株的研究

本实验是以黄色短杆菌T_(6—13)的诱变株L—亮氨酸产生菌D—R—4为出发菌株,经青霉素、甘氨酸、溶菌酶作用制备原生质体,形成率达91.30％,再生率达53.68％;然后对原生质体进行紫外线、利福平、氯化锂复合诱变处理;在再生培养基平皿上培养,获得再生突变株,从中挑取单独菌落,进行摇瓶发酵筛选,已选育出一株57—4S号高产稳定菌株;经氨基酸分析仪测定其发酵液L—亮氨酸产量由出发菌株的17.35mg/ml提高到23.45mg/ml提高了35％。发酵液中主要副酸——异亮氨酸含量很少。

L-亮氨酸提取的研究

L-亮氨酸属于分枝链氨基酸,由于它在性质上与缬氨酸、异亮氨酸等比较相似,因此提取收率较低,造成产品的成本增加。本文则采用离子交换法对发酵液中亮氨酸的提取做了一些研究。1 材料与方法1.1 材料离子交换树脂732强酸性离子交换树脂(上海树脂厂),离子交换柱在直径3cm,高45cm的玻璃柱中装处理好的树脂150g.

L-亮氨酸发酵条件的研究

对L-亮氨酸产生菌57-4s菌株进行了接种量、装量、pH、发酵时间、碳源、天然营养成份、氨基酸以及生物素、硫酸铵、碳酸钙对L-亮氨酸产量影响的考察,在适宜的条件下,主酸产量高、副酸含量低,L-亮氨酸产量经氨基酸分析仪测定可达24.46mg/ml。

利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸产生菌

L-异亮氨酸产生菌钝齿棒状杆菌AS110可产L-异亮氨酸16.4mg/ml,不产生L-亮氨酸。在菌株AS110制备成原生质体再生后,结果发现90%以上的再生菌株可以产生L-亮氨酸。用紫外线诱变处理AS110的原生质体,从再生菌株中筛选出一株L-亮氨酸产生菌AS150,经分离纯化后,可产L-亮氨酸16.4mg/ml,并且不产L-异亮氨酸。

均匀设计在L-亮氨酸发酵中的应用

均匀设计是一种新的试验方法,它适用于多因素、多水平的实验设计。这一方法在其他领域的优化处理上已取得一些成果,而在微生物发酵条件考查方面尚无报道。本实验则是采用这一方法进行了L-亮氨酸发酵条件的考查。

L-亮氨酸产生菌菌种选育

L-亮氨酸是人体必需氨基酸,广泛地应用于医药卫生及食品方面。L-亮氨酸的生产有三种方法。一是从蛋白质水解液中提取,产品的收率低、价格高。二是化学合成法,产品为DL-型的混合物。最后一种方法为微生物发酵法,生产简便,产品价格低。本试验以黄色短杆菌T6-13为出发菌株筛选L-亮氨酸产生菌,获得一株抗2-TA。AHV.AEC三种氨基酸结构类似物突变株R19,它可以积累L-亮氨酸8.2mg/ml,经培养条件考查,它可产16.3mg/ml的L-亮氨酸。