ICR小鼠神经干细胞的体外培养与鉴定

目的建立一种简便、易行的ICR小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外分离培养方法。方法分离胚胎ICR小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置显微镜观察细胞形态;免疫细胞化学染色检测特异性标记物神经上皮干细胞蛋白(巢蛋白,nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE);CCK8法绘制生长曲线。结果从ICR小鼠胚脑组织分离的细胞,在无血清培养液中以神经球形式扩增,并可经消化后连续传代。生长曲线显示细胞倍增时间为2d。神经球内nestin阳性细胞率为(72.0±5.5)%。诱导分化后可观察到2种形态的细胞:一种具有长而粗的突起,交织成网,且GFAP阳性;另一种为胞体呈多边形、具有数个细长突起,NSE阳性。结论本方法培养的NSCs纯度高、增殖快,具有多向分化潜能,值得推广应用。

ICR小鼠神经干细胞的诱导分化及鉴定

目的建立一种小鼠神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)的快速诱导分化方法并鉴定诱导分化后的细胞类型。方法将消化后的单细胞在经Matrigel铺底的盖玻片上进行接种,使用倒置显微镜观察诱导分化后不同时间点的细胞形态变化,并采用神经上皮干细胞蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫细胞化学鉴定分化后的细胞类型。结果(1)Nestin阳性细胞在神经球中数量较多,随着诱导分化时间的延长,Nestin阳性细胞逐渐减少,各组间阳性细胞率和各组间两两比较差异均有统计学意义(F=663.680,P<0.05);(2)MAP2阳性细胞仅在神经球中央少量存在,随着诱导分化时间的延长,MAP2阳性细胞逐渐增多。各组间MAP2阳性细胞率的差异有统计学意义,两两比较,2 d组和3 d组间的差异无统计学意义,其他各组间差异均有统计学意义(F=135.049,P<0.05);(3)GFAP阳性细胞在神经球中较多,随着诱导分化时间的延长,GFAP阳性细胞逐渐减少。各组间阳性细胞率和各组间两两比较,差异均有统计学意义(F=36.915,P<0.05)。结论本研究所采用的诱导方法可诱导NSCs快速向神经元分化。