两种新型实验动物垫料的性状研究

目的测定新开发的实验动物垫料玉米秸、麦秸的物理性状及卫生指标,探索其定型生产的合理流程。方法对玉米秸、麦秸进行合理加工,测定并比较玉米秸、麦秸、刨花的物理性状、化学污染物含量及携带的微生物数量。结果3种垫料的化学污染物指标均低于我国实验动物配合饲料卫生标准的要求。经预真空高压灭菌后垫料中菌落总数、大肠菌群、沙门菌数、真菌数等微生物指标均小于我国配合饲料卫生标准的要求。经预真空高压灭菌后3种垫料刨花、麦秸、玉米秸的含水量平均为(7.52±0.15)%、(7.60±0.13)%、(7.28±0.13)%。吸湿性分别为(290.94±62.58)%(、414.44±81.21)%(、325.84±78.11)%。结论新开发的实验动物垫料麦秸、玉米秸合乎实验动物垫料的性能要求,适合用于啮齿类实验动物饲养。

PCR方法检测实验动物皮肤病原真菌

目的对用于实验动物皮肤病原真菌检测的分子生物学方法即皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR(任意引物聚合酶链式反应)相结合技术的特异性及敏感性进行评价,并通过建立动物模型及实际的皮肤真菌检测来验证此方法的可行性。方法特异性测定:用皮肤病原真菌通用引物进行PCR,扩增大肠杆菌DNA、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22细胞DNA。敏感性测定:以紫外分光光度法测定DNA质量浓度,根据测定值将DNA进行10倍系列质量浓度稀释,得到100 ng^10 fg的8个质量浓度,然后对其进行PCR扩增。建立实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。用皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR相结合技术检测从动物模型及河北省各地的实验动物单位采集的动物皮肤标本。结果用皮肤病原真菌通用引物扩增实验动物三种皮肤病原真菌标准菌株,均扩增出大小为440 bp的条带,而大肠杆菌、犬肝炎病毒、小鼠肝癌H22细胞均未扩增出条带。皮肤病原真菌通用引物PCR敏感性测定,模板DNA 100 ng^100 fg的7个系列浓度均扩增出了阳性条带,10 fg为阴性。建立了实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。对河北省各地的实验动物皮肤真菌检测过程中出现一例通用引物阳性标本。结论皮肤病原真菌通用引物(CHS1 1S,CHS1 1R)具有较强的特异性,敏感度为100 fg;将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合可用于检测实验动物皮肤病原真菌。

用电子表格系统设计实验动物饲料配方的方法研究

利用桑原电子表格系统（ＳＹＢ）对实验动物饲料配方的营养成分进行计算，具有方法简便、速度快和修改调整数值容易等优点，可以省略以往使用手工计算的繁琐过程，与已经开发出的一些计算机设计实验动物饲料配方的运算程序比较，该方法对使用者无需要求太多的计算机运算知识，容易使更多的人掌握使用。

实验动物科学发展趋势及存在问题初探

实验动物科学发展趋势及存在问题初探徐增年李兴琴河北医科大学实验动物学部（石家庄０５００１７）实验动物科学作为生命科学研究基础学科，已受到政府的重视和科学家的关注。为此人们投入了相当可观的人力、物力和财力，以促进本学科的发展。目前，国外发达国家正围绕...

现代实验动物科学基本概念及新近进展

1 基本概念1.1 实验动物:从古代人类就开始驯养各种动物。从古至今,人类与动物有着密切的联系。用现在的观点来看,我们大体可将动物划分为野生物、经济动物、家禽家畜、观赏动物和实验动物(Laboratory animals)等。 本文所称的实验动物,是指经人工饲育,对其携带的微生物实行控制,遗传背景明确或者来源清楚的,用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。 实验动物,家禽、家畜都来源于野生动物。

聚合酶链反应检测实验动物弓形虫核酸的研究

建立弓形虫动物模型，常规方法提取肝、脾、肾、肺等组织DNA，应用聚合酶链反应（PCR）扩增，产物经电泳检测显示199bp的弓形虫特异带谱。并以γ－32p标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针，对扩增产物行Southern印迹分析，结果上述4种标本均出现阳性杂交带，进一步证实扩增条带是弓形虫特异DNA顺序。同时用酶标法检测显示鼠血清弓形虫抗体IgG；阳性。组织病理学检查结果，肝组织损伤较严重，肝细胞肿大，肝窦消失，脾、肾、肺组织可见轻微的病理改变。另外本文介绍一种简单PCR方法[1]，取鼠尾静脉血2μl直接进行扩增，结果与酚-氯仿法提取的DNA扩增结果一致。

用桑原电子表格系统计算实验动物饲料营养成份的方法研究

利用桑原电子表格系统（ＳＹＢ）对实验动物饲料配方的营养成分进行计算，具有方法简便、速度快和修改调整数值容易等优点，可以省略以往使用手工计算的繁琐过程，与已经开发出的一些计算机设计实验动物饲料配方的运算程序比较，该方法对使用者无需要求太多的计算机运算知识，容易使更多的人掌握使用。

实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

目的建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法。方法根据Gen Bank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。结果多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带。肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。结论本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测。

实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价

泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒是实验动物重要的致病病原体,可引起呼吸系统、消化系统疾病,对动物的生产和动物实验可产生不良影响。本文对上述国家检测标准规定必须检测且有检测难度的三种病原体进行方法学总结,以获得更好特异性和敏感性的诊断方法;提出传统方法初检、PCR方法复检的方法以提高检测结果的准确性和可靠性。

近交系HFJ大鼠的培育及其部分表型观察

目的培育高繁殖力近交系HFJ大鼠并观察其部分表型特征。方法以一对Wistar大鼠为基代,通过全同胞近亲交配方式,采用选优法培育高繁殖力近交系HFJ大鼠。采用生化标记法、皮肤移植实验进行遗传质量检测;观察比较其部分表型特征。结果HFJ种群符合近交系标准;其窝产仔数、离乳率、胎次间隔显著高于Wistar大鼠;HFJ大鼠12周龄后生长缓慢,体重低于同龄Wistar大鼠;HFJ大鼠部分血液常规指标及血液生化指标与Wistar大鼠有显著差异。结论HFJ大鼠繁殖力强,是具有独特生物学特性的近交系大鼠。

肥胖易感及肥胖抵抗动物模型的建立与评价

建立肥胖易感(OP)和肥胖抵抗(OR)大鼠模型并进行评价。以高脂饲料喂饲雄性SD大鼠3周。根据体重筛选出OP和OR大鼠。继续喂饲高脂饲料10周,期间检测大鼠体重、体长,计算Lee’s指数、BMI指数。实验结束处死动物,测量体脂肪含量。OP组动物与对照组相比,体重、Lee’s指数、BMI指数、体脂含量等指标均具有显著性差异。OR组动物的各项指标与对照组动物相近,提示用高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗的动物模型造模成功。

高碘对多代仔鼠脑发育和智力影响的实验研究

目的通过对高碘组仔鼠脑组织结构和智力测试的观察，探讨高碘对脑发育和智力的影响。 方法将小鼠随机分为适碘组和高碘组，分别饮含碘５０μｇ／Ｌ和３０００μｇ／Ｌ的去离子水。连续传三代，观察高碘对各代仔鼠脑发育和智力的影响。结果１．高碘组１５日龄仔鼠大脑和海马绝对重量和相对重量均较适碘组低，但尚无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。２．图象分析：高碘组仔鼠大脑皮质锥体层锥体细胞平均体积、平均表面积均较适碘组显著降低（Ｐ＜０．０５），而锥体细胞数密度较适碘组增加（Ｐ＜０．０５）。提示：锥体细胞发育落后。高碘子三代与子一代相比，锥体细胞平均体积进一步减小（Ｐ＜０．０５），数密度进一步增加（Ｐ＜０．０５），提示随着传代次数增多，锥体细胞发育落后程度加重。３．水迷宫实验证实，子一代至于三代，高碘组仔鼠穿越迷宫时间延长，错误次数增加。结论高碘对小鼠脑发育和智力有一定损伤作用，这种损伤随传代次数增加而加重。

犬腺病毒DNA疫苗的免疫实验研究

目的研究犬腺病毒DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop刺激机体产生免疫应答的效果。方法采用2种不同的免疫途径和免疫方案免疫Balb/c小鼠;免疫后每周断尾采血,分离血清测定血清IgG抗体效价;采用MTT和CCK-8方法检测免疫小鼠的T淋巴细胞增殖活性,EIA试剂盒测定IFN-γ的浓度。结果所有接种DNA疫苗的小鼠均产生了针对抗原病毒的特异性IgG抗体。细胞学试验提示构建的犬腺病毒DNA疫苗也可诱导小鼠产生细胞性免疫应答,重组质粒-蛋白联合的免疫方案在刺激机体细胞免疫应答方面优于单一重组质粒。结论以上结果提示犬腺病毒DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop既能诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答,也诱导小鼠产生了细胞免疫应答,对于机体具有一定的免疫保护效果。

复肝春6号抗H_(22)肝癌作用机制的实验研究

目的探讨复肝春6号(FGC-6)抗肝癌作用机制。方法建立荷H22肝癌小鼠模型,以DNA琼脂糖凝胶电泳观察FGC-6对肿瘤细胞诱导凋亡的作用,以W estern b lot检测肿瘤组织中bcl-2、bax基因的蛋白表达水平;制备FGC-6含药血清,观察其对体外培养H22细胞的增殖抑制作用。结果FGC-6可诱导肿瘤组织DNA片段化,琼脂糖凝胶电泳结果可见梯状条带出现;W estern b lot结果显示FGC-6使肿瘤组织中bcl-2基因表达量明显降低,而bax基因的表达水平却明显升高;FGC-6含药血清对体外培养H22细胞增殖有明显抑制作用。结论FGC-6的抗肝癌作用可能与调节bcl-2和bax基因的表达量,诱导肝癌细胞凋亡有关。

3个不同细胞株用于垫料毒性实验的效果比较

目的 选择一种比较敏感的细胞用以进行垫料物质的细胞毒性研究。方法 将不同浓度的垫料物质丙酮提取物分别加入体外培养的小鼠成纤维细胞、小鼠H2 2 H2 D8细胞株和小鼠S1 80 _S2 D9细胞 ,孵育 72h后用考马斯亮蓝法测定总蛋白 ,计算细胞存活率 ,比较 3种细胞对不同垫料丙酮提取物的细胞毒性反应。结果 在 1～ 4 0mg/ml浓度范围 ,H2 2 _H2 D8对各种垫料物质细胞毒性反应最敏感。结论 H2 2 _H2 D8细胞可作为垫料物质细胞毒性研究的细胞株。

L1210克隆细胞肿瘤动物模型生物学特性研究

目的 对L12 10细胞及其 4株克隆细胞建立的肿瘤动物模型的某些生物学特性进行比较研究 ,从中筛选出基本符合L12 10细胞生物学特性且一致性更好的克隆细胞。方法 北京肿瘤所L12 10细胞和 4株克隆细胞腹腔接种DBA 2小鼠 ,观察产生腹水的性质、腹水瘤细胞浓度和致小鼠死亡时间 ;皮下接种DBA 2小鼠 ,观察瘤块的生长情况 ;腹腔注射化疗药物环磷酰胺 (CY) ,比较对CY治疗的敏感性。结果 腹腔接种DBA 2小鼠均能生长腹水 ,其中克隆细胞L2H8、L3B12产生血性腹水 ,L3F9的腹水微血性 ,L3E11与肿瘤所L12 10细胞为无血性腹水 ;腹水瘤细胞的浓度及小鼠生存时间亦有差别。肿瘤所L12 10细胞及克隆细胞L3F9、L2H8、L3E11、L3B12第 10天瘤重依次为 1 9± 0 4 6、1 5± 0 3 8、0 75± 0 5 2、2 6± 0 3 0、2 0± 0 3 3g ;用CY治疗的抑瘤率分别是 4 8 7% ,81 3 % ,86 0 % ,78 7%及 67 1%。结论 4株克隆细胞的生物学特性基本符合L12 10细胞 ,对化疗药物CY的敏感性均高于L12

一种低成本实验室用斑马鱼饲养繁育设备

研制一套成本低廉、操作维护简单且水质水温稳定的适合实验室长期使用的斑马鱼饲养繁育设备。聚碳酸酯小鼠饲养盒改造为独立饲养单元。屏蔽式循环水泵、无规共聚聚丙烯管材管件连接构成循环水路。"M"型生物过滤箱、膜式微孔过滤器、紫外杀菌灯进行养殖水净化。恒温电加热棒、光周期控制器、浮阀式自动补水器等构成自动控制系统。设备操作方便、维护简单。独立饲养单元内水温水质符合使斑马鱼保持最佳健康状态的水质标准。该设备已无故障稳定运行一年,现饲有成年斑马鱼700尾,繁育幼鱼1 530尾,每天至少提供满足实验需求的鱼卵1 500枚。该设备制造及运行、维护成本低,能够为斑马鱼提供良好的环境条件,适合中小型实验室长期使用。

复肝春6号对荷H_(22)小鼠抑瘤作用的实验研究

目的研究复肝春6号(FGC-6)抗肝癌作用及与5-氟尿嘧啶(5-Fu)的协同抗肿瘤作用。方法建立H22荷瘤小鼠模型并随即分为6组:模型组、5-Fu大、小剂量组、FGC-6大、小剂量组、FGC-6与5-Fu联用组,各组连续给药10 d。观察各组小鼠的瘤重;检测荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞分泌IL-2的能力。结果各组用药均可明显抑制H22移植瘤的生长,与模型组比较差异显著(P<0.05);FGC-6与5-Fu联用时,据金氏公式计算q值为1.37,大于1.15;与模型组比较,FGC-6大剂量组及FGC-6与5-Fu联用组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞IL-2分泌能力明显提高(P<0.05),而5-Fu大剂量组的如上3指标均明显降低(P<0.05)。结论FGC-6对H22肝癌移植瘤生长有明显抑制作用,其机制可能与提高荷瘤小鼠机体免疫功能有关;小剂量FGC-6与小剂量5-Fu联用具有协同抗肿瘤作用。

山羊miR-141靶基因预测及生物信息学分析

【目的】探究miR-141在动物机体糖脂代谢和骨代谢中的调控机制,为糖尿病合并骨质疏松症动物模型构建及相关基因表达调控机制研究提供依据。【方法】利用miRbase数据库获取不同物种miR-141成熟序列,通过BioEdit及WebLogo软件进行序列比对及保守性分析;利用PROMO及JASPAR在线软件对山羊miR-141启动子区转录因子结合位点进行预测;利用TargetScan和miRwalk数据平台对miR-141靶基因进行预测;利用DAVID和KOBAS在线软件对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析;利用Networkanalyst数据库建立miRNA靶基因蛋白互作网络并绘制网络调控图;通过YM500V2在线数据库分析miR-141在山羊不同组织中的表达情况。【结果】miR-141成熟序列在不同物种间高度保守;山羊miR-141启动子区分布有转录因子C/EBPα、MyoD、YY1和Sp1等结合位点;选用不同数据库预测到Nfatc2、Egr2和Fasl等89个靶基因。GO功能富集分析发现,靶基因主要富集在RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控与转录DNA模板等生物过程、细胞核与细胞质等细胞组分、蛋白结合与DNA结合等分子功能。KEGG通路富集显示,靶基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞紧密连接、轴突引导、Hedgehog信号通路、cGMP-PKG信号通路与癌症中的microRNA等。miR-141靶基因蛋白互作分析显示,Nfatc2和Egr2基因由Fasl基因连接,构成与其他蛋白相对复杂的靶向关系,这些关键基因参与了与机体糖脂代谢及骨代谢相关的TGF-β、Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路。miR-141在山羊多种组织中均有表达,其表达水平具有组织差异性。【结论】miR-141可通过靶向Nfatc2、Egr2和Fasl基因参与调节Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路,并进一步调控山羊糖脂代谢、肌肉骨骼系统生理生化反应。