成年大鼠最后区神经干细胞的检测及鉴定

目的观察性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)和巢蛋白(Nestin)阳性表达细胞及溴脱氧尿密啶核苷(BrdU)阳性标记细胞在最后区的分布。方法成年雄性SD大鼠12只,6～8周龄,随机分为两组,每组6只。一组大鼠按照50mg/kg(0.3ml)腹腔注射BrdU,连续3d给药,每天2次;另一组注射等量生理盐水。4d后灌注大鼠,行免疫组织化学及免疫荧光检测。结果免疫组织化学染色显示,SOX2阳性表达细胞在最后区的腹侧部呈明显的V字形分布,背侧部呈带状分布,中央部散在分布。Nestin阳性表达细胞在最后区的腹侧部呈明显的V字形强阳性分布,中央部呈弱阳性表达。在最后区可见少量阳性BrdU标记细胞。SOX2/BrdU荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/BrdU双阳性细胞。SOX2/Nestin荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/Nestin双阳性表达细胞。结论最后区SOX2及Nestin阳性细胞密集表达,呈明显的区域分布;在最后区内存在少量BrdU阳性标记细胞及SOX2/BrdU和SOX2/Nestin双阳性细胞;最后区可能存在神经干细胞/祖细胞。

雄激素对快速老化小鼠海马神经元凋亡及超微结构的影响

目的:探讨雄激素对快速老化小鼠海马神经元凋亡及超微结构的影响。方法:7月龄雄性快速老化小鼠(SAMP8)随机分为假手术对照组、去势组及去势+雄激素补充治疗组。十一酸睾酮(TU)剂量为37.4 mg.kg-1.15 d-1。雄激素补充治疗45 d后,通过Nissl染色观察海马神经元数量和形态的变化;TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;透射电镜观察超微结构的改变。结果:去势组海马神经元数量明显减少,凋亡数量和凋亡率显著增加,超微结构病理变化严重。雄激素补充治疗后,观察结果与假手术对照组相比无统计学意义。结论:去势后雄激素缺乏可导致海马神经元异常凋亡增加,数目减少,结构受损。雄激素补充治疗可减轻神经元损伤,这可能是其改善SAMP8小鼠学习记忆功能作用机制之一。

乙醇对大鼠脑内5-HT能神经体系的影响

目的观察乙醇处理大鼠脑内色氨酸羟化酶（TPH）、5-羟色胺（5-HT）和5-羟色胺转运体（SERT）的表达改变,判断乙醇对脑内5-HT能神经体系的影响。方法以20%乙醇代替饮水饲养30只Wistar大鼠6个月;利用免疫组织化学、免疫印迹及流式细胞术等方法,分析乙醇处理大鼠有关脑区5-HT能神经体系相关指标的改变。结果1.免疫组织化学法可见,乙醇处理组大鼠脑内中缝背核TPH、5-HT免疫反应阳性神经元数量少于对照组（P〈0.01）;TPH免疫阳性神经元直径小于对照组（P〈0.01）;相关脑区TPH、5-HT和SERT免疫反应灰度值比对照组增高（P〈0.05）。2.流式细胞术检测可见,乙醇处理组大鼠TPH、5-HT和SERT的表达量低于对照组（P〈0.05）。3.免疫印迹法检测可见,乙醇处理组大鼠SERT和TPH与-βactin相对吸光度比值均小于相应对照组（P〈0.05）。结论乙醇降低脑内TPH、5-HT和SERT的表达,可能改变脑内5-HT能神经体系的功能活动。

地塞米松对大鼠两种不同功能运动神经元群树突的影响

目的：探讨地塞米松对大鼠趾长伸肌（EDL，快肌）、比目鱼肌（SOL，慢肌）两种不同功能运动神经元（Mn）群树突的影响。方法：大鼠分为注射生理盐水的对照组和注射地塞米松的实验组以霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶（CB-HRP）逆行标记两Mn群，TMB法显示两运动神经元群被标记的树突；以免疫印迹法显示EDL及SOL糖皮质激素受体含量的高低。结果：与对照组比，实验组EDL-Mn群脊髓外侧索白质树突明显增多，其表面积密度比对照组增加了29．89％，平均树突长度比对照组增加了92．54％；SOL-Mn群脊髓外侧索白质树突表面积密度与对照组相比差异无统计学意义，平均树突长度比对照组增加32．26％；EDL糖皮质激素受体与pactin免疫印迹条带相对吸光度比值明显高于SOL，为SOL的2．5倍。结论：地塞米松明显改变大鼠EDL-Mn群的树突构筑，这很可能与EDL含较高的糖皮质激素受体有关。

己酮可可碱对癫痫大鼠黑质多巴胺能神经元的影响

目的观察己酮可可碱(Ptx)预处理对癫痫发作大鼠多巴胺(DA)能神经元的影响。方法健康、成年雄性Wistar大鼠分为3组:对照组、癫痫组和Ptx预处理组(PTX组)。对照组腹腔注射生理盐水(127mg·kg^(-1));癫痫组和PTX组大鼠用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pc)诱发癫痫发作,先腹腔注射氯化锂(Li,127mg·kg^(-1)),20h后背部皮下注射匹罗卡品(Pc,20mg·kg^(-1));PTX组大鼠在Pc注射前30min通过腹腔给予Ptx(60mg·kg^(-1))。观察大鼠癫痫发作情况;利用免疫细胞化学、蛋白印迹和液质联用检测黑质(SN)DA能神经元功能活动;通过分光光度法检测SN和尾壳核(CPu)处丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物岐化酶(SOD)活性,探讨Ptx预处理对Li-Pc诱发癫痫大鼠DA能神经元的影响及氧化应激的参与。结果 (1)Ptx预处理降低了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作率,显著延长了大鼠的癫痫发作潜伏期(P<0.01);(2)免疫细胞化学和蛋白印迹显示癫痫组大鼠SN和CPu处TH免疫反应强度和蛋白含量比对照组明显降低;与癫痫组相比,PTX组大鼠SN和CPu的TH免疫反应强度和蛋白含量显著增加(均P<0.05);(3)癫痫组大鼠CPu的DA、二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量较对照组明显降低;与癫痫组相比,PTX组大鼠DA、DOPAC和HVA含量显著增加(均P<0.05);(4)与对照组相比,癫痫组大鼠SN和CPu的MDA含量明显增多,GSH含量明显减少,SOD活性显著降低;与癫痫组相比,PTX组大鼠SN和CPu的MDA含量明显降低,GSH含量和SOD活性明显升高(均P<0.05)。结论 Ptx预处理缓解了Li-Pc诱发癫痫大鼠脑内的氧化应激状态和DA能神经元功能活动的降低。

经鼻给予丙酸睾丸酮增加大鼠中脑5羟色胺能神经元的表达

目的：观察经鼻给予丙酸睾丸酮（TP）后大鼠中缝背核色氨酸羟化酶（TPH）及中缝背核、尾壳核与伏核5羟色胺（5-HT）和5羟色胺转运体（SERT）表达的改变。方法：对正常成年雄性及去势大鼠经鼻给予TP21d，利用免疫组织化学观察给药后大鼠中缝背核TPH及中缝背核、尾壳核与伏核5-HT和SERT的免疫反应强度变化。结果：大鼠去势处理降低中缝背核TPH及中缝背核、尾壳核与伏核5-HT和SERT的表达；去势大鼠经鼻给予TP则可提高中缝背核TPH及中缝背核、尾壳核与伏核5-HT和SERT的表达，但未达到假手术水平；正常大鼠鼻腔给予TP后，中缝背核TPH及中缝背核、尾壳核与伏核5-HT和SERT的表达也显著增加。结论：经鼻给予TP增加大鼠中缝背核TPH及中缝背核、尾壳核与伏核5-HT和SERT的表达，为经鼻给予TP辅助治疗衰老过程中出现的运动相关行为障碍及抑郁症状提供实验依据。

鼻腔给予丙酸睾丸酮对大鼠行为及中脑多巴胺能神经元的影响

目的：观察鼻腔给予丙酸睾丸酮（TP）后大鼠行为以及黑质纹状体酪氨酸羟化酶（TH）和多巴胺转运体（DAT）表达的改变。方法：对正常成年雄性及去势大鼠鼻腔给予TP21d，分别利用开放广场实验和免疫组织化学技术观察给药后大鼠的行为及黑质和尾壳核TH及DAT的免疫反应强度变化。结果：开放广场实验结果显示正常大鼠鼻腔给予TP后水平运动得分、垂直运动得分、运动总径长比正常对照组增加；去势大鼠鼻腔给予TP后上述行为比去势组增加，但仍低于正常对照组。免疫组织化学结果显示正常大鼠鼻腔给予TP后黑质和尾壳核的TH及DAT免疫反应强度高于正常对照组；去势大鼠鼻腔给予TP后黑质和尾壳核的TH及DAT免疫反应强度高于去势组，但未达到正常对照组。结论：鼻腔给予TP增加大鼠的运动行为以及黑质和尾壳核TH和DAT的表达。

左旋多巴对大鼠中脑5羟色胺能神经元的影响

目的：观察左旋多巴对大鼠脑内5羟色胺（5-HT）能神经元的影响。方法：左旋多巴大鼠灌胃，以免疫细胞化学和流式细胞术显示5-HT及色氨酸羟化酶（TPH）免疫反应物质或含量的变化。结果：免疫细胞化学显示左旋多巴组大鼠中缝背核5-HT能神经元细胞直径明显小于对照组；中缝背核5-HT和TPH免疫反应物质灰度值比对照组分别增高了7．72％和16．57％。流式细胞术显示左旋多巴组5-HT的表达量比对照组减少了18．45％，TPH表达量比对照组减少了19．90％。结论：左旋多巴降低脑内5-HT能神经元5-HT和TPH的表达。

胶质细胞源性神经营养因子对比目鱼肌切除后相关运动神经元群降钙素基因相关肽表达的影响

目的：探讨鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对比目鱼肌(SOL)切除后相关运动神经元Mn群降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法：应用霍乱毒素B亚单位结合胶体金(CB-Au)逆行标认神经元复合免疫细胞化学反应的非荧光双标法,显示标记SOL-Mn群CGRP样免疫反应(CGRP-LI)。结果：(1)与对照组相比,SOL切除后SOL-Mn群CGRP-LI强阳性Mn比率由正常的23．48%分别上升到68．8%(3d)、65．32% (10d)；此后逐步降低到11．3%(30d)。(2)SOL切除后,鞘内注射GDNF强阳性Mn比率可达70．91%(30d)。结论：鞘内注射GDNF可以显著提高靶肌肉切除后相关Mn群CGRP的表达,提示GDNF对运动神经元的部分神经营养作用可能是通过上调CGRP实现的。

鞘内注射强啡肽A(1-17)对不同功能运动神经元群树突的影响

目的：探讨强啡肽A对大鼠趾长伸肌（EDL，快肌）、比目鱼肌（SOL，慢肌）两种不同功能运动神经元（Mn）群树突的影响。方法：采用脊髓蛛网膜下隙给予强啡肽A，以霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化酶（CB-HRP）逆行标记EDL-Mn、SOL—Mn群，Mesulam-TMB法显示两运动神经元群被标记的树突。结果：与相应对照组比，强啡肽A致一过性后肢瘫大鼠用药后1h，位于腰4～5脊髓节段腹角的EDL-Mn、SOL-Mn群树突的分布范围减小，尤以EDL-Mn群为甚；EDL-Mn平均树突长度比对照缩短59．5％，而SOL-Mn平均树突长度比对照缩短35．6％。永久性后肢瘫大鼠用药后3h，EDL-Mn群仅见胞体和近端树突；与之相比，SOL-Mn群仍保留有较长的树突和较广的分布范围。结论：强啡肽A致一过性后肢瘫大鼠两群运动神经元树突明显受累，且以EDL-Mn群为甚，其差别可能与两群运动神经元所接受强啡肽A信息传入不同有关。

SOX2在成年小鼠室周器官细胞的表达及其意义

目的：检测成年小鼠SOX2在成年小鼠室周器官细胞和脑室下区细胞的表达及其差异。方法：成年BALB／c雄性小鼠，免疫组织化学检测SOX2在室周器官细胞的表达。结果：SOX2在最后区（AP）、正中隆起（ME）、穹隆下器（SFO）、联合下器（SCO）和脉络丛细胞均有强表达，与脑室下区SOX2阳性细胞比较，除SCO外，均有差异。结论：在成年小鼠室周器官分布有大量的SOX2阳性细胞，表明成年小鼠室周器官可能存在具有增殖和分化潜能的神经干细胞／祖细胞。

血管性痴呆小鼠第四脑室外侧隐窝与外侧孔之间室管膜扫描电镜特征

目的 :观察血管性痴呆 (VD)小鼠第四脑室外侧隐窝与外侧孔之间室管膜游离面扫描电镜特征。方法 :采用双侧颈总动脉结扎、再灌注法 ,制作小鼠VD模型 ;用扫描电镜进行观察。结果 :VD模型组小鼠病变较轻的部位纤毛和微绒毛明显减少 ,纤毛扭曲僵折、排列紊乱、倒伏在室管膜细胞表面 ;重者纤毛枯缩、粘连成团 ,微绒毛消失。室管膜细胞分泌颗粒明显增多 ,成堆分布。室管膜上神经元样细胞数目减少 ,胞体扁平、皱缩不饱满 ,树突减少。巨噬细胞样细胞胞体变小 ,表面突起减少。结论 :VD小鼠上述区域室管膜细胞和室管膜上结构存在着超微结构的损伤 ,提示以上形态学的改变是VD发生的重要病理学基础之一。

β-淀粉样蛋白1-42寡聚体诱导的阿尔茨海默病大鼠海马的Bcl-2表达和caspase-3活性变化

目的：研究β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）寡聚体诱导痴呆大鼠脑海马区的Bcl-2表达和caspase-3活性变化及其意义.方法：采用Morris水迷宫法筛选出逃避潜伏期少于60 s的60只SD雄性大鼠随机分为4组,即正常对照组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组.通过脑立体定位仪将Aβ1-42纤维体、Aβ1-42寡聚体注入大鼠右侧脑室,制备AD大鼠模型.RT-PCR法检测大鼠海马Bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA的表达,用免疫印迹测定大鼠海马区Bcl-2蛋白表达和caspase-3活性.结果：与正常对照组及PBS对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达较低,Aβ1-42纤维组Bcl-2的蛋白表达高于Aβ1-42寡聚体组;Aβ1-42寡聚体组的caspase-3 mRNA表达以及caspase-3蛋白活性高于Aβ1-42纤维组.结论：Aβ1-42寡聚体可下调Bcl-2表达,活化caspase-3.

鱼藤酮致帕金森大鼠脑内5-羟色胺和5-羟色胺转运体的表达改变

目的通过观察鱼藤酮处理大鼠脑内相关脑区5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺转运体(SERT)的表达变化,探讨鱼藤酮对5-HT能神经元的影响。方法选用健康成年雄性Wistar大鼠42只,背部皮下注射鱼藤酮制作帕金森病大鼠动物模型,以免疫组织化学染色、免疫印迹法及流式细胞术显示大鼠脑内相关脑区5-HT和SERT的表达变化。结果 1.5-HT:免疫组织化学染色显示,鱼藤酮组大鼠中脑中缝背核5-HT免疫反应阳性神经元数量明显少于对照组(P<0.01),中缝背核和尾壳核5-HT免疫反应强度明显减弱(P<0.01);流式细胞术(间接免疫荧光法)检测显示,鱼藤酮组大鼠5-HT的表达量比对照组明显降低(P<0.01)。2.SERT:免疫组织化学染色显示,鱼藤酮组大鼠中缝背核和尾壳核SERT免疫反应强度明显减弱(P<0.01);免疫印迹法检测发现,鱼藤酮组大鼠中缝背核及尾壳核的SERT与β-actin吸光度比值与对照组相比明显降低(P<0.05)。结论鱼藤酮对5-HT能神经元具有明显的神经毒性。

巢蛋白在成年小鼠室周器官细胞的表达及其意义

目的：检测成年小鼠巢蛋白在室周器官细胞的表达及其意义。方法：成年BALB／c雄性小鼠，免疫组织化学检测巢蛋白在室周器官细胞的表达。结果：巢蛋白在最后区、正中隆起、穹隆下器、连合下器和脉络丛细胞均有表达。大部分巢蛋白阳性表达细胞有长短不一的胞突。结论：在成年小鼠室周器官分布有大量的巢蛋白阳性表达细胞，表明成年小鼠室周器官可能存在具有增殖和分化潜能的神经干细胞／祖细胞。

丙酸睾丸酮早期处理对大鼠行为及脑内多巴胺转运体的影响

目的:观察丙酸睾丸酮早期处理对大鼠行为及脑内多巴胺转运体的影响。方法:分别以开放广场实验及免疫组织化学技术观察丙酸睾丸酮处理大鼠行为及脑内多巴胺转运体(DAT)的变化。结果:开放广场实验显示早期注射丙酸睾丸酮可使大鼠活动增多,表现为水平运动、垂直运动、运动的总径长以及清洁动作次数显著增加;免疫组织化学显色结果表明丙酸睾丸酮处理组大鼠黑质和尾壳核DAT免疫反应强度增强,其灰度值显著低于对照组。结论:丙酸睾丸酮早期处理大鼠活动的增加可能与雄激素影响黑质-尾壳核多巴胺能神经体系有关。

巢蛋白在成年大鼠室周器官细胞的表达

目的：观察巢蛋白在成年大鼠室周器官细胞的表达，并根据巢蛋白阳性表达细胞的位置、大小及形态特点进行分类。方法：成年SD雄性大鼠，经心灌注后，用免疫组织化学检测巢蛋白在室周器官细胞的表达。结果：在正中隆起（64．32％±8．55％）、穹隆下器（15．76％±2．16％）、连合下器（40．15％±6．16％）和最后区（28．85％±4．53％）都可见大量的巢蛋白阳性表达细胞。根据细胞所在位置、大小和形态将其分为5类。Ⅰ类是室管膜细胞，部分室管膜细胞有长10-180μm的胞突；Ⅱ类细胞较小，细胞及细胞核呈圆形或卯圆形，有1-2个纤细长达20-30μm的胞突；Ⅲ类细胞胞体较Ⅱ类大，细胞及细胞核不规则，胞质浅染，无胞突；Ⅳ类细胞及细胞核呈圆形或卵圆形，大部分细胞无胞突，部分细胞有长4-15μm的胞突；Ⅴ类细胞胞体较大，细胞及细胞核呈圆形或卯圆形，有1-3个粗长的突起，并可见2-3级分支，胞突长50-100μm。结论：成年大鼠室周器官有大量巢蛋白阳性表达细胞，有的是具有增殖和分化潜能的神经干细胞／祖细胞，有的是巢蛋白阳性表达的神经元。

己酮可可碱预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响

目的观察己酮可可碱(Ptx)预处理对癫痫发作大鼠海马损伤的影响。方法健康、成年雄性Wistar大鼠分为3组:对照组、癫痫组和Ptx预处理组。对照组腹腔注射生理盐水(127mg·kg^(-1));癫痫组和Ptx组大鼠用氯化锂-匹罗卡品(Li-Pc)诱发癫痫发作,先腹腔注射氯化锂(127mg·kg^(-1)),20h后背部皮下注射匹罗卡品(15mg·kg^(-1));Ptx组大鼠在匹罗卡品注射前30min通过腹腔给予Ptx(60mg·kg^(-1))。观察大鼠癫痫发作情况,利用Timm和Thionin染色分别观察海马苔藓纤维发芽(MSF)和神经元损伤情况。结果癫痫组大鼠在海马苔藓纤维发芽明显增多,并伴有海马神经元的损伤和脱失,Ptx预处理降低了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作率和癫痫发作程度,延长了其癫痫发作潜伏期,减轻了Li-Pc诱发大鼠海马的苔藓纤维出芽及神经元的损伤。结论 Ptx预处理缓解了Li-Pc诱发大鼠的癫痫发作和海马损伤,可能成为治疗癫痫的一种方法。

双氢睾酮对快速老化小鼠海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1的影响

目的探讨双氢睾酮(DHT)对快速老化小鼠(SAMP8)海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响。方法 6月龄雄性SAMP8小鼠21只随机分为假手术组、去势组及去势+DHT补充治疗组,每组7只。DHT剂量为1mg/(kg.d),皮下注射21d后,通过Golgi染色观察海马CA1区顶树突树突棘的变化;免疫组织化学及图像分析检测突触素和NMDAR1表达的改变。结果 1.Golgi染色,去势组海马CA1区顶树突树突棘个数明显减少;DHT补充治疗后,树突棘个数明显增多。2.去势组海马CA1区突触素和NMDAR1的表达明显减少,平均吸光度值明显低于其他组(P<0.05)。DHT补充治疗能明显增加突触素和NMDAR1的表达。结论 DHT可调节海马CA1区突触可塑性,使树突棘密度增多。DHT对突触可塑性的影响可能与其调节锥体细胞的NMDAR1有关。

血管性痴呆小鼠第三脑室室管膜扫描电镜特征观察

目的:观察血管性痴呆(VD)小鼠第三脑室正中隆起室管膜表面扫描电镜特征变化并探讨其意义。方法:采用双侧颈总动脉线结、反复缺血—再灌注法,制作小鼠VD动物模型,并设假手术组作为对照。应用扫描电镜对两组小鼠上述区域进行观察。结果:(1)假手术组:室管膜上皮细胞表面可见较多的纤毛和大量的微绒毛。分泌颗粒丰富,呈圆球形。室管膜上神经元样细胞较多,胞体饱满熏呈梭形或锥体形,突起较多。(2)VD模型组:纤毛和微绒毛均明显减少,且室管膜细胞表面凹凸不平。室管膜细胞分泌颗粒明显减少,且形态各异,有皱缩现象。室管膜上神经元样细胞数量减少,胞体不饱满,树突减少。结论:VD小鼠正中隆起室管膜细胞和室管膜上神经元样细胞存在着超微结构的损伤;本研究发现的上述改变是VD发生的重要病理学改变之一。