顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响。对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP鄄16联合应用具有协同效应。本研究通过DDP与VP鄄16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP鄄16疗效的作用机制。方法:采用VP鄄16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理。应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP鄄16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率。半定量RT鄄PCR法和Westernblot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平。结果:VP鄄16与DDP合用具有明显的协同效应。两药合用后,细胞凋亡率明显增加。单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/mlDDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5μg/mlVP鄄16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%。5μg/mlVP鄄16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高。TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/mlVP鄄16与30μg/mlDDP联合应用时比单用VP鄄16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%。Western印迹检测结果与RT鄄PCR结果相符。结论:DDP在化疗中与VP鄄16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP鄄16提供更多的靶酶,使VP鄄16杀伤K562细胞效果明显提高。

EGF、bFGF和PHGF对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响

用MTT、流式细胞技术、溴脱氧核甘尿嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入法及免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的方法探讨了表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及促肝细胞生长因子(hepatocyte growth-promoting factor,PHGF)对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖的影响。结果表明bFGF、PHGF对骨骼肌卫星细胞有较强的促增殖作用,且两者之间无差别,bFGF最佳作用浓度为5μg／L,PHGF最佳作用浓度为10 μg／ml。与其他生长因子相比,PHGF价格低廉易于获取,适宜推广。EGF增殖作用不明显。

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞周期及相关基因表达的影响

目的:本研究拟从分子水平探讨IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞周期及其相关基因表达的影响。方法:用流式细胞仪检测C6/IL-18细胞周期、细胞增殖指数的变化;以MTT法检测细胞的增殖活性及细胞抑制率,用RT-PCR、Western blot分析C6/IL-18细胞PCNAc、yclin D1c、yclin B1、p21 mRNA及蛋白的表达。结果:与C6/LXSN细胞及亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞周期有所改变,表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)与细胞增殖活性降低。C6/IL-18细胞的PCNAc、yclin D1c、yclin B1 mRNA及蛋白表达降低,p21 mRNA及蛋白表达增高。结论:外源性IL-18基因表达可降低C6细胞的增殖活性,下调PCNA,cyclin D1,cyclin B1表达,上调p21基因表达,其作用机制有待进一步研究。

大鼠神经干细胞体外生长特性

目的 :观察大鼠神经干细胞的体外生长特性。方法 :利用无血清培养基悬浮培养 ,观察神经干细胞的体外生长过程。并比较不同接种密度 ,不同传代时间对神经干细胞生长的影响。用免疫细胞化学技术检测神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达 ;用吖啶橙 (AO) /溴化乙啶 (EB)检测细胞活性 ;用DAPI荧光染料标记细胞。结果 :神经干细胞聚合成细胞团生长 ,细胞团成分复杂。细胞接种密度以 5× 1 0 5个细胞 /ml组生长较好 ;原代细胞生长 3～ 4d后传代为宜。传代后 4d时可获得大量nestin阳性细胞。DAPI标记率为 1 0 0 %。结论 :细胞团成分复杂。神经干细胞要高密度接种 ,及时传代。

IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响

探讨IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响。用MTT法和流式细胞术检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖特性和细胞周期分布。免疫细胞化学检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白表达。结果显示,与C6细胞相比C6/IL-18细胞的增殖能力降低,G0/G1期细胞增多而G2/M期细胞减少;PCNA、波形蛋白表达降低。研究表明,IL-18基因具有抑制C6胶质瘤细胞增殖、降低其恶性程度的作用。

体外培养的神经干细胞聚集体结构分析

观察大鼠神经干细胞聚集体的内部结构并分析其细胞组成。培养神经干细胞 ,分别做HE染色 ;nestin、GFAP、NSE免疫组化 ;细胞超微结构应用扫描电镜和透射电镜观察。结果显示 ,细胞聚集体内有健康细胞和凋亡或坏死细胞 ,后者被前者包裹形成典型的鸟巢状结构。健康细胞分为两大类 ,一种是小细胞 ,电子密度低 ,细胞表面较光滑 ;nestin强阳性和 /或GFAP阳性。另一种细胞较大 ,有突起 ,电子密度高 ,nestin弱阳性。健康细胞间存在粘附连接 ,细胞内可见到吞噬体和板层状膜样结构。推测神经干细胞聚集体内的小细胞是较幼稚的神经干细胞 ,大细胞为处于分化前期的细胞。神经干细胞具有吞噬功能。

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞体内致瘤抑制作用

将转IL-18基因的C6/IL-18细胞接种于SD大鼠颅内,以接种C6细胞为对照。致瘤21天后磁共振成像下测量肿瘤大小。然后行病理切片,HE染色观察肿瘤组织形态学变化;应用免疫组织化学技术检测增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)。应用流式细胞(flow cytometer,FCM)技术检测细胞周期和细胞凋亡的改变,以及记忆性T淋巴细胞抗原CD45RO表达。结果显示,C6/IL-18细胞成瘤体积为(49.3±11.5)mm3;亲代C6细胞成瘤体积为(232.6±22.3)mm3,二者差异明显。HE染色观察可见C6/IL-18细胞形成的肿瘤区内少见病理性核分裂相;瘤组织内肿瘤血管较亲代C6细胞明显减少。C6/IL-18肿瘤细胞核PCNA表达为+++;对照组为++。FCM检测结果表明,C6/IL-18细胞形成的肿瘤S期和G2/M细胞明显减少,细胞凋亡程度明显增加;记忆型T淋巴细胞明显增多。表明IL-18基因转染后可直接抑制C6细胞增殖,并可能通过分泌IL-18激发机体免疫系统应答反应、抑制肿瘤血管生长、降低C6胶质瘤细胞的体内致瘤性。

威猛(VM-26)诱导Hela细胞G_2期停滞及染色体损伤分析

本文采用抗癌药物ＶＭ－２６诱导Ｈｅｌａ细胞周期Ｇ２停滞，并应用染色体预凝集技术，显示其对染色体的影响。结果表明：５μｇ／ｍｌＶＭ－２６作用２４ｈ后，Ｇ２期停滞细胞的染色体异常主要表现为染色体不规则凝缩和较严重的染色体断裂。由此提示；ＶＭ－２６通过抑制拓朴异构酶Ⅱ活性，除可造成的ＤＮＡ和染色质袢的断裂外，染色体骨架本身的断裂或也是引起细胞周期Ｇ２期停滞和细胞死亡的原因之一。

大鼠神经干细胞体外培养

目的:介绍一种较成熟的大鼠神经干细胞体外培养方法。方法:取新生大鼠(1d之内)侧脑室前角周围的脑组织,用EDTA:胰蛋白酶(1:1)消化,制成单细胞悬液,以2-5×105个细胞/ml接种于无血清培养基中。观察其增殖、分化情况,并用nestin、GFAP、NSE免疫细胞化学对细胞进行定性。结果:培养细胞呈悬浮生长,具有增殖能力,倍增时间为2d,nestin阳性。诱导分化后细胞贴壁生长,体积增大,并发出形态各异的突起。可见GFAP和NSE阳性细胞。结论:培养细胞经鉴定为神经干细胞。本方法简单、易操作,可行性强。

一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法

目的介绍一种诱导神经干细胞向神经元定向分化的方法。方法采用选择性无血清培养液培养大鼠神经干细胞。纯化培养2或3代后,将其接种于条件培养液中,诱导其向神经元定向分化。用倒置显微镜观察形态学变化,用NSE免疫细胞化学法检测其向神经元分化情况。结果条件培养液可有效诱导神经干细胞向神经元定向分化。将神经球消化成单细胞后接种,不但分化过程比神经球接种更同步,而且可提高其向神经元分化的比例。结论本方法可稳定高效地诱导神经干细胞向神经元定向分化。

双氯芬酸钠滴眼液对培养人晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 研究双氯芬酸钠滴眼液对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法 分离培养人晶状体上皮细胞 ,在培养液内加入双氯芬酸钠滴眼液 ,并以高三尖杉酯碱作为对照。测定药物对细胞的半效抑制量 ;观察药物对细胞贴壁和形态学的影响。结果 双氯芬酸钠滴眼液作用 2 4h对晶状体上皮细胞半效量ID50 为 0 78μg/ml,72hID50 为0 63 μg/ml,作用时间对细胞的抑制率无明显差异 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 2 4h的ID50 无显著差异 (P >0 0 5 ) ,而 72hID50 有明显差异 (P <0 0 5 )。结论 双氯芬酸钠滴眼液对培养人晶状体上皮细胞在体外试验有抑制作用 。