小鼠生精细胞染色质与染色体构筑的扫描电镜研究(简报)

正常情况下,染色质和染色体在细胞内呈高度致密状态,在光镜和透射电镜下常呈浓染的斑块状。由于方法学上的困难,至今对染色质乃至染色体的微细结构,仍缺乏清楚的了解。特别是关于染色质如何凝缩形成染色体方面,现仍存在有争论。扫描电镜的冷冻割断技术,曾被用于对游离细胞间期核染色质的观察。

顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响。对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP鄄16联合应用具有协同效应。本研究通过DDP与VP鄄16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP鄄16疗效的作用机制。方法:采用VP鄄16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理。应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP鄄16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率。半定量RT鄄PCR法和Westernblot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平。结果:VP鄄16与DDP合用具有明显的协同效应。两药合用后,细胞凋亡率明显增加。单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/mlDDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5μg/mlVP鄄16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%。5μg/mlVP鄄16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高。TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/mlVP鄄16与30μg/mlDDP联合应用时比单用VP鄄16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%。Western印迹检测结果与RT鄄PCR结果相符。结论:DDP在化疗中与VP鄄16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP鄄16提供更多的靶酶,使VP鄄16杀伤K562细胞效果明显提高。

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞周期及相关基因表达的影响

目的:本研究拟从分子水平探讨IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞周期及其相关基因表达的影响。方法:用流式细胞仪检测C6/IL-18细胞周期、细胞增殖指数的变化;以MTT法检测细胞的增殖活性及细胞抑制率,用RT-PCR、Western blot分析C6/IL-18细胞PCNAc、yclin D1c、yclin B1、p21 mRNA及蛋白的表达。结果:与C6/LXSN细胞及亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞周期有所改变,表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)与细胞增殖活性降低。C6/IL-18细胞的PCNAc、yclin D1c、yclin B1 mRNA及蛋白表达降低,p21 mRNA及蛋白表达增高。结论:外源性IL-18基因表达可降低C6细胞的增殖活性,下调PCNA,cyclin D1,cyclin B1表达,上调p21基因表达,其作用机制有待进一步研究。

威猛（Vm－26）对Hela细胞染色体形成的影响

抗癌药物Ｖｍ－２６是一种拓朴异构酶（ＴｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅⅡ，ＴｏｐｏⅡ）及组蛋白Ｈｌ激酶的抑制剂。本文就其对Ｈｅｌａ细胞染色体形成的影响进行了观察。不同浓度的Ｖｍ－２６加入Ｈｅｌａ细胞培养液后４８小时，进行染色体制备，光镜观察。当Ｖｍ－２６的培养浓度在０．５－１．０μｇ／ｍｌ时，染色体的形成被阻断于分裂前期。当药物培养浓度于０．２５μｇ／ｍｌ时，可见有相当数量的细胞处于分裂前期，其胞核内具有不规则的染色质凝缩。另外，尚可见极少的分裂中期染色体集簇形成，但大都伴有染色体的结构异常。结果提示：Ｖｍ－２６可以通过抑制Ｈｅｌａ细胞染色体的形成，而影响细胞正常的分裂、繁殖。

体外培养的神经干细胞聚集体结构分析

观察大鼠神经干细胞聚集体的内部结构并分析其细胞组成。培养神经干细胞 ,分别做HE染色 ;nestin、GFAP、NSE免疫组化 ;细胞超微结构应用扫描电镜和透射电镜观察。结果显示 ,细胞聚集体内有健康细胞和凋亡或坏死细胞 ,后者被前者包裹形成典型的鸟巢状结构。健康细胞分为两大类 ,一种是小细胞 ,电子密度低 ,细胞表面较光滑 ;nestin强阳性和 /或GFAP阳性。另一种细胞较大 ,有突起 ,电子密度高 ,nestin弱阳性。健康细胞间存在粘附连接 ,细胞内可见到吞噬体和板层状膜样结构。推测神经干细胞聚集体内的小细胞是较幼稚的神经干细胞 ,大细胞为处于分化前期的细胞。神经干细胞具有吞噬功能。

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞体内致瘤抑制作用

将转IL-18基因的C6/IL-18细胞接种于SD大鼠颅内,以接种C6细胞为对照。致瘤21天后磁共振成像下测量肿瘤大小。然后行病理切片,HE染色观察肿瘤组织形态学变化;应用免疫组织化学技术检测增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)。应用流式细胞(flow cytometer,FCM)技术检测细胞周期和细胞凋亡的改变,以及记忆性T淋巴细胞抗原CD45RO表达。结果显示,C6/IL-18细胞成瘤体积为(49.3±11.5)mm3;亲代C6细胞成瘤体积为(232.6±22.3)mm3,二者差异明显。HE染色观察可见C6/IL-18细胞形成的肿瘤区内少见病理性核分裂相;瘤组织内肿瘤血管较亲代C6细胞明显减少。C6/IL-18肿瘤细胞核PCNA表达为+++;对照组为++。FCM检测结果表明,C6/IL-18细胞形成的肿瘤S期和G2/M细胞明显减少,细胞凋亡程度明显增加;记忆型T淋巴细胞明显增多。表明IL-18基因转染后可直接抑制C6细胞增殖,并可能通过分泌IL-18激发机体免疫系统应答反应、抑制肿瘤血管生长、降低C6胶质瘤细胞的体内致瘤性。

威猛(VM-26)诱导Hela细胞G_2期停滞及染色体损伤分析

本文采用抗癌药物ＶＭ－２６诱导Ｈｅｌａ细胞周期Ｇ２停滞，并应用染色体预凝集技术，显示其对染色体的影响。结果表明：５μｇ／ｍｌＶＭ－２６作用２４ｈ后，Ｇ２期停滞细胞的染色体异常主要表现为染色体不规则凝缩和较严重的染色体断裂。由此提示；ＶＭ－２６通过抑制拓朴异构酶Ⅱ活性，除可造成的ＤＮＡ和染色质袢的断裂外，染色体骨架本身的断裂或也是引起细胞周期Ｇ２期停滞和细胞死亡的原因之一。

大鼠神经干细胞体外培养

目的:介绍一种较成熟的大鼠神经干细胞体外培养方法。方法:取新生大鼠(1d之内)侧脑室前角周围的脑组织,用EDTA:胰蛋白酶(1:1)消化,制成单细胞悬液,以2-5×105个细胞/ml接种于无血清培养基中。观察其增殖、分化情况,并用nestin、GFAP、NSE免疫细胞化学对细胞进行定性。结果:培养细胞呈悬浮生长,具有增殖能力,倍增时间为2d,nestin阳性。诱导分化后细胞贴壁生长,体积增大,并发出形态各异的突起。可见GFAP和NSE阳性细胞。结论:培养细胞经鉴定为神经干细胞。本方法简单、易操作,可行性强。

一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法

目的介绍一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法。方法采用选择性无血清培养液培养大鼠神经干细胞。纯化培养2或3代后,将其接种于条件培养液中,诱导其向神经元定向分化。用倒置显微镜观察形态学变化,用NSE免疫细胞化学法检测其向神经元分化情况。结果条件培养液可有效诱导神经干细胞向神经元定向分化。将神经球消化成单细胞后接种,不但分化过程比神经球接种更同步,而且可提高其向神经元分化的比例。结论本方法可稳定高效地诱导神经干细胞向神经元定向分化。

双氯芬酸钠滴眼液对培养人晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 研究双氯芬酸钠滴眼液对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法 分离培养人晶状体上皮细胞 ,在培养液内加入双氯芬酸钠滴眼液 ,并以高三尖杉酯碱作为对照。测定药物对细胞的半效抑制量 ;观察药物对细胞贴壁和形态学的影响。结果 双氯芬酸钠滴眼液作用 2 4h对晶状体上皮细胞半效量ID50 为 0 78μg/ml,72hID50 为0 63 μg/ml,作用时间对细胞的抑制率无明显差异 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 2 4h的ID50 无显著差异 (P >0 0 5 ) ,而 72hID50 有明显差异 (P <0 0 5 )。结论 双氯芬酸钠滴眼液对培养人晶状体上皮细胞在体外试验有抑制作用 。