小尾寒羊羔羊超数排卵及卵母细胞玻璃化冷冻保存效果研究

以我国地方品种小尾寒羊作为供体,对不同年龄羔羊(6～8周龄和12～14周龄)超数排卵效果以及卵母细胞冷冻保存对体外受精、体外胚胎发育、胚胎移植产羔的影响进行研究。结果表明:6～8周龄组羔羊只均超排处理获卵数和可用卵数(60.8枚和58.2枚)显著高于12～14周龄组(27.3枚和26.0枚)(P<0.05);经玻璃化冷冻—解冻后的卵母细胞体外受精,冷冻组的卵裂率和桑椹胚发育率(67.8%和35.6%)均显著降低于对照组(79.2%和53.8E)(P<0.05);玻璃化冷冻保存体外生产的胚胎,经移植后成功产下4只健康羔羊(4/52)。

用B-超检测奶牛发情后第7天黄体大小与受胎率关系的研究

用B-超对16头1—5胎发情配种后第7天的荷斯坦奶牛卵巢上黄体的面积进行了测定，60d后经妊娠检查，有10头妊娠，6头未妊，其发情后第7天黄体的面积分别为（2．46±0．55）cm^2、（1．74±0．10）cm^2。经t检验两者差异显著（P〈0.05）。结果表明黄体的大小与受胎率之间存在相关性，这为胚胎移植时挑选适宜的受体牛提供了一定客观依据。

诱导荷斯坦犊牛卵泡发育及体外受精研究

从日龄、培养条件和供体个体差异3个方面对4～9周龄犊牛JIVET（juvenile in vitro embryo transfer）技术的影响进行了初步研究。试验结果如下：不同日龄的10头母犊激素诱导后，30～40d母犊平均获卵数为（31．8±9．75）枚，46～63d的母犊平均获卵数为（21．8±11．67）枚，二者差异不显著（P〉0．05）；犊牛胚胎在3气（5％ CO2，5％ O2，90％ N2）条件下和与颗粒细胞共培养条件（5％CO2，95％空气）下卵裂率分别为48．5％和54．1％，二者差异不显著（P〉0．05），但是桑葚胚率差异显著（0％，15．2％，P〈0．05）；供体间个体差异很大，70％（7／10）的个体对激素诱导反应良好。

秋水仙碱化学去核对山羊卵丘细胞核移植胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨秋水仙碱化学去核在山羊卵母细胞去核中的应用及其对卵丘细胞核移植胚胎体外发育的影响。结果表明:用秋水仙碱处理山羊体外成熟19h的卵母细胞,可使其核区形成胞质突起,以此为指示进行显微操作去核率可达100%,且用0.8μg/mL秋水仙碱处理30min的山羊卵母细胞突起率可达91.27%,显著高于对照组及0.4μg/mL处理组(P<0.05),与1.6μg/mL处理组的突起率差异不显著(P>0.05)。通过比较盲吸去核法与秋水仙碱化学去核法构建的山羊卵丘细胞核移植胚胎的体外发育能力发现,秋水仙碱化学去核法构建的重构胚体外发育能力较高,桑椹胚发育率显著高于盲吸去核法(P<0.05)。

影响山羊腹腔镜法活体采卵效果的研究

用屠宰厂采集的卵巢作为实验材料,比较了不同型号的采卵针对卵母细胞回收效果的影响,结果9号和12号针的回收率分别为66.78%和62.41%,显著高于7号针的52.63%(P<0.05);可用率分别为63.59%和68.82%,也显著高于7号针的55%(P<0.05)。在活体采卵实验中,比较了不同采卵间隔时间对活体采卵效果及供试羊卵巢损伤情况的影响,结果间隔1周组的每次每只卵泡数(12.08个)、每次每只获卵数(8.75枚),均显著低于间隔2周组(15.58个,11.97枚)和3周组(14.91个、11.42枚)(P<0.05)。间隔1周重复活体采卵对卵巢的损伤较大,卵巢表面有较多的血斑;间隔2周组和3周组卵巢基本能够恢复正常。同时还比较了离体卵巢与LOPU获得的卵子对体外受精效果的影响,二者在卵裂率(85.14%对83.33%)和桑椹胚率(52.38%对45.58%)方面差异不显著(P>0.05),但囊胚率差异显著(P<0.05),分别为30.16%和14.71%。

国际上牛胚胎移植应用现状

笔者于2002年6月20日-7月8日和2004年3月19日。4月7日两次赴澳、新、韩三国访问。与胚胎移植相关的单位有新西兰汉密尔顿的维卡多大学和新西兰皇家农科院、澳大利亚的悉尼大学、南昆士兰州大学、墨尔本大学生物技术中心和澳大利亚南太平洋生物技术有限公司（SPB）等，并和澳大利亚南太平洋生物技术有限公司（SPB）签定了“关于开展牛、羊胚胎生物技术研究与开发的合作意向书”。2004年以来又先后接待了澳大利亚SPB的总经理刘永树先生、法目Salers（萨来尔）牛协会主席和阿根廷胚移专家Carlos Munar（卡罗斯·莫纳）等到河北的来访。就牛胚胎移植相关问题进行了交流，现将上述几个国家有关牛胚胎移植应用情况归纳如下。

气泡诱导小鼠子宫内膜蜕膜化研究

子宫内注射气泡是一种新型的小鼠子宫内膜蜕膜化诱导方法,本研究以小鼠为研究对象,向子宫内注射气泡,构建气泡诱导的蜕膜化模型,以正常胚胎诱导的蜕膜为对照组,采集2种方式来源的蜕膜,通过形态学和HE染色,比较2种蜕膜的形态组织差异,并采用高通量转录组测序,筛选2种蜕膜间的差异表达基因。结果表明:由气泡诱导的蜕膜因缺乏滋养层的刺激,形态结构呈现异常增殖,其组织切片不能辨别出初级蜕膜区和次级蜕膜区,没有外胎盘锥的形成,并且与对照组相比有59个基因表达下调。表明气泡能够高效诱导蜕膜化反应,其诱导的蜕膜组织和正常胚胎诱导的蜕膜组织存在差异,属于异常的蜕膜组织,这为研究早期胚胎着床机制提供了新思路。

绵羊体外成熟卵母细胞OPS法玻璃化冷冻保存试验

研究以EDFS30为玻璃化冷冻液,以卵母细胞解冻后孤雌激活和体外受精后的卵裂率、囊胚发育率作为评价指标,探讨了以OPS法玻璃化冷冻保存体外成熟绵羊卵母细胞的效果。结果表明:卵母细胞孤雌激活后的卵裂率,冷冻组(64.2%)显著(P<0.05)低于毒性组(76.7%)和对照组(79.1%),而毒性组和对照组无显著(P>0.05)差异;卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率,冷冻组(4.2%)和毒性组(5.8%)均显著(P<0.05)低于对照组(20.2%),毒性组和冷冻组无显著(P>0.05)差异;冷冻组和毒性试验组卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚发育率(67.6%和7.1%;62.3%和9.1%)均显著低于对照组(78.4%和28.4%)(P<0.05),而毒性组和冷冻组无显著(P>0.05)差异。可见以EDFS30为玻璃化冷冻液,采用OPS法冷冻保存绵羊体外成熟卵母细胞会在一定程度上降低其受精能力和胚胎发育能力。

ES小鼠和ES细胞中H19基因甲基化状态

为探讨印迹基因H19的甲基化状态与ES小鼠胚胎发育之间的关系,以遗传背景相同的正常成年对照小鼠、22只成年ES小鼠和8只新生死亡的ES小鼠以及不同传代次数的ES细胞为实验材料,利用甲基化敏感性限制性内切酶-PCR技术分别检测了其印迹基因H19的5′非翻译区两个位点的甲基化状态。结果表明,发育至成年的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与正常成年对照小鼠之间没有差异,而新生死亡的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠相比则存在明显差异。推测ES细胞中印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠之间可能存在差异。

幼畜与成年畜超排卵发育潜能的研究进展

诱导幼畜超数排卵技术可以充分挖掘和利用优良母畜的早期繁殖潜力,大大加快家畜育种及品种改良进程,同时也将解决种畜胚胎移植商业化所需胚胎来源匮乏及胚胎生产成本昂贵的问题,将大大促进胚胎生产的商业化应用,前景十分广阔。但是,这种幼畜超排的卵,在体外受精后,发育到囊胚期的潜能比成年动物超排的卵发育潜能有所降低,例如,犊牛和成年牛,羔羊和成年羊中就存在此类现象。这种差异可能具有普遍性。本文就幼畜与成年畜超排卵发育潜能的差异做了综述。