赵玉庸教授治疗小儿肾病综合征的经验研究

目的:研究赵玉庸教授治疗小儿肾病综合征(PNS)的经验。基于小儿特有的生理病理特点及“肾络瘀阻”病机学说,赵玉庸教授提出PNS的病机为脾肾亏虚、浊毒内蕴、肾络瘀阻,自拟“小儿芪苓通络方”,并在激素不同用量阶段进行加减,取得很好的临床疗效。

数据挖掘探讨陈志强教授治疗特发性膜性肾病用药规律

特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是一种排除继发因素,电镜下表现为明显肾小球基底膜上皮细胞免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚的自身免疫性疾病。近年来国内膜性肾病发病率每年增加13%^([1])。IMN患者个体差异大,约30%进展为终末期肾病^([2])。现代医学的免疫抑制疗法疗效不稳定、副作用大、且复发率高。

补肾法通过抑制内质网应激提高子宫内膜容受性研究

目的:研究补肾法(补肾调经方)对控制性超促排卵(COH)小鼠围着床期内质网应激的影响,探讨其提高子宫内膜容受性的作用机制。方法:实验小鼠建立COH模型并给予补肾干预,观察小鼠妊娠数和胚胎种植数,于孕4 d取子宫,Western blot和实时定量PCR分析子宫组织中雌激素受体(ERα)和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化;组织免疫荧光观察ERα和GRP78在子宫内膜的分布。结果:模型组小鼠妊娠数、胚胎种植数显著低于正常组(P<0.05);模型组小鼠ERα和GRP78在子宫内膜基质细胞、微血管内皮细胞中表达,且ERα的表达水平显著降低(P<0.05),GRP78的表达水平显著增高(P<0.05)。与模型组相比,给予补肾调经方干预后,小鼠妊娠数、胚胎种植数明显增高(P<0.05);ERα的mRNA和蛋白水平明显增高(P<0.05),GRP78的mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:补肾法(补肾调经方)改善COH小鼠子宫内膜容受性,与促进ERα表达抑制子宫内膜内质网应激有关。

三焦祛湿方对膜性肾病小鼠肾组织ZO-1和synaptopodin蛋白表达的影响

[目的]探讨三焦祛湿方对膜性肾病小鼠肾组织的保护作用以及对紧密连接蛋白ZO-1和骨架蛋白synaptopodin表达的影响。[方法]将60只雌性Balb/c小鼠随机分为对照组10只和造模组50只。造模组预免疫2周后,开始正式免疫。给予尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)(6.5 mg/kg),隔日1次,持续6周,复制膜性肾病小鼠模型。6周后,测造模组所有小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)显示均为阳性,提示造模成功;并随机选取4只作肾脏病理,观察到基底膜增厚并伴有免疫复合物的沉积,证实膜性肾病小鼠模型建模成功。将造模组随机分为模型组10只、中药低剂量组10只、中药高剂量组10只和盐酸贝那普利组10只,开始灌胃。空白组和模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,三焦祛湿方高低剂量组以及盐酸贝那普利组分别给予相应药物治疗(中药低剂量组3.71 g/kg、中药高剂量组7.42 g/kg、盐酸贝那普利组1.3 mg/kg),每日1次,持续4周。实验结束后,麻醉小鼠,腹主动脉取血,收集血液标本检测总胆固醇(TC)、血清白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜下观察肾组织病理形态;免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中ZO-1和synaptopodin的表达水平。[结果]与空白组相比,模型组小鼠24 h-UTP、TC显著升高(P<0.05),Alb显著降低(P<0.05);与模型组相比,各治疗组小鼠24 h-UTP、TC显著降低(P<0.05),Alb显著升高(P<0.05);各治疗组组间比较,24 h-UTP、TC、Alb无显著性差异(P>0.05)。各组小鼠Scr、BUN相比无显著性差异(P>0.05)。与空白组相比,模型组小鼠肾组织ZO-1、synaptopodin的表达显著减少(P<0.05);与模型组相比,各治疗组小鼠肾组织ZO-1、synaptopodin的表达显著升高(P<0.05),各治疗组间ZO-1、synaptopodin的表达无显著性差异(P>0.05)。[结论]三焦祛湿方对膜性肾病小鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与上调ZO-1和synaptopodin蛋白的表达量有关。

补肾调经方激活ERK信号通路抑制内质网应激促进血管生成的研究

目的:研究补肾调经方对子宫内膜微血管内皮细胞内质网应激(ERS)状态的影响,探讨其促进子宫内膜血管生成改善子宫内膜容受性的作用。方法:将人子宫内膜微血管内皮细胞(HEMECs)分为对照组、雌激素(E2)组、补肾组和E2+补肾组,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的蛋白和mRNA表达变化;Western blot方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)以及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达变化。结果:在给予补肾调经方预孵育后,GRP78的蛋白和mRNA水平均降低(P<0.05),p-ERK的蛋白水平升高(P<0.05);在给予ERK信号通路抑制剂后,GRP78的蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)。结论:补肾调经方通过激活ERK通路抑制ERS以促进子宫内膜血管生成。

基于NOX4/ROS/p38信号通路探讨三焦祛湿方对膜性肾病小鼠的抗氧化应激作用

目的研究三焦祛湿方对阳离子化牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)诱导的膜性肾病(membranous nephropathy,MN)小鼠的作用及其对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)/活性氧(reactive oxygen species,ROS)/p38信号通路的影响,以阐明其抗氧化应激的作用机制。方法将60只小鼠随机分为对照组10只和造模组50只,造模组尾iv 6.5 mg/kg C-BSA建立MN小鼠模型,随机分为模型组及三焦祛湿方低、高剂量(3.71、7.42 g/kg)组和盐酸贝那普利(1.3 mg/kg)组,各给药组ig相应药物干预4周,检测各组小鼠24 h尿蛋白;腹主动脉取血,检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;取肾组织进行苏木素-伊红(HE)、Masson、过碘酸-六胺银(PASM)染色及透射电镜(TEM),观察肾组织病理形态变化,采用免疫荧光法检测肾组织免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)沉积和ROS表达情况;采用Western blotting法检测肾组织NOX4、p38和磷酸化p38(p-p38)蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白显著升高(P<0.01);血清SOD活性显著降低,MDA水平显著升高(P<0.01);肾脏病理改变明显,可见肾小球体积增大,基底膜增厚,嗜复红蛋白沉积,“钉突”形成,上皮下可见电子致密物沉积,足突融合,IgG沿毛细血管襻颗粒状沉积;肾组织ROS表达显著增多(P<0.01),NOX4、p-p38蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,各给药组小鼠24 h尿蛋白显著降低(P<0.01);血清SOD活性明显增强,MDA水平显著降低(P<0.05、0.01);肾组织病理损害明显改善;肾组织ROS表达显著减少(P<0.01),NOX4和p-p38蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论三焦祛湿方能够减少尿蛋白,减轻肾脏病理损伤,缓解肾组织氧化应激,其作用机制可能与调控NOX4/ROS/p38信号通路有关。