以培养学生临床思维能力为中心的实验诊断教学改革探索

实验诊断学是诊断学的重要组成部分,实验诊断学是基础医学和临床医学之间的的桥梁课程之一.其教学对象主要是临床医学专业的学生,教学重点应以培养学生的临床思维能力为核心,以达到使学生学会如何选择实验项目,并利用实验结果对疾病诊断和鉴别诊断的目的,为培养学生的临床思维能力,我们对实验诊断的教学内容及教学模式进行了改革探索.

甲状旁腺激素1-34通过Wnt/β-catenin信号通路阻断晚期糖基化终末产物对骨髓间充质干细胞负性成骨作用

目的观察甲状旁腺激素(PTH)1-34是否可以阻断晚期糖基化终末产物(AGEs)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的负性成骨作用及其可能信号通路。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs,分别给予成骨诱导液、牛血清血蛋白(BSA)、AGEs、AGEs联合PTH1-34预处理,7 d后行实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原酶(COL-Ⅰ)mRNA表达水平,Western印迹法检测β-catenin、osterix(OSX)、核心结合蛋白因子2(RUNX2)、终末期氨基糖基化受体蛋白表达水平。21 d后采用茜素红染色检测矿化结节并定量;在10-8 mmol/L的PTH1-34中加入Wnt通路特异性阻断剂Dickkopf-1(DKK1)1μg/ml后,Western印迹法再次检测β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达水平。结果AGEs抑制ALP、COL-ⅠmRNA及β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达(P<0.05),而PTH1-34预处理后逆转AGEs的作用,ALP、COL-ⅠmRNA及β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达较AGEs组增加(P<0.05),茜素红染色矿化结节呈红棕色且增多,定量检测OD值,PTH1-34预处理组高于AGEs组(P<0.05)。DKK1(1μg/ml)作用后,β-catenin、OSX蛋白表达均较BSA组减少(P<0.05)。结论PTH1-34可通过Wnt/β-catenin信号通路阻断AGEs对BMSCs的负性成骨作用。

AGEs对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中β-catenin、ALP的影响及PTH的干预作用

目的初步探讨在培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)层面,晚期糖基化终末产物(AGEs)对BMSCs成骨分化中β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)的影响,以及甲状旁腺激素(PTH)的干预及其机制。方法取第三代BMSCs,检测AGEs对其增殖的影响。将BMSCs分为对照组、AGEs组、Wnt3a组、AGEs+Wnt3a组;对照组、AGEs组、AGEs+晚期糖基化终末产物受体(RAGE)抗体组;对照组、AGEs组、AGEs+PTH组;对照组、PTH组、PTH+Dickkopf相关蛋白1(DKK1)组,应用Western-blot法检测β-catenin、ALP蛋白的表达。结果BMSCs的增殖可以被AGEs抑制。0.2 g/L AGEs干预BMSCs 7 d,AGEs抑制β-catenin、ALP蛋白表达有统计学差异;给予Wnt通路促进剂Wnt3a后,AGEs作用被抑制,β-catenin、ALP蛋白表达较AGEs组增加;加入10 mg/L RAGE中和抗体共培养,与AGEs组相比,β-catenin、ALP蛋白表达增高。加入PTH后可以逆转AGEs的负性成骨作用,β-catenin、ALP蛋白表达增高;加入Wnt通路阻滞剂DKK1共培养,β-catenin、ALP蛋白表达较PTH组增加。结论AGEs-RAGE通过Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠BMSCs ALP蛋白表达;PTH逆转AGEs对β-catenin、ALP的负性作用。