全脑缺血预处理诱导大鼠海马缺血耐受的实验研究

目的和方法 :采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 (4 vesselocclusion ,4VO)及组织病理学方法 ,观察预缺血的持续时间 ,和预缺血与其后的损伤性缺血之间的间隔时间对海马缺血耐受形成的影响。结果 :缺血 6min即可导致海马组织明显的神经元延迟性死亡 (delayedneurondeath ,DND) ,而缺血 3min不足以引起海马组织明显的DND。经过 3min缺血预处理 ,可对间隔 1d和 3d后 6min缺血引起的大鼠海马DND产生明显的保护作用 (P <0 .0 1)。但是 ,1min缺血预处理对间隔 1d后 6min缺血引起的DND不产生明显影响 ;5min缺血预处理对间隔 1d后 6min缺血 ,以及 3min缺血预处理对间隔 1h后 6min缺血引起的DND不但没有保护作用 ,反而有使海马组织损伤累积加重的趋势。结论 :在 4VO大鼠模型中 ,全脑缺血预处理确能诱导海马对缺血性损伤产生耐受 ,诱导海马缺血耐受所需缺血预处理的适宜期间为 3min左右 ,预缺血与后续损伤性缺血之间需要间隔足够的时间 ,适宜间隔在 1～3d左右。

脑预缺血引起大鼠海马细胞膜腺苷受体数量和亲和力升高及其对神经元的保护作用

采用放射性配基结合法 ,测定大鼠全脑缺血后海马细胞膜腺苷 (adenosine,ADO)受体数量及亲和力的变化 ,以探讨其与脑缺血耐受形成之间的关系。发现缺血 6min即可导致海马组织明显的神经元延迟性死亡 (de layedneurondeath ,DND) ,缺血 3min不足以引起海马组织明显的DND ;而经过 3min预缺血处理 ,可明显减轻间隔1d后 6min缺血引起的海马DND (P <0 0 1)。与此相对应 ,缺血 3min再灌 1和 3d时 ,ADO受体数量及亲和力明显高于sham组 (P <0 0 5 ) ,而缺血 6min再灌 1和 3d时 ,ADO受体数量明显低于sham组 (P <0 0 5 ) ,但亲和力高于sham组 (P <0 0 5 )。与单纯 6min缺血再灌 4h、1和 3d时相比 ,3min预缺血 + 6min缺血 (间隔 1d)再灌后 ,ADO受体数量及亲和力均显著升高 (P <0 0 5 )。这些结果表明 ,脑预缺血处理可使大鼠海马细胞膜ADO受体数量增多 ,亲和力增强 ,并能对抗损伤性缺血引起的ADO受体数量减少 ,提示腺苷受体数量及亲和力的变化在脑缺血耐受形成过程中发挥了重要的作用。

大鼠肺纤维化形成中肺巨噬细胞增殖和凋亡的变化

目的:观察肺纤维化形成过程中,肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化。方法:气管内滴注平阳霉素(BLMA_5)(5mg/kg),观察注后14d和30d组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化以及细胞的MTT活力。结果:(1)BLMA_5 14d组和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数分别多于sham 14d和30d组,(分别P<0.01,P<0.05);但BLMA_5 30d组的细胞数明显少于BLMA_5 14d组(P<0.05);(2)BLMA_5 14d组巨噬细胞增殖指数高于sham 14d组(P<0.05),而BLMA_5 30d组增殖指数低于sham 30d组(P<0.05);(3)BLMA_5 14d和30d组凋亡细胞数分别多于sham 14d和30d组(P<0.01),但BLMA_5 14d组少于BLMA_5 30d组(P<0.05);(4)BLMA_5 14d和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数MTT活力分别高于sham 14d和30d组,分别P<0.01,P<0.05。结论:在肺纤维化形成过程中,肺巨噬细胞增殖能力先增强后减弱;而肺巨噬细胞凋亡始终增加,上述变化是导致肺巨噬细胞数量和功能变化的因素之一。

黄芩苷对博莱霉素诱导的肺纤维化的影响

目的:观察黄芩苷(Bai)对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化的影响,并探讨了可能的机制。方法:68只雄性SD大鼠,随机分为以下4组:BLM+Bai组、BLM+生理盐水(NS)组、NS+Bai组和NS+NS组。气管内一次性滴注BLM(5 mg.kg-1bw)或等体积NS的当天腹腔注射Bai(12.5 mg.kg-1.d-1,×28 d)或等体积NS。检测肺羟脯氨酸含量、肺胶原纤维阳性面积、肺Ⅰ型前胶原[ColⅠ(α)]mRNA表达、肺间质肌成纤维细胞数量。结果:与对照大鼠相比,气管内滴注BLM后第28 d,大鼠的肺组织羟脯氨酸含量增高;肺间质胶原纤维阳性面积增大;肺内ColⅠ(α)mRNA含量增高;肺间质肌成纤维细胞数量增多(均P<0.01)。上述指标的异常变化均在腹腔注射Bai后有所改善(均P<0.05)。结论:Bai有阻止BLM诱导肺纤维化的作用;Bai的上述作用与其阻止肺内Ⅰ型胶原异常合成和阻止肺间质肌成纤维细胞数量增多有关。

硝普钠促肺成纤维细胞增殖和凋亡的作用(英文)

用MTT测定、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法 ,观察了一氧化氮供体硝普钠 (sodiumnitroprusside,SNP)对体外培养的肺成纤维细胞增殖和凋亡以及Bcl 2、Bax和p5 3蛋白含量的影响。结果发现 :MTT吸光度、细胞数和增殖指数 (proliferationindex ,PI)均较对照增加 ;凋亡细胞数也增加 ,但尚不足以出现明显的“梯形”凋亡电泳条带 ;同时 ,细胞内Bcl 2蛋白下调和Bax蛋白上调 ;而细胞内p5 3蛋白含量无明显变化。结果表明 ,外源性NO有增强肺成纤维细胞增殖和凋亡的双重作用 ,但以促细胞增殖为主 ;此作用的分子机制与Bcl 2蛋白下调和Bax蛋白上调有关。

罗格列酮对肺纤维化大鼠肺动脉壁结缔组织生长因子表达的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮(RSG)对肺纤维化大鼠肺动脉壁结缔组织生长因子(CTGF)上调、Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积的影响。方法:48只雄性SD大鼠,随机分为以下4组:博莱霉素(BLM)+生理盐水(NS)组(n=21)、BLM+RSG组(n=9)、NS+NS组(n=9)和NS+RSG组(n=9)。气管内一次性滴注BLM(5mg/kgbw),RSG灌胃(3mg/(kg.d),14d)。整体实验,气管滴注后第14天观察;离体实验,气管滴注BLM后第14天,分离大鼠的肺动脉,并用RSG培养液和单纯培养液孵育(37℃,5%CO2,24h)。结果:在整体水平,与对照大鼠相比,BLM模型大鼠肺动脉壁的CTGF免疫阳性表达增强,CTGF蛋白含量、Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量、Ⅰ/Ⅲ胶原比值均增高(均P<0.05);RSG能阻止上述指标的异常变化(均P<0.05);在离体水平,RSG能阻止BLM模型大鼠肺动脉壁CTGF的上调(P<0.05),但对Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积无明显影响(P>0.05)。结论:RSG能直接作用于肺动脉壁,阻止肺纤维化大鼠肺动脉壁CTGF的上调,这可能是其减轻动脉壁结构重塑的机制之一。

内源性和外源性一氧化氮对正常和滴注博莱霉素大鼠肺泡巨噬细胞生存的调节(英文)

分别用一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和前体L-精氨酸(L-arginin,L-Arg)孵育来自正 常大鼠(alveolar macrophages from normal rats,normal AMs)和滴注博莱霉素大鼠的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages from BLM-treated rats,BLM AMs),以探讨NO对不同状态细胞生存的调节。用凋亡和细胞周期评价细胞生存,细胞内Bcl-2 和Bax蛋白含量探讨其分子机制。结果如下:(1)BLM AMs的凋亡多于normal AMs;G0／G1期BLM AMs数少于normal AMs:S+G2M期BLM AMs数与相应的normal AMs数间的差异无统计学意义;(2)与normal AMs相比,BLM AMs内 Bcl-2下凋,Bax上调;(3)与相应的对照比,SNP和L-Arg能诱导normal AMs和BLM AMs凋亡;L-Arg仅能增加S+G2M 期BLM AMs数:(4)SNP和L-Arg诱导normal AMs内Bcl-2下调和Bax上调,但不能使BLM AMs内的Bcl-2和Bax发生 上述变化:(5)L-Arg下调BLM AMs内的Bax。上述结果显示:NO能诱导BLM AMs和normal AMs凋亡;Bcl-2和Bax 与NO诱导的normal AMs凋亡有关,而与NO诱导的BLM AMs的凋亡无关,提示NO诱导normal AMs和BLM AMs分 子机制不同;内源性NO促进BLM AMs增殖,这可能与其下调Bax有关。

雾化吸入氨基胍对博莱霉素所致肺纤维化的影响

目的:观察雾化吸入氨基胍(AG)对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化的防治作用,并探讨其可能的机制。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为以下4组:博莱霉素+生理盐水(BLM+NS)组、博莱霉素+AG低剂量组(BLM+10mmol/L AG组)、博莱霉素+AG高剂量组(BLM+50 mmol/L AG组)和生理盐水+生理盐水组(NS+NS组)。气管内一次性滴注BLM(5 mg/kg)或等体积NS的当天,给大鼠雾化吸入生理盐水(NS),10 mmol/L AG或50 mmol/L AG,每次5 min,每日2次,持续30 d。检测肺动脉血NO2-/NO3-含量、肺组织羟脯氨酸含量、肺组织病理学变化和肺动脉血中脂质过氧化物(LPO)含量。结果:与对照大鼠相比,气管内滴注BLM后第14 d,肺动脉血NO2-/NO3-含量明显增高(P<0.01),气管内滴注BLM后第30 d,大鼠的肺组织羟脯氨酸含量增高(P<0.05),肺泡炎分级增加(P<0.01),肺动脉血中LPO含量增高(P<0.01)。上述指标均在雾化吸入10 mmol/L和50 mmol/L AG后有所改善(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论:雾化吸入AG对BLM诱发的肺纤维化有防治作用;此作用与其阻止肺内氧化损伤有关。

大鼠侧脑室注射腺苷A1受体反义寡聚脱氧核苷酸抑制脑缺血耐受的诱导

目的:观察侧脑室注射腺苷A1受体(ARA1)反义寡聚脱氧核苷酸(As-ODN)对脑缺血预处理(CIP)脑保护作用的影响,进一步探讨腺苷A1受体在CIP脑保护作用中的作用。方法:将54只凝闭双侧椎动脉的Wistar大鼠分为Sham组、CIP组、损伤性脑缺血组、CIP+损伤性脑缺血组、双蒸水+CIP+损伤性脑缺血组、ARA1As-ODN组、ARA1As-ODN+CIP组、和ARA1As-ODN+CIP+损伤性脑缺血组。ARA1As-ODN的剂量分为10nmol/5μl和20nmol/5μl,溶于双蒸水中,侧脑室注射。所有动物均在Sham手术后或末次全脑缺血/再灌注后7d断头取脑,硫堇染色观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)情况。结果:Sham组和CIP组均未见DND。与Sham、CIP组相比,损伤性脑缺血组出现了明显的DND,表现为组织学分级(HG)升高和锥体神经元密度(ND)下降(P<0.05)。CIP可显著抑制损伤性脑缺血引起的DND。与CIP+损伤性缺血组相比,ARA1As-ODN+CIP+损伤性脑缺血组出现了显著的DND,表现为HG升高、ND降低(P<0.05),这种变化与ARA1As-ODN的剂量呈明显正相关。结论:腺苷A1受体As-ODN可阻断CIP诱导的脑缺血耐受,进一步证实了腺苷A1受体表达上调参与CIP诱导的脑缺血耐受。

炎性痛诱导海马神经元形态学变化及PKC的表达上调(英文)

目的 观察福尔马林诱导炎性痛过程中海马蛋白激酶C的表达和神经元形态学变化,并进一步明确海马与疼痛的关系。方法 SD大鼠被随机分为对照组和实验组,实验组又按照注射福尔马林后炎性痛发生时间分为1h, 3h, 12h, 1d, 3d和7d组。应用组织化学和免疫细胞化学方法观察炎性痛过程中海马神经元形态学变化和PKC活性的改变。结果 注射福尔马林1d后海马PKC免疫反应明显上调,PKC被激活并由细胞核转移到膜结构;而“黑神经元”于注射福尔马林后3d最明显,于第7天有所恢复。PKC的活性与神经元的形态学变化均以海马CA3区明显。结论 实验结果表明海马参与了对伤害性信息的调节,而且PKC与炎性痛过程中神经元的损伤有密切关系。

肺成纤维细胞增殖与其合成胶原功能间的关系

目的 探讨肺成纤维细胞 (FB)增殖与其合成胶原功能间的关系。方法 通过卟啉醇肉豆蔻酸乙酸乙酯 (PMA)和 1 (5 异喹啉基 ) 2 甲基哌嗪 (H 7)改变肺FB的增殖状态 ,观察肺FB数、细胞内DNA中3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)掺入量与细胞新合成蛋白质中3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入量的关系。结果 2 0nmol/L的PMA作用 3d时 ,肺FB数 [(12 .2± 2 .3)× 10 4 个 /孔 ]和细胞内DNA中3 H TdR掺入量 [(1.89± 0 .0 9)× 10 3 Bq]分别较对照组 [(7.5±1.1)× 10 4 个 /孔、(1.6 7± 0 .16 )×10 3 Bq]明显增多 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;但细胞分泌的蛋白质中3 H Pro掺入量 [(6 87.5± 2 0 0 .5 )Bq/ 10 5cells]比对照组 [(1181± 147.5 )Bq/ 10 5cells]却明显减少 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。5 0 μmol/L的H 7作用 3d时 ,肺FB数 [(4.2± 0 .8)× 10 4 个 /孔 ]和细胞内3 H TdR掺入量 [(0 .72±0 .13)× 10 3 Bq]分别较对照组 [(7.5± 1.1)× 10 4 个 /孔、(1.12± 0 .0 8)× 10 3 Bq]明显减少 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但3 H Pro掺入量 [(170 5 .5± 2 5 1.5 )Bq/ 10 5cells]比对照组 [(1181± 147.5 )Bq/ 10 5cells]明显增多 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 肺FB合成胶原蛋白的功能与其增殖状态有关。

雾化吸入氨基胍防止肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子上调

本研究观察了雾化吸入氨基胍(aminoguanidine,AG)对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor,CTGF)上调的影响。大鼠气管内一次性滴注BLM复制肺纤维化动物模型,以气管内滴注等容积的生理盐水(normal saline,NS)作对照。在气管滴注BLM后第1天至第30天期间,给大鼠雾化吸入AG(2mmol/L、10mmol/L或50mmol/L,5min/次,一天两次),以雾化吸入NS作对照。采用硝酸还原法、氯胺-T法、Masson染色法、Western blot和RT-PCR分别检测出肺血浆NO2-/NO3-含量(代表NO含量)、肺羟脯氨酸含量、肺胶原纤维含量以及肺CTGF蛋白和mRNA含量。结果显示:气管滴注BLM后第14天大鼠出肺血浆中NO2-/NO3-含量、气管滴注BLM后第30天大鼠的肺羟脯氨酸含量、肺胶原纤维含量、肺CTGF蛋白和mRNA水平均高于相应的对照组大鼠(均P<0.01);上述指标均在雾化吸入10mmol/L和50mmol/L AG后有所改善(出肺血浆中NO2-/NO3-含量P<0.01,其余均P<0.05)。以上结果表明,AG能有效地防止肺纤维化大鼠肺内CTGF的上调,这可能是其防止肺纤维化形成的作用机制之一。