RhoA信号转导通路对乳腺癌细胞Ezrin表达的影响

背景与目的:目前研究证实,RhoA在肿瘤发生发展和浸润转移过程中起重要作用,但其具体作用机制尚不完全清楚。Ezrin已经被证实参与了乳腺癌等多种恶性肿瘤的浸润转移过程。本研究初步探讨RhoA信号转导通路对Ezrin表达的调节作用。方法:给予表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作用MDA-MB-231细胞不同时间后,应用Western blot方法检测细胞内RhoA、RhoA磷酸化形式及Ezrin蛋白表达的变化情况;给予RhoA激酶特异性抑制剂fasudil预处理后,应用Western blot方法在RhoA磷酸化和Ezrin蛋白的表达高峰时间检测二者的表达情况。结果:给予EGF刺激后,p-RhoA水平逐渐升高,于30min时达高峰;RhoA蛋白的表达无明显变化;Ezrin蛋白水平逐渐升高,于24h时达高峰。用fasudil预处理细胞后,EGF诱导的RhoA磷酸化水平受到明显抑制,抑制率为72.73%;同时Ezrin蛋白的表达水平亦受到明显抑制,抑制率为51.28%。结论:RhoA可能作为Ezrin的上游信号转导途径参与调控乳腺癌细胞的浸润转移。

RhoA和Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RhoA和Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法:选用2008年1月至12月河北医科大学第四医院收治的乳腺浸润性导管癌患者术后石蜡标本86例。免疫组织化学染色检测肿瘤组织中RhoA和Ezrin的表达情况,分析其临床病理意义及两者的相关性。结果:86例乳腺浸润性导管癌组织中,RhoA的阳性表达率为60.47%,显著高于乳腺正常导管上皮组织的20%(P<0.05);Ezrin的强阳性表达率为65.12%,显著高于乳腺正常导管上皮组织(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中RhoA的阳性表达和Ezrin的强阳性表达与患者年龄无关(P>0.05),与腋淋巴结转移、组织学分级和TNM分期有关(均P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中RhoA的阳性表达和Ezrin的强阳性表达呈正相关(P<0.01)。结论:乳腺浸润性导管癌高表达RhoA和Ezrin,并在导管癌的发生、发展过程中发挥作用。

小剂量表柔比星对乳腺癌细胞Ezrin表达和迁移的抑制作用

目的:探讨小剂量表柔比星(epirubicin,EPI)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Ezrin表达和迁移能力的影响,以期为临床合理用药提供新的思路。方法:应用RT-PCR、Western印迹法和免疫细胞化学方法分别从基因、蛋白和细胞水平检测在小剂量EPI作用下,人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Ezrin的表达水平及细胞迁移能力的变化,以及Ezrin与E-cadherin和CD44表达的相关性。结果:在不同浓度(1.0、2.5、5.0、10.0μg/mL)EPI作用4h后,乳腺癌细胞的迁移能力受到明显抑制。小剂量EPI以剂量依赖方式从蛋白和基因2个水平抑制乳腺癌细胞中Ezrin和CD44的表达,并且以剂量依赖性方式提高E-cadherin的表达。结论:小剂量EPI可以通过抑制Ezrin的表达,进而降低乳腺癌细胞的迁移能力,这一作用并不依赖其特有的细胞毒性。

反义RNA抑制Ezrin表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的观察特异性阻断Ezrin的表达对人乳腺癌细胞MDA—MB-231和MCF-7的增殖和侵袭能力的影响。方法将anti—pCR3．1-Ezrin质粒经脂质体介导，转染人人乳腺癌细胞MDA—MB-2316、12和24h，应用Westernblot和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测Ezrin的表达变化情况；转染质粒24h后，噻唑蓝（MTF）比色法检测抑制Ezrin对MDA—MB-231和MCF-7细胞体外增殖能力的影响，Boyden小室法检测抑制Ezrin对MDA—MB-231和MCF-7细胞体外侵袭能力的影响。结果转染anti—pCR3．1-Ezrin后，对MDA—MB-231细胞中的Ezrin表达抑制在24h时达高峰。MTY法比色实验结果显示，MDA—MB-231和MCF-7细胞中转染anti—pCR3．1-Ezrin组、转染空质粒组和对照组的A值分别为0．410±0．018、0．765±0．058、0．795±0．061和0．480±0．021、0．632±0．052、0．648±0．059。转染anti—pCR3．1．Ezrin组细胞的增殖受到明显抑制，抑制率分别为（47．9±3．1）％和（32．0±2．8）％（P〈0．05）。Boyden小室法检测结果显示，MDA—MB-231和MCF-7细胞中转染anti—pCR3．1-Ezrin组细胞的侵袭能力分别为对照组的（50．5±3．2）％和（74．8±4．6）％（P〈0．05）。结论Ezrin在乳腺癌的牛长和侵袭过程中发挥蕈要作用。