丝光绿蝇蛹壳颜色变化及其对死后间隔时间推断的意义

【目的】研究不同恒温下丝光绿蝇Lucilia sericata蛹期蛹壳颜色变化,并利用提取的蛹壳RGB值绘制标准色板,为法医学中死后间隔时间(postmortem interval,PMI)的推断提供科学依据。【方法】在16,20,24,28和32℃恒温下分别饲养丝光绿蝇待其发育至蛹期,选取10头蛹为观察样本,每隔12 h定期观察蛹壳的颜色变化,拍照并利用图像分析软件提取蛹期各观察时间点蛹壳颜色的RGB值,再将分析计算后的RGB值还原为标准色板,并采用R软件对蛹发育时间与蛹壳颜色RGB值中的R值的关系进行多元回归分析和拟合。【结果】不同恒温下,丝光绿蝇蛹壳颜色随发育时间均呈现出不均衡的加深趋势,尤其在化蛹初期和临近羽化时变化明显。根据各发育时间的标准RGB值可制作出对应不同恒温的5个丝光绿蝇蛹壳颜色标准色板。【结论】在案发现场,可将检获到的蝇蛹与本研究得到的相近温度下的蛹壳颜色标准色板进行比色鉴定,初步估算蛹期,为死后间隔时间的推断提供科学依据。

大黄对呼吸道合胞病毒感染小鼠的疗效研究

目的:探究大黄对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠的疗效。方法:本研究为实验研究。4~6周龄SPF级雌性Balb/c小鼠42只,采用RSV Long株感染Balb/c小鼠,构建RSV感染动物模型。采用简单随机化法将42只Balb/c小鼠分为6组,每组7只,根据人与动物药物剂量换算方法确定给药剂量。按给予药物情况不同命名为正常对照组(生理盐水)、病毒对照组(生理盐水)、利巴韦林组(利巴韦林45 mg/kg)、大黄低剂量组(大黄35 mg/kg)、大黄中剂量组(大黄70 mg/kg)、大黄高剂量组(大黄105 mg/kg),除正常对照组外滴鼻感染RSV持续2 d,灌胃给药3 d。灌胃结束后,禁食12 h,处死小鼠取肺叶。苏木精-伊红染色检测小鼠肺组织的病理变化,冰冻切片检测组织中病毒荧光变化,蛋白质印迹法检测肺组织内呼吸道合胞病毒携带的绿色荧光蛋白(RSV-GFP)表达水平,病毒空斑实验法测定组织匀浆病毒滴度。实时荧光定量聚合酶链反应检测组织内病毒基因(RSV-N)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达水平。结果:(1)正常对照组小鼠肺组织结构清晰完整肺泡壁较薄,血管周围未见炎细胞浸润性现象,病毒对照组小鼠肺组织出现明显病理改变,间质增厚,组织毛细血管淤血,肺泡壁炎细胞浸润,利巴韦林组、大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组较病毒对照组病变程度均有减轻。利巴韦林组、大黄低剂量组病毒荧光强度与病毒对照组比较降低。(2)5组小鼠RSV-GFP表达水平和病毒滴度比较差异均有统计学意义(F值分别为134.00、36.25,均P<0.001)。大黄中剂量组(0.67±0.06)、大黄高剂量组(0.71±0.08)RSV-GFP表达水平较病毒对照组(1.00±0.00)低(均P<0.05),利巴韦林组(0.25±0.02)、大黄低剂量组(0.25±0.03)RSV-GFP表达水平均较大黄中剂量组(0.67±0.06)、大黄高剂量组(0.71±0.08)低(均P<0.05),且利巴韦林组RSV-GFP与大黄低剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。利巴韦林组(0.36±0.08)、大黄低剂量组(0.39±0.06)的病毒滴度较病毒对照组(1.00±0.00)、大黄中剂量组(0.82±0.06)、大黄高剂量组(0.86±0.15)低(均P<0.05),且利巴韦林组(0.36±0.08)与大黄低剂量组(0.39±0.06)病毒滴度比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)5组小鼠RSV-N和TNF-α基因表达水平比较差异均有统计学意义(F值分别为115.40、14.75,均P<0.001);大黄低剂量组(0.39±0.09)、大黄中剂量组(0.56±0.02)、大黄高剂量组(0.73±0.04)RSV-N基因表达水平均较病毒对照组(1.00±0.00)低(均P<0.05),利巴韦林组(0.26±0.02)RSV-N基因表达水平均较大黄低剂量组(0.39±0.09)、大黄中剂量组(0.56±0.02)、大黄高剂量组(0.73±0.04)低(均P<0.05),利巴韦林组(0.41±0.04)、大黄低剂量组(0.48±0.08)、大黄中剂量组(0.65±0.15)、大黄高剂量组(0.61±0.15)TNF-α基因表达水平均较病毒对照组(1.00±0.00)低(均P<0.05)。结论:大黄可以抑制RSV感染小鼠的病毒复制和炎性因子的过度表达,减轻肺部炎性病理改变。

大黄对呼吸道合胞病毒抑制作用的研究

目的探究在A549细胞中大黄对呼吸道合胞病毒复制的影响及在感染后调节自噬的作用。方法本研究为实验研究,采用呼吸道合胞病毒Long株感染人非小细胞肺癌系A549细胞,构建呼吸道合胞病毒感染细胞模型。使用A549细胞设置感染对照组、利巴韦林组、大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组,在感染呼吸道合胞病毒和大黄处理24 h后,使用免疫印迹法检测细胞内病毒荧光蛋白(RSV-GFP)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)蛋白表达的相对水平,定量聚合酶链反应检测细胞内病毒基因(RSV-N)基因的相对量的表达。在感染呼吸道合胞病毒和大黄处理72 h后,使用CCK8法测定细胞活性,病毒空斑实验法测定上清病毒滴度。设置入胞感染对照组、入胞大黄组;吸附感染对照组、吸附大黄组;灭活感染对照组、灭活大黄组,在感染呼吸道合胞病毒和大黄处理24 h后,使用定量聚合酶链反应检测细胞内病毒基因(RSV-N)基因的相对量的表达,在感染呼吸道合胞病毒和大黄处理72 h后,使用CCK8法测定细胞活性。结果(1)不同浓度的大黄培养A549细胞72 h后存活率比较有统计学意义(P<0.001),与5 mg/L比较,500、1000 mg/L均有统计学意义(均P<0.05),10、25、50、100 mg/L均无统计学意义(均P>0.05),不同浓度利巴韦林培养A549细胞72 h后存活率比较无统计学意义(F=1.02,P=0.442);结果显示对于A549细胞100 mg/L大黄为最高安全剂量,本实验选取25、50、100 mg/L分别作为大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组处理浓度,利巴韦林处理浓度为500μmol/L。(2)大黄低剂量组细胞存活率较感染对照组[(81.43±1.51)%比(37.07±1.59)%]升高、大黄中剂量组细胞存活率较大黄低剂量组[(89.06±1.23)%比(81.43±1.51)%]升高、大黄高剂量组细胞存活率(99.84±1.45)%、利巴韦林组(97.41±1.60)%较大黄中剂量组(89.06±1.23)%升高(均P<0.05)。(3)5组细胞RSV-N基因表达量及上清中的病毒滴度比较差异均有统计学意义(F值分别为41.04、123.50,均P<0.001);利巴韦林组(0.66±0.03)、大黄高剂量组(0.60±0.02)、大黄中剂量组(0.74±0.01)较感染对照组(1.00±0.00)细胞中RSV-N基因表达量下降(均P<0.05),利巴韦林组(0.23±0.10)、大黄高剂量组(0.25±0.10)、大黄中剂量组(0.60±0.14)、大黄低剂量组(0.80±0.14)较感染对照组(1.03±0.16)细胞上清中的病毒滴度下降(均P<0.05),且利巴韦林组病毒滴度与大黄高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)5组细胞中RSV-GFP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白的表达水平比较均有统计学意义(F值分别为42.29、48.72,均P<0.001),大黄低剂量组细胞RSV-GFP较感染对照组降低、大黄中剂量组RSV-GFP较大黄低剂量组降低、大黄高剂量组RSV-GFP较大黄中剂量组降低(均P<0.05),利巴韦林组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(3.34±0.29)、大黄高剂量组(2.81±0.35)、大黄中剂量组(2.93±0.15)、大黄低剂量组(2.73±0.14)较感染对照组(1.00±0.00)升高(均P<0.05),且利巴韦林组RSV-GFP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ与大黄高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(5)在RSV完成入胞后加入大黄通过CCK8检测细胞存活率,qPCR检测RSV-N基因的表达量。入胞大黄组细胞存活率较入胞感染对照组[(94.79±3.55)%比(39.66±2.25)%]升高、入胞大黄组细胞RSV-N基因较入胞感染对照组[(0.04±0.01)比(1.00±0.00)]降低(t值分别为26.24、166.30,均P<0.001),吸附大黄组细胞存活率较吸附感染对照组[(65.31±2.06)%比(38.62±0.96)%]升高、吸附大黄组细胞RSV-N基因较吸附感染对照组[(0.40±0.07)比(1.00±0.00)]降低(t值分别为20.35、14.85,均P<0.001),灭活大黄组细胞存活率较灭活感染对照组[(54.10±2.49)%比(33.10±1.18)%]升高、灭活大黄组细胞RSV-N基因较灭活感染对照组[(0.11±0.02)%比(1.00±0.00)%]降低(t值分别为13.20、74.33,均P<0.001)。结论大黄可降低呼吸道合胞病毒N基因在A549细胞中的表达,同时上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ抑制RSV-GFP蛋白在细胞内的表达。