苍附苁仙汤对肾虚痰瘀型多囊卵巢综合征患者中医证候及糖代谢的影响

目的:观察苍附苁仙汤对肾虚痰瘀型多囊卵巢综合征患者中医证候以及糖代谢的影响。方法:对60例多囊卵巢综合征患者随机分为观察组和对照组,观察组服用苍附苁仙汤 + 二甲双胍3个月经周期,对照组服用二甲双胍3个月经周期,观察各组中医证候、体重指数(body mass index, BMI)、腰臀比(waist-hip ratio, WHR)以及糖代谢的变化。结果:观察组治疗后中医证候评分较对照组明显下降,差异具有统计学意义(P 0.05)。与对照组比较,观察组体重指数、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数均降低,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:苍附苁仙汤可以改善PCOS患者中医证候,改善机体糖代谢水平,与二甲双胍协同应用能够更好改善PCOS患者基础状态。

手机频率电磁辐射对大鼠睾丸超微结构损伤的研究

目的:观察手机频率(900 MHz)电磁辐射对雄性大鼠睾丸组织超微结构和生精细胞凋亡的影响。方法:将30只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、辐射2 h组和辐射4 h组,每组10只。正常组不辐射,辐射2 h组和辐射4 h组每天暴露于900 MHz手机频率分别辐射2、4 h,连续辐射30 d。透射电镜观察睾丸组织超微结构的变化,原位末端标记(TUNEL法)检测生精细胞凋亡。结果:与正常组比较,辐射2 h组大鼠生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,部分线粒体内出现空泡,见线粒体髓样化,生精细胞凋亡增多[(25.62±1.33)%vs(18.71±1.76)%,P<0.05],以初级精母细胞凋亡为主;与辐射2 h组比较,辐射4 h组生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,精原细胞胞膜不完整,可见胞质碎片、胞核固缩和切迹,核周隙轻度扩张,细胞内线粒体畸形,内有空泡,结构模糊,部分嵴融合或消失,其损伤程度增加,生精细胞凋亡增多[(29.93±1.46)%vs(25.62±1.33)%,P<0.05],精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞均有凋亡。结论:手机频率电磁辐射可造成大鼠睾丸组织超微结构损伤,生精细胞凋亡增加,有时效关系;生精细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。

BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型的建立

目的 建立近交系BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型.方法 采用自体移植法将小鼠自体子宫组织块移植到腹膜,复制子宫内膜异位症模型,将术后的小鼠随机分为4组,手术＋雌激素＋缩宫素组、手术＋雌激素组、手术＋缩宫素组、手术组,并设假手术组和雌激素＋缩宫素组,术后1～12 d采用不同方案诱发小鼠扭体反应,记录扭体潜伏期及扭体次数,并取异位灶行HE染色和病理组织学观察,筛选建立内异症痛经模型的最佳方案.结果 除假手术组、雌激素＋缩宫素组外,各组小鼠移植物均生长良好,镜下可见子宫内膜腺体及间质细胞,证实内异症造模成功,与手术＋缩宫素组、手术组相比,手术＋雌激素＋缩宫素组、手术＋雌激素组移植物体积明显增大,差异有显著性（P＆lt;0.01）;手术＋雌激素＋缩宫素组扭体发生率100%,雌激素＋缩宫素组扭体发生率80%,手术＋缩宫素组扭体发生率50%,其余组未出现扭体反应,组间差异有显著性（P＆lt;0.01）;与手术＋缩宫素组、雌激素＋缩宫素组相比,手术＋雌激素＋缩宫素组扭体潜伏期明显缩短（P＆lt;0.01,P＆lt;0.05）,扭体次数明显增多（P＆lt;0.01,P＆lt;0.05）,差异有显著性.结论 手术＋雌激素＋缩宫素组为建立内异症痛经模型的最佳方案,方法简单易行,可用于内异症痛经发病机制及药物治疗研究.

补肾调经方对控制性超促排卵小鼠卵巢组织形态学、白血病抑制因子表达的影响

目的观察补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠卵巢组织形态学及白血病抑制因子(LIF)表达的影响。方法将小鼠随机分为模型组、补肾组、正常组,每组10只,其中模型组、补肾组腹腔注射醋酸丙氨瑞林(GnRHa,400μg/kg)连续9 d后,第9天注射尿促性腺激素(HMG,400 IU/kg),48 h后注射人绒毛膜促性腺激素(HCG,1 000 IU/kg),并且补肾组在注射GnRHa的同时灌胃给予补肾调经方至注射HCG日;正常组注射生理盐水,并灌胃给予蒸馏水。注射HCG48 h后处死小鼠,放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平,HE染色法观察卵巢组织形态结构,Western blot法检测卵巢组织LIF表达。结果与正常组比较,模型组小鼠E2水平差异无统计学意义(P>0.05),P水平明显升高(P<0.01);卵巢中原始卵泡、初级卵泡明显减少,可见多个黄体,LIF表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾组小鼠E2水平差异无统计学意义(P>0.05),P水平明显降低(P<0.05);卵巢有较多次级卵泡和少量初级卵泡,可见黄体,LIF表达明显升高(P<0.01)。结论补肾调经方可改善COH小鼠内源性激素的失衡及卵巢储备功能,其机制可能与调节卵巢组织LIF表达而促进卵泡发育、成熟,改善卵母细胞发育潜能有关。

逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6/Smads通路表达的影响

目的:观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4表达的影响。方法:将200只雌性小鼠按随机数字表法分为疏肝高、低剂量组、COH组和空白对照组4组各50只。应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,COH组BMP-6、BMPR II、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,各治疗组BMP-6、ALK-2、ALK-6、Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白和mRNA表达增加,疏肝高剂量组优于低剂量组;疏肝高剂量组BMPR II蛋白和mRNA表达增加。结论:逍遥丸可使BMP-6表达上调,激活其Ⅱ型受体BMPRⅡ形成受体复合物,然后募集Ⅰ型受体ALK-2和ALK-6使其活化,活化的Ⅰ型受体进一步磷酸化细胞内信号Smad1/5/8,然后与Smad4结合,从而启动信号传导干预卵泡发育和卵母细胞的质量。

孕激素受体调控排卵过程中卵泡破裂的机制

孕激素在雌性生殖活动尤其是排卵过程中是必不可缺少的。孕激素通过孕激素受体(progesterone receptor,PR)调节卵泡破裂进而诱发排卵。PR调节卵泡破裂要依赖其相关因子才能发挥作用,主要包括血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-1(a disintegrin and metalloproteinase domain with thrombospondin motif-1,ADAMTS-1)、解整合素样金属蛋白酶8(a disintegrin and metalloprotease 8,ADAM8)、内皮素-2(endothelin-2,ET-2)、乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、过氧化物酶体增殖剂激活型受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和突触相关蛋白25(synaptosomal-associated protein 25,SNAP25)等。本文综述了在排卵过程中PR如何调控卵泡破裂的分子机制,为相关排卵障碍性疾病的治疗提供重要的研究方向以及部分理论依据。

丹参有效成分与铁离子的相互作用

丹参是一种重要的传统中药,能够治疗斑马鱼肝脏、心脏和肾脏铁沉积,抑制脂质过氧化。通过体外化学模拟体系,利用紫外-可见分光光度法检测丹参有效成分在HAc-NAc缓冲溶液中与铁离子的相互作用,研究丹参对铁超载引起肾脏损伤的保护作用。结果表明,丹参酚酸A、丹参素钠对Fe^(2+)、Fe^(3+)均有不同程度的络合作用,但丹参酮Ⅱa、丹参注射液对Fe^(2+)、Fe^(3+)均没有明显作用象。

皂角刺总黄酮提取工艺的优化及其抗氧化活性

目的优化皂角刺总黄酮提取工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,选择乙醇体积分数、提取温度、提取时间、液料比作为影响因素,总黄酮提取量作为评价指标,利用Box-Behnken响应面法优化提取工艺。然后,通过测定总黄酮清除羟自由基能力和总抗氧化能力来研究其抗氧化活性。结果最佳条件为乙醇体积分数52%,提取温度30℃,提取时间40 min,液料比40∶1,总黄酮提取量15.93 mg。总黄酮含有量与清除羟自由基能力、总抗氧化能力均呈极显著相关(P<0.01)。结论该方法稳定可行,可用于提取皂角刺总黄酮,并且该成分具有一定抗氧化活性。

手机电磁辐射对大鼠睾丸生殖细胞的影响

为探讨900 MHz手机频率辐射对大鼠睾丸生殖细胞的影响,将30只健康成年SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,分别为对照(不辐射)组和12、30 d辐射组,每组10只,每天以900 MHz(370μW/cm2)模拟手机辐射辐照4 h。采用流式细胞技术进行大鼠睾丸细胞倍体分析。结果显示,与对照组比较,30 d辐射组大鼠睾丸内单倍体生殖细胞比例较低,而2倍体生殖细胞比例较高;12、30 d辐射组大鼠睾丸内4倍体生殖细胞比例均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,12、30 d辐射组大鼠睾丸内1倍体/2倍体及1倍体/4倍体的比值均较低,差异有统计学意义(P<0.05);而4倍体/2倍体的比值无明显变化。提示900 MHz手机辐射可损伤雄性大鼠睾丸生殖细胞。

补肾调经方在种植窗期经STAT3信号通路改善超促排卵小鼠胚胎着床的作用及机制

目的观察补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠种植窗期子宫内膜信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨其改善胚胎着床的作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分为模型组、补肾调经方组和正常组,每组20只。妊娠第4天每组处死10只小鼠,放射免疫法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平,Western blot法检测子宫内膜白血病抑制因子(LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(P-STAT3)蛋白的含量,免疫组化法检测子宫内膜瘦素及瘦素受体(OB-R)的表达。妊娠第8天处死各组剩余小鼠,观察平均胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠血清E_2降低(P<0.05),P升高(P<0.01);子宫内膜LIF、P-STAT3的含量下降(P<0.01),内膜上皮细胞瘦素及OB-R蛋白的表达降低(P<0.01);平均胚胎着床数减少(P<0.01)。与模型组比较,补肾调经方组小鼠血清P降低(P<0.05);子宫内膜LIF、P-STAT3蛋白的含量升高(P<0.01),内膜上皮细胞瘦素表达增加(P<0.05);平均胚胎着床数增多(P<0.01)。结论补肾调经方可改善COH小鼠胚胎着床,其机制可能与调控种植窗期子宫内膜STAT3信号通路相关蛋白有关。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型小鼠BK/BKB1R、PGF2α水平的影响

目的探讨补肾温阳化瘀方干预子宫内膜异位症痛经的作用机制。方法将75只BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组与西药组,每组15只。除假手术组外,其余各组小鼠均采用手术移植法复制子宫内膜异位症痛经模型。造模同时中药高、低剂量组分别每日予补肾温阳化瘀方61.67、15.42g/kg和戊酸雌二醇0.5 mg/kg,西药组每周2次予孕三烯酮0.4 mg/kg和戊酸雌二醇0.5mg/kg。于造模12天腹腔注射缩宫素后观察各组小鼠扭体反应,测量异位灶体积,检测小鼠血清血管舒缓激肽(BK)、前列腺素F2α(PGF2α)含量,免疫组化法和western blotting法检测子宫和异位灶缓激肽B1受体(BKB1R)蛋白表达,RT-PCR法检测子宫和异位灶BKB1R mRNA的表达。结果造模第12天,除假手术组外,其余各组小鼠均成功诱发扭体反应并见异位灶。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组与西药组扭体潜伏期均明显延长、扭体次数显著减少、异位灶体积减小(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组、西药组血清BK、PGF2α含量显著下降,子宫及异位灶BKB1R蛋白及其mRNA表达显著降低(P<0.01),且中药高剂量组子宫内膜异位灶BKB1R mRNA明显低于西药组(P<0.01)。结论补肾温阳化瘀方能有效防治子宫内膜异位症,其机制可能与降低血清BK及PGF2α含量、抑制BKB1R蛋白及其mRNA的表达有关。

逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响

目的观察逍遥丸对小鼠卵母细胞BMP-6表达及妊娠结局的影响。方法将160只雌性小鼠随机分为4组:疏肝高、低剂量组;COH组和空白对照组,每组40只;健康雄性小鼠80只,每组20只。应用免疫组化和real-time PCR方法分别测定卵母细胞中骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein-6,BMP-6)蛋白和m RNA的表达,并比较各组获卵数、优质卵泡率、妊娠率及子宫胚胎数。结果疏肝高低剂量组及空白对照组妊娠率均高于COH组(P<0.05);疏肝高低剂量组卵母细胞BMP-6蛋白及m RNA表达均高于空白对照组和COH组(P<0.05),其中疏肝高剂量组表达高于疏肝低剂量组(P<0.05)。结论逍遥丸可在促性腺激素应用的基础上增加小鼠妊娠率,其作用机制可能与调控卵母细胞BMP-6的表达,提高卵母细胞质量相关。

紫外-可见光分光光度法测定去铁胺的含量

建立了紫外-可见光分光光度法测定去铁胺含量的方法。去铁胺在HAc-NAc缓冲溶液中,与Fe(II)发生显色反应,采用紫外-可见光分光光度法测定其含量。结果表明,去铁胺在0.0897~0.8074 mg/m L范围内,呈现良好的线性关系,回归方程为Y=9.5714X-0.0069(R2=0.9988)。在供试液中分别添加去铁胺对照品0.1,0.2,0.3 mg/m L 3个水平添加下,平均回收率99.5%,相对标准偏差(RSD)为2.0%。方法可用于甲磺酸去铁胺制剂中去铁胺的质量控制。

补肾调经方、逍遥丸对小鼠卵母细胞GDF-9表达的比较研究

目的:观察补肾法、疏肝法对小鼠卵母细胞生长分化因子-9(growth differerntiation factor-9,GDF-9)蛋白及mRMA表达的影响。方法:将300只小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组;疏肝高、低剂量组;控制性超促排卵(COH)组和空白对照组,每组50只,应用Western blotting和Real-time PCR方法分别测定卵母细胞中GDF-9蛋白和mRNA的表达,并对比各组小鼠卵母细胞数量及优质卵泡率。结果:各治疗组卵母细胞中GDF-9蛋白及mRNA表达显著高于空白对照组及COH组,其中高剂量组优于低剂量组(P<0.05),COH组的GDF-9蛋白及mRNA表达较空白对照组降低(P<0.05);各治疗组及COH组卵母细胞数量高于空白对照组(P<0.05),治疗组中高剂量组卵母细胞数量高于低剂量组(P<0.05);各治疗组及空白对照组优质卵泡率优于COH组(P<0.05),治疗组中高剂量组的优质卵泡率优于空白对照组(P<0.05)。结论:补肾调经方、逍遥丸在促性腺激素应用的基础上能增加卵母细胞数量及优质卵泡率,其机制可能与调控卵母细胞中GDF-9的蛋白及mRNA表达有关。

促性腺激素释放激素激动剂控制性超促排卵对小鼠胚胎着床的作用及其机制

本研究旨在探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormone agonist, GnRHa)控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation, COH)对小鼠胚胎着床的作用及机制。40只9周龄昆明雌性小鼠随机分为两组:COH组腹腔注射Gn RHa醋酸丙氨瑞林+人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin, HMG)+人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin, hCG),对照组腹腔注射等体积生理盐水。注射hCG日16:00雌雄小鼠合笼,妊娠第4天每组处死10只小鼠,用放射免疫法检测血清雌二醇(estradiol, E_2)、孕酮(progestrone, P)的水平;用HE染色观察卵巢、子宫内膜组织形态;用Western blot和免疫组织化学法检测子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3 (phosphorylatedsignaltransducerandactivatoroftranscription3,p-STAT3)、肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor, HB-EGF)和glycodelin A蛋白的变化。妊娠第8天每组处死10只小鼠,观察胚胎着床情况。结果显示,与对照组比较,COH组小鼠妊娠第4天(胚胎着床期)血清E_2水平降低(P <0.05),P水平升高(P <0.05);卵巢组织各级卵泡少见,可见多个黄体,子宫内膜变薄,腺体数量减少(P <0.05);子宫内膜LIF、p-STAT3、HB-EGF和glycodelin A蛋白表达下降(P <0.05);妊娠第8天胚泡发育缓慢,数量减少(P <0.05)。以上结果提示,GnRHa COH可影响小鼠胚胎着床,其机制可能与着床期内源性激素失衡,子宫内膜结构和LIF、p-STAT3、HB-EGF、glycodelin A蛋白表达改变,导致子宫内膜容受性降低、胚胎-子宫对话异常有关。

卵丘细胞与卵母细胞间的双向通信

卵丘细胞(cumulus cell,CCs)与卵母细胞之间的双向通信机制是近年来人们研究的热点。CCs与卵母细胞间的小分子物质运输、信号转导通过缝隙连接调控卵母细胞的发育与排卵。卵母细胞通过自身分泌卵母细胞分泌因子(oocyte secreted factors,OSFs)决定CCs的增殖和分化,进而调节卵母细胞的发育与预防卵泡黄素化,OSFs与糖酵解途径也密切相关。此外,非编码RNA(non-coding RNA,ncRNAs)在雌性生殖细胞中的作用研究,为进一步完善二者间的双向通信机制提供了新的思路。CCs与卵母细胞间的双向通信机制非常复杂,阐明该作用机制仍面临巨大挑战,本文旨在对CCs与卵母细胞之间的双向通信机制的研究现状作一综述。