款冬花粗多糖体外诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的:观察款冬花粗多糖对体外培养人白血病K562细胞有无凋亡诱导作用。方法:实验于2006-06-25/2006-09-08在河北北方学院实验中心细胞生物学实验室、分子生物学实验室、药物研究实验室完成。①款冬花粗多糖的提取:称取已干燥粉粹的款冬花417.0g,加入1000mL体积分数0.85乙醇回流提取1h,滤过,滤渣加入1000mL三蒸水回流提取2h,过滤,滤渣再加入1000mL三蒸水回流提取2h,合并2次滤液,减压浓缩至适量,四倍体积无水乙醇醇沉,静置过夜,过滤,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤,即得款冬花粗多糖。苯酚-硫酸法测定款冬花粗多糖含量以生药计算为122.9mg。制成102.5g/L粗多糖溶液。②人白血病K562细胞的生长抑制实验:体外培养的K562细胞经10,30,50,70,90mg/L的款冬花粗多糖作用48h后,通过Hoeehst33258染色在荧光显微镜下进行形态学观察、采用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞凋亡。结果:①经款冬花粗多糖作用后,荧光显微镜下发现体外培养的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。②经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞DNA电泳均出现相差约200bp的DNA梯子状条带。③流式细胞仪检测发现,经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞,有凋亡峰。结论:款冬花粗多糖可诱导体外培养人白血病细胞K562凋亡。

经冠状动脉内注射体外培养骨髓间充质干细胞的安全性

目的:经冠状动脉内移植可以使移植细胞均匀的分布在移植血管相关心肌组织内,同时避免了心肌内注射引起的心肌损伤,是目前很多临床试验采用的移植途径。然而部分学者指出冠状动脉内注射移植可能会导致心肌梗死等并发症。观察经介入途径将骨髓间充质干细胞注射到心肌梗死猪冠状动脉内的可行性及安全性。方法:实验于2005-06/2006-03在中国协和医科大学阜外心血管病医院、卫生部心血管病再生医学重点实验室完成。①实验材料:中华小型猪由中国农业大学实验动物基地提供,雌性,6个月龄。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心法分离猪骨髓单个核细胞获取骨髓间充质干细胞,并采用超顺磁性氧化铁颗粒和荧光细胞膜标记物CM-DiI进行双重标记。阻断冠状动脉前降支中下1/3处90min后开放制作猪心肌梗死模型。通过导管将骨髓间充质干细胞注射到心肌梗死模型动物的冠状动脉内,观察心电图及肌钙蛋白I在细胞移植后不同时期的变化,应用心脏磁共振在体示踪移植细胞在心脏内的分布,评价心脏形态和功能在细胞移植前后的变化,病理检查分析移植细胞在心肌组织内的分布以及体内非靶器官的再分布情况及组织形态改变。结果:①冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞当时及24h后,心电图未见ST-T明显改变,肌钙蛋白未见明显升高。细胞移植后当时及24h后左室舒张末期容积、左室收缩末期容积未见明显增大,左心室射血分数未见降低。移植后2周心脏功能明显改善,左心室容积明显缩小,左心室射血分数明显升高。②细胞移植前、移植后24h、移植后2d,反映心肌损伤的肌钙蛋白I均未出现明显升高,细胞移植过程中心电图未出现明显的变化。③病理检查发现移植细胞在心肌组织内均匀分布,2周后可见移植细胞在梗死区域存活,移植细胞存在向肺、肝、肾等非靶器官的再分布,移植细胞对非靶器官的组织形态无明显影响。结论:实验证明经冠状动脉内移植的骨髓间充质干细胞能够均匀的分布到相关心肌组织内,不会造成梗死心肌组织的功能损伤,并可以明显改善梗死心肌功能,对非靶器官组织形态无明显影响,经冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞治疗猪急性心肌梗死是安全可行的。

骨髓间充质干细胞经大鼠冠状动脉内移植的可行性

目的研究骨髓间充质干细胞经冠状动脉内移植的安全性及可行性。方法左侧开胸结扎SD大鼠左冠状动脉,2周后取心脏建立Langerndorff模型。将CM-DiI标记的骨髓间充质干细胞悬液注入主动脉根部,同时收集右心房回流的液体,离心后通过流式细胞仪计数细胞数量。观察是否有细胞经冠状静脉回流及数量比例。并在不同时间测LVSP、LVDP、±dp/dt、心率,评价其安全性。在体实验中取心梗后2周的大鼠,经左心室-主动脉途径将细胞悬液注射到临时阻断的主动脉根部,分别在移植后1及24 h和1及4周取材观察细胞在心脏内的位置及细胞的迁移情况。结果离体实验发现经冠状动脉内注射骨髓间充质干细胞90%以上的细胞在心肌组织内存留,移植后LVSP、LVDP、±dp/dt、心率没有明显变化。在体内实验中发现细胞移植后早期大部分细胞分布在心外膜下心肌组织内,在心内膜下组织内较少细胞分布,而且大部分细胞在正常心肌组织内,只有少量在心梗区域。而在细胞移植后1-4周存活的细胞多在心肌梗死及交界区组织内,在正常组织内很少有移植细胞存在。结论经冠状动脉途径进行细胞移植是安全可行的。

右全肺切除术后心脏疝一例

心脏疝是由于各种原因导致心包留下较大缺损或裂口.心脏或其一部分疝出心包外,发生心脏嵌顿或扭转而导致血流动力学紊乱,是一种严重的致命的病理状况。可发生于异位心脏、外伤、先天性心包缺损患者,全肺切除术中心包切开或部分切除是其常见的诱因。心包内全肺切除术后心脏疝是一肿严重致命的并发症,及时准确诊断对于挽救患者生命至关重要。术后胸部X片是可以最早发现该并发症的手段之一,然而关于其影像学资料的认识往往被临床医生所忽视,可能会延误诊断。现报告我院的心包内处理肺动脉右全肺切除术并发心脏疝的病例1例。

超顺磁性氧化铁作为细胞标记试剂的可行性研究

目的:评价目前临床使用的磁共振对比增强剂超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)进行骨髓间充质干细胞(MSCs)标记的安全性、有效性。方法:从中华小型猪髂骨处抽取骨髓,体外培养扩增MSCs。将SPIO和MSCs共同孵育培养36h。普鲁士蓝染色评价细胞的标记效率;通过MTT比色实验评价SPIO对细胞生长能力的影响;台盼蓝染色检测标记后细胞的活性;使用Costar Transwell方法评价铁离子对细胞迁移能力的影响;用细胞分化诱导液培养标记后的细胞评价其向成脂肪细胞和成骨细胞的分化能力。结果:①MSCs经SPIO标记后普鲁士蓝染色阳性率在95%以上,电镜切片观察可见高密度铁颗粒位于细胞浆内。②MSCs经SPIO标记后,MTT比色实验发现随着培养液中SPIO浓度的增加细胞增殖能力没有明显改变;台盼蓝染色显示98%的细胞保持活性;仍可保持原有的细胞形态,可继续培养、传代;细胞迁移试验发现MSCs对SDF-1和VEGF诱导的迁移能力没有明显的减弱;细胞仍可向成脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:SPIO可以安全、有效地标记MSCs。

体外培养骨髓间充质干细胞经大鼠冠状动脉内移植的可行性研究

目的：探讨冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞（MSCs）的可行性和安全性。方法：左侧开胸结扎sD大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。①离体实验：取心肌梗死后2周大鼠5只，开胸取出心脏，常规建立Langendorff模型。将CM—DiI标记的MSCs悬液注入主动脉根部，同时收集右心房回流的液体，离心后通过流式细胞仪计数细胞数量。观察是否有细胞经冠状静脉回流及数量比例，并在细胞移植前和移植后5、15和30min测左室收缩压（LVSP）、左室舒张压（LVDP）、左室压力变化率（±dp／dt）、心率，评价其安全性。②体内实验：取心肌梗死后2周的大鼠，经左心室-主动脉途径将细胞悬液注射到临时阻断的主动脉根部，分别在移植后1、24h和1、4周取材观察细胞在心脏内的位置及细胞的迁移情况。结果：离体实验发现经冠状动脉内注射MSCs（95±3）％的细胞在心肌组织内存留，移植后大鼠LVSP、LVDP、±dp／dt及心率没有明显变化（P〉0．05）。在体内实验中发现细胞移植后早期大部分细胞分布在心外膜下心肌组织内，在心内膜下组织内较少分布，而且大部分细胞在正常心肌组织内，只有少量在心肌梗死区域。移植后1～4周存活的细胞多在心肌梗死及交界区组织内，在正常组织内很少。结论：经冠状动脉内途径行MSCs移植是安全可行的。

自主神经竞争性机制在肺叶切除术后房颤发生中的作用

目的探讨自主神经在肺叶切除术后房颤发生中的作用。方法对281例60岁以上接受肺叶或全肺切除术的患者进行术前24 h、术后连续96 h的动态心电图监测,对出现房颤患者术前2 h、房颤发生前60 min、30 min、5 min的动态心电图的心率变异性指标进行分析,选取5 min的阶段,研究心率变异性在房颤发生前4个时间点的变化趋势,分析交感神经张力与迷走神经张力在房颤发生前的变化。结果 281例肺切除患者术后有48例出现房颤,发生率17.1%;房颤发生前60 min、30 min、5 min反映迷走神经张力的指标SDNN、r MSSD、p NN50、HF均有明显升高,而反映交感/副交感神经平衡的指标LF/HF则有逐渐降低趋势;在房颤发生前5 min的SDNN、r MSSD、p NN50、HF明显升高,而LF/HF比值明显降低,表明迷走神经张力明显升高,RR间期在房颤发生前逐渐缩短。结论肺叶切除术后的房颤发生前心率变异性存在明显升高的表现,肺叶切除术后交感神经张力明显升高的背景下迷走神经张力竞争性升高可能是导致房颤发生的重要机制。

自体骨髓单个核细胞经桥血管内移植治疗缺血性心脏病的可行性研究

目的:探讨冠状动脉旁路移植手术中自体骨髓单个核细胞经桥血管进行细胞移植的可行性及安全性。方法:选择冠状动脉旁路移植手术患者10例,既往有陈旧性心肌梗死,需要进行冠状动脉旁路移植手术,左心室射血分数(LVEF)≤40%,通过超声心动图、心脏MRI等检查进行心功能评价。患者进行手术同时抽取骨髓血提取单个核细胞,在桥血管远端吻合完成后,分别将单个核细胞经桥血管注射到静止的心肌组织内。术后通过超声心动图、心脏MRI等检查评价心功能。结果:所有患者术后均顺利康复。术中采集骨髓血45～60 mL,分离骨髓单个核细胞(2.8～7.1)×107,连续超声心动图检查发现LVEF术后1周明显升高,术后3个月显著升高,心脏MRI检查发现左心室明显缩小。术中及术后均未见与骨髓血采集以及细胞经冠状动脉桥血管内移植相关的并发症。结论:作为缺血性心脏病的一种辅助性治疗手段,骨髓单个核细胞通过桥血管进行心肌内移植是安全可行的。

上腔静脉重建术中血流动力学及脑氧代谢变化对手术策略的选择

目的探讨侵犯上腔静脉的胸部肿瘤手术中手术策略的选择对上腔静脉阻断期间脑氧代谢的影响。方法总结分析31例胸部肿瘤侵犯上腔静脉合并(阻断组,n=19)及未合并(旁路组,n=12)上腔静脉阻塞患者上腔静脉重建术中,直接阻断上腔静脉(阻断组)或旁路分流(旁路组)患者血流动力学改变、脑氧代谢及乳酸改变的情况。结果阻断组患者术前上腔静脉压力、脑氧摄取率、颈内静脉乳酸水平、颈静动脉乳酸差值明显高于旁路组,而颈内静脉血氧饱和度低于旁路组(均P<0.05)。血管重建后阻断组上腔静脉压力、脑氧摄取率、颈内静脉乳酸水平、颈静动脉乳酸差值明显下降,而颈内静脉血氧饱和度上升(均P<0.05);旁路组上腔静脉压力、脑氧摄取率、颈内静脉乳酸水平、颈静动脉乳酸差值以及颈内静脉血氧饱和度无明显改变(均P>0.05)。结论合并上腔静脉阻塞患者在上腔静脉重建过程中直接阻断上腔静脉进行肿瘤切除、腔静脉重建是安全的,未合并上腔静脉阻塞者进行上腔静脉至心房的旁路分流是必要的。

应用牛颈静脉行上腔静脉置换治疗上腔静脉阻塞综合征的临床观察

目的探讨应用牛颈静脉行上腔静脉置换治疗上腔静脉阻塞综合征的可行性。方法 2008年2月—2011年5月收治胸部肿瘤侵犯上腔静脉引起上腔静脉阻塞综合征12例,均应用牛颈静脉置换受肿瘤侵犯的上腔静脉。结果本组术后均恢复顺利,术后12～36 h上腔静脉阻塞症状缓解。术后所有患者接受化疗,2例恶性胸腺瘤术后6个月接受局部放疗。牛颈静脉1年通畅率为100%。1例肺癌术后18个月肿瘤复发未接受治疗,1例肺癌和2例恶性胸腺瘤均于术后24个月死亡。随访期间未见移植的牛颈静脉内血栓形成及钙化。结论应用戊二醛处理的牛颈静脉对胸部肿瘤引起的上腔静脉阻塞综合征行上腔静脉置换治疗安全可行。

胸部肿瘤上腔静脉重建术中脑氧代谢的变化对手术策略选择的指导意义

目的:探讨侵犯上腔静脉的胸部肿瘤手术中手术策略的选择对上腔静脉阻断期间脑氧代谢的影响。方法:总结我院31例胸部肿瘤侵犯上腔静脉合并上腔静脉阻塞及不合并上腔静脉阻塞患者上腔静脉重建术中,直接阻断上腔静脉或旁路分流患者血液动力学改变、脑氧代谢及乳酸改变的情况。结果:上腔静脉阻塞患者术前上腔静脉压力、脑氧摄取率、乳酸水平明显高于不合并上腔静脉阻塞者(24.0 &#177;8.9 &11.0 &#177;2.5;36 &#177;12 &29 &#177;1O;5.75 &#177;2.36 &3.54 &#177;0.88),而在直接阻断上腔静脉进行重建过程中,上腔静脉压力未见明显升高,脑氧摄取率、静脉乳酸水平无改变,上腔静脉重建开放后腔静脉压力、脑氧摄取率、静动脉乳酸差值明显下降(24.0 &#177;8.9 &14.6.0 &#177;6.3;36 &#177;12 &26 &#177;12;0.51 &#177;1.23 &0.28 &#177;1.21);未合并上腔静脉阻塞者在进行旁路分流后血液动力学、脑氧代谢率、脑静脉乳酸水平无明显改变。结论:合并上腔静脉阻塞患者在上腔静脉重建过程中直接阻断上腔静脉进行肿瘤切除、腔静脉重建是安全的,未合并上腔静脉阻塞者进行上腔静脉至心房的旁路分流是必要的。