姜黄素对人食管癌Eca-109/VCR细胞多药耐药性的逆转作用

目的 :探讨姜黄素(curcumin,Cur)对人食管癌耐长春新碱(vincristine,VCR)Eca-109/VCR细胞株多药耐药的逆转作用及可能的作用机制。方法 :CCK-8法检测不同浓度VCR对亲本Eca-109细胞和耐药Eca-109/VCR细胞增殖的影响,以及Cur(20μmol/L)对Eca-109/VCR细胞多药耐药的逆转作用;FCM法检测Cur(20μmol/L)联合VCR(2μg/m L)作用6、12和24 h时对Eca-109/VCR细胞凋亡率的影响;实时荧光定量PCR法分析Eca-109/VCR细胞中多药耐药1(multiple drug resistance 1,MDR1)m RNA的表达;免疫细胞化学法检测Eca-109/VCR细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白(multidrug resistancerelated protein,MRP)的表达。结果 :Cur(20μmol/L)作用于Eca-109/VCR细胞24 h时,细胞的增殖抑制率为(8.08±0.23)%;VCR对Eca-109和Eca-109/VCR细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.157和2.524μg/mL;Cur(20μmol/L)与不同浓度的VCR联合作用后,Eca-109/VCR细胞对VCR的逆转耐药倍数为3.58。Cur(20μmol/L)联合VCR(2μg/mL)作用于Eca-109/VCR细胞12和24 h后,细胞凋亡率分别为(11.27±0.21)%和(18.77±0.26)%,较VCR单药组明显提高(P值均<0.05);Cur(20μmol/L)与VCR(2μg/m L)或VCR(3μg/m L)联合作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,MDR1 m RNA表达率均明显降低(P值均<0.05);Cu(r20μmol/L)与VCR联合作用24 h后,Eca-109/VCR细胞中的P-gp和MRP阳性表达率均较VCR单药组明显下降(P值均<0.05)。结论 :Cur具有逆转食管癌细胞多药耐药的作用,其作用机制可能与下调P-gp和MRP的表达有关。

姜黄素通过抑制Notch1信号通路逆转人食管癌Eca-109/VCR细胞对长春新碱的耐药性

目的:研究姜黄素(curcumin,Cur)对人食管癌Eca-109/长春新碱(vincristine,VCR)细胞耐药性的逆转作用,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测不同浓度的Cur对Eca-109/VCR细胞增殖的影响,以及Cur浓度为25μmol/L时对Eca-109/VCR细胞耐药性的逆转作用。将Cur(25μmol/L)、VCR(2μg/mL)单独及联合作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,分别采用FCM法和Hoechst 33258荧光染色法检测对细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR法检测Eca-109/VCR细胞中Notch1、Jagged1和发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测Eca-109/VCR细胞中Notch1、Jagged1、Hes1及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平。结果:25μmol/L的Cur作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,细胞的增殖抑制率为(8.82±0.80)%;Cur(25μmol/L)与不同浓度VCR联合作用后,VCR对Eca-109/VCR细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))由(7.70±0.63)μg/mL下降为(2.55±0.12)μg/mL,耐药逆转倍数为3.02倍。Cur(25μmol/L)单药、VCR(2μg/mL)单药以及Cur(25μmol/L)联合VCR(2μg/mL)作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,FCM法和Hoechst 33258荧光染色检测结果均显示,Cur联合VCR组细胞的凋亡率均明显高于Cur单药组和VCR单药组(P值均<0.05);Cur联合VCR组细胞中Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA的表达水平较Cur单药组和VCR单药组明显下调(P值均<0.01);Notch1、Jagged1、Hes1及P-gp蛋白的表达水平亦均明显下调(P值均<0.05)。结论:Cur能明显逆转人食管癌VCR耐药细胞株Eca-109/VCR对VCR的耐药性,其机制可能是通过抑制Notch1信号通路和降低P-gp的表达及功能而实现的。