不育相关泛素特异性蛋白酶USP26的分子克隆及活性分析

目的对克隆泛素特异性蛋白酶26(ubiquitin-specific protease 26,usp26)基因进行表达和活性测定。方法采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),从小鼠全血中扩增获得usp26基因并测定序列。将基因片段与p GEX-6p-1拼接,应用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)使蛋白表达并利用Ub-Met-β-gal鉴定活性。用多重比对方法分析人类、小鼠及褐家鼠usp26基因编码氨基酸序列的差异。结果本实验克隆出usp26基因。构建出p GEX-usp26质粒,该质粒表达出GST-USP26结合蛋白并测得其活性。三个种属含有相同的赖氨酸结构域(Cys box)与组氨酸结构域(His box)特征部位氨基酸。结论 usp26基因克隆并表达成功,完成活性测定,为进一步探索usp26在男性不育机制方面的作用提供了一种活性研究方法。