2016—2017年河北省三级医院血培养分离细菌分布及耐药性分析

目的了解河北省三级医院血培养分离菌的分布及其对抗菌药物的耐药情况。方法收集2016-2017年河北省细菌耐药监测网三级医院血培养分离细菌的药敏数据,依据美国临床和实验室标准协会2016年标准判定结果。结果血培养共收集细菌17815株,其中革兰阴性菌占54.1%,革兰阳性菌占45.9%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率分别为46.3%和80.0%。葡萄球菌属中没有发现对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺耐药的菌株。屎肠球菌对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的耐药率分别为1.4%、1.9%和0.4%,而粪肠球菌则分别为0.0%、0.6%和1.1%。青霉素耐药肺炎链球菌检出率为5.9%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶阳性分离率分别为65.4%和43.8%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率分别为1.8%和15.7%,对美罗培南的耐药率分别为1.6%和15.7%。铜绿假单胞菌对所测抗菌药物的耐药率均低于30.0%。鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为19.3%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率高达60.9%和53.8%。结论血培养分离菌以革兰阴性菌为主,对常用抗菌药物有不同程度的耐药。加强细菌耐药动态监测,对合理应用抗菌药物具有重要意义。

河北省食管癌高发区贲门腺癌Syk基因甲基化状态研究

目的:研究胃贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)基因启动子甲基化及其蛋白表达情况。方法:采用改进的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和免疫组织化学SP法检测GCA组织及相应癌旁正常组织中Syk基因的DNA甲基化和蛋白表达情况。结果:47例GCA组织中Syk基因启动子的甲基化发生率为31.9%(15/47),显著高于癌旁正常组织(0/47)(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期贲门癌患者中Syk基因甲基化发生率(35.7%)高于Ⅰ、Ⅱ期(26.3%),低分化腺癌组的甲基化发生率(37.0%)高于高、中分化组(25.0%),但差异均无统计学意义。47例GCA组织中Syk蛋白的表达率为17.0%(8/47),与相应癌旁正常组织的Syk蛋白表达率(74.4%,35/47)相比差异有统计学意义(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期患者的Sky蛋白表达率(10.7%)低于Ⅰ、Ⅱ期患者的蛋白表达率(26.3%),低分化腺癌组的蛋白表达率(11.1%)低于高、中分化腺癌组的蛋白表达率(25.0%),但差异均无统计学意义。结论:Syk基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能是GCA发生的机制之一,可作为反映GCA生物学行为的检测指标。

幽门螺旋杆菌疫苗研发研究进展

幽门螺杆菌(Hp)是引起胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等消化道疾病的主要致病菌,已经被世界卫生组织(WHO)列为Ⅰ类致癌因子。目前临床上主要使用抗生素和质子泵抑制剂联合治疗Hp,但随着Hp耐药性的逐年增加,Hp疫苗可能成为根除Hp的最终解决办法。尿素酶、毒力因子、外膜蛋白和鞭毛等成分在Hp感染、定殖和繁殖过程中发挥重要的作用,也成为Hp疫苗开发中潜在的候选抗原,以这些抗原为基础设计的疫苗在动物模型上取得了阶段性研究成果。我们总结了Hp疫苗的研究现状,以期为相关研究提供参考。

后PD-1/PD-L1抑制剂时代肿瘤治疗展望

免疫检查点抑制剂能够重启并维持肿瘤-免疫循环,使抗肿瘤免疫反应正常化。目前,以抗PD-1/PD-L1单抗为代表的免疫检查点抑制剂已显著改善多种恶性肿瘤患者的预后,是免疫治疗的新里程碑。然而,单独使用抗PD-1/PD-L1单抗有效率低,与手术、化疗、放疗和靶向治疗等传统治疗手段的联合应用展现出巨大潜力,且新的免疫检查点抑制剂单药或联合使用也在研究中,从而进入后抗PD-1/PD-L1单抗时代。然而,联合方式和生物标志物的筛选仍然是关注的焦点。本文就免疫检查点抑制剂治疗现状作简要综述并对后抗PD-1/PD-L1单抗时代进行展望。

白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤活性

目的 :研究白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤活性。方法 :用3H介入法分析了白花蛇舌草提取物 (Oldenlandiadiffusaextract,ODE)对小鼠脾细胞的增殖活性 ;用51Cr游离实验测定了小鼠和人杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤活性 ,用ELISA法和生物法研究了B细胞抗体的产生以及单核细胞的细胞因子产生 ,并用3H介入法分析了单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能 ;用层析法、蛋白酶消化法和糖分解处理(即NaIO4 处理 )分析了白花蛇舌草的化学成分。结果 :ODE对小鼠脾细胞的增殖活性有很强的促进作用 ;ODE增强小鼠和人杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤活性 ,增强B细胞抗体的产生以及单核细胞的细胞因子产生 ,并增强单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能。白花蛇舌草的化学成分为 90道尔顿的糖蛋白。结论 :ODE对小鼠和人有免疫调节作用 ,并通过刺激机体的免疫系统杀伤或吞噬肿瘤细胞 ,这些活性可应用于临床调节免疫功能和治疗肿瘤等疾病。

黄芪提取物免疫调节活性的体外实验研究

目的 :研究黄芪提取物 (Astragalusmembranaceusextract ,AME)对人的外周血免疫细胞(PBIC)免疫功能的调节作用。方法 :采用3H TdR掺入法分析AME对外周血单个核细胞 (PBMC)的增殖活性及对外周血粘附单核细胞 (PBAM )吞噬肿瘤细胞的影响 ;采用51Cr释放法测定AME对杀伤性T细胞(CTL)杀伤肿瘤细胞的影响 ;用ELISA法和生物学法研究AME对外周血B细胞 (PBBC)产生IgG及对PBAM产生细胞因子的影响 ;采用SDS PAGE分析AME的蛋白组成。结果 :AME能促进PBMC的增殖 ;提高CTL对肿瘤细胞的杀伤活性 ;增强PBAM对肿瘤细胞的吞噬和产生细胞因子的功能 ;促进了PBBC产生IgG ;AME含有多种蛋白成分。结论 :AME对人免疫功能有增强作用 ,提高了抗肿瘤免疫效应 。

白附子对人T细胞和单核细胞的调节活性

目的 :研究中药白附子的免疫学调节活性。方法 :用3H介入法测定了中药白附子提取物(Rhizomatyphoniiextract,RTE)对小鼠脾细胞和人淋巴细胞的增殖活性 ;用绵羊红细胞花结形成试验分离纯化淋巴细胞后 ,检测了RTE的效应细胞 ;用51Cr游离实验测定了人杀伤细胞和自然杀伤细胞的杀伤活性 ,用ELISA法和生物法研究了单核细胞的细胞因子产生 ,并用3H介入法分析了单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能 ;用层析法分析了白附子的化学成分 ,并用SDS PAGE法测定了其有效成分的分子量。结果 :RTE对小鼠脾细胞和人淋巴细胞的增殖活性有很强的促进作用 ,并有较好的量效关系 ;RTE的效应细胞是T细胞 ;RTE增强人杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤活性和自然杀伤细胞的非特异性杀伤活性、增强单核细胞的细胞因子 (肿瘤坏死因子和白细胞介素 1)产生 ,并增强单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能。白附子的化学成分为 66道尔顿的糖蛋白。结论 :RTE对人的T细胞和单核细胞有免疫增强作用 ,并通过刺激机体的免疫系统杀伤或吞噬肿瘤细胞和外来抗原 ,这些活性可应用于临床调节免疫功能和治疗肿瘤等疾病。

香加皮乙酸乙酯提取物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的:研究香加皮乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from Cortex Periplocae,CPEAE)诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度CPEAE对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的抑制作用;应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察凋亡细胞形态;应用流式细胞术分析CPEAE对细胞凋亡率的影响;RT-PCR法检测用药前后细胞凋亡相关基因survivin和bax的mRNA表达情况。结果:CPEAE呈浓度及时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为(0.943±0.005)μg/mL。CPEAE作用48 h后MCF-7细胞发生了特征性的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰,2.0μg/mL CPEAE作用72 h时细胞的凋亡率达(30.24±1.26)%。CPEAE作用后MCF-7细胞的survivin mRNA表达降低,而bax mRNA表达增加。结论:香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)可诱导乳腺癌细胞系MCF-7发生凋亡,可能通过下调survivin基因、上调bax基因的mRNA水平而发挥诱导细胞凋亡作用。

连翘叶乙醇提取物对人食管癌细胞增殖抑制作用的研究

目的研究中药连翘叶乙醇提取物体外对食管癌细胞增殖的影响及对TE-13细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法应用MTT法分析不同浓度连翘叶乙醇提取物(ethanol extract of Forsythia sus-pense leaf,FSEE)对人食管癌细胞TE-13、TE-1、Yes-2和Eca-109增殖的影响;光学显微镜下观察经FSEE处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察TE-13细胞凋亡的形态学变化;经Annexin V/PI双染后用流式细胞术检测FSEE对TE-13细胞凋亡率的影响;用不同浓度(0.1、0.2、0.5mg/ml)FSEE作用于TE-13细胞24 h后,分析细胞PARP、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达的变化。RT-PCR法检测FSEE对TE-13细胞凋亡相关基因Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xL、Bax mRNA表达的影响。结果 FSEE对人食管癌细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);经FSEE处理24 h后,TE-13细胞出现明显的凋亡形态学改变,TE-13细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较差异有统计学意义(P<0.01);经0.1、0.2、0.5 mg/mlFSEE作用24 h后,TE-13细胞PARP、Caspase 3、Caspase 9蛋白出现裂解片段,并随药物浓度增加,裂解片段浓度升高,呈浓度依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。经FSEE处理后,TE-13细胞BaxmRNA表达上调,Bcl-2和Bcl-xLmRNA表达水平下调。结论 FSEE在体外可明显抑制食管癌细胞的增殖,诱导TE-13细胞凋亡,其机制可能与其通过Caspase依赖性的内源途径诱导细胞凋亡有关。

中药五加皮提取成分抗肿瘤活性作用机理研究

目的研究五加皮提取成分(Acanthopanaxgracilistylusextract,Age)对肿瘤细胞的作用机理。方法采用〔3H〕TdR掺入法测定肿瘤细胞增殖反应;用流式细胞技术分析Age对肿瘤细胞周期的影响;用蛋白印迹技术检测Age对肿瘤细胞Rb(retinoblastoma)、Cdk(cyclindependentkinases)等酶类的影响。结果体外细胞活力试验证明,Age仅抑制肿瘤细胞增殖,并不导致细胞死亡。在Age的作用下,肿瘤细胞增殖停止在细胞周期的G0/G1期,而未见直接的细胞毒效应。Age可诱导Rb、Cdk2和Cdk4表达降低,使细胞停止增殖。结论Age对肿瘤细胞的作用机制是通过调节控制细胞周期的酶类而发挥作用的。

miR-92b通过调控EZH2基因的表达抑制食管癌细胞Eca109的增殖和侵袭

目的:探讨食管癌(esophageal carcinoma,EC)细胞中miR-92b对组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016年1月至2017年1月15例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic分别转染人EC细胞Eca109后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2基因的靶向调控作用。同时将EZH2过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs和EZH2表达变化对EC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01)。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a及miR-25可与EZH2基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b可以调控EZH2基因的表达,且miR-92b表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),对Eca109细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic转染能抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2过表达质粒后,miR-92b mimic对ECa109细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论:miR-92b可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2的表达有关。

香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制。方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化。结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05)。结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡。

淫羊藿苷(ICA)对化疗后免疫抑制小鼠的免疫促进作用

目的:通过观察淫羊藿苷(ICA)对化疗药环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨ICA促进免疫功能的作用及机理。方法:除正常组小鼠外,所有小鼠经腹腔注射Cy(300 mg/kg);第二天开始给予实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA[150、804、0 mg/(kg.d)],阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1 ml/d),模型组给予等量生理盐水,连续干预10天。所有小鼠均于末次给药12小时后处死,计算胸腺指数(TI)和脾指数(SI),光镜下计数外周血和脾淋巴细胞数量。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。ELISA法检测TNF-α的含量。乳酸脱氢酶实验(LDH)检测小鼠脾脏NK和CTL细胞的活性。流式细胞术(FACS)检测脾淋巴细胞中NKT和CD3+T细胞的比例。结果:模型组小鼠以上各项免疫指标均有所下降。ICA处理组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.01),脾淋巴细胞数量显著增加(P<0.01),但未达到正常对照组水平;ICA明显提高小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,促进了小鼠脾NK和CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性(P<0.01),提高了小鼠脾细胞TNF-α的产生(P<0.01)。ICA处理组小鼠脾细胞中CD3+T、NKT细胞比例明显增加(P<0.01)。结论:ICA能促进小鼠免疫功能,具有逆转化疗后小鼠免疫抑制状态的作用。

中药五加皮抗肿瘤作用体内外实验研究

目的 :分离中药五加皮抗肿瘤活性物质 ,研究五加皮提取物在体内外的抗肿瘤细胞作用 ,为五加皮抗肿瘤新药开发、研制提供依据。经皮下注射肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型 ,通过灌胃给药检测五加皮提取物的体内抗肿瘤作用。方法 :用3H TdR掺入法测定了肿瘤细胞增殖反应 ;用凝胶层析法初步分离、纯化了五加皮抗肿瘤成分。结果 :五加皮提取物对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用 (P <0 0 1) ,而且有较好的量效关系。五加皮提取物经口投入荷瘤小鼠后 ,实验组小鼠一般情况较对照组小鼠好 ,肿瘤生长较慢 ,生存期明显延长 (P <0 0 1)。经凝胶层析分析 ,分离得到一种对肿瘤细胞增殖反应有抑制作用的蛋白质成分 ,分子量为 6 4kda。结论 :中药五加皮不仅在体外对多种肿瘤细胞增殖有抑制作用 ,在体内也有较好的抗肿瘤效果。其抗肿瘤活性与一种分子量为 6 4kda的蛋白质成分有关 ,该成分的进一步分离、纯化和作用机理研究 ,对五加皮抗肿瘤作用的临床应用和新药开发提供科学依据。

北豆根提取物对小鼠和人淋巴细胞及巨噬细胞作用的体外实验研究

目的 :探讨中药北豆根提取物的免疫学调节作用及其作用机制 ;比较北豆根水提物、醇提物和多糖成分的生物学活性。方法 :采用水提取、醇提取及水回流等方法对北豆根进行成分分离。采用MTT法、中性红法检测了北豆根提取物对淋巴细胞增殖的作用以及对小鼠巨噬细胞代谢和吞噬功能的影响。结果 :北豆根多糖成分 (RMP)具有丝裂原样作用 ,可刺激小鼠脾细胞及人淋巴细胞增殖 ,对小鼠巨噬细胞的吞噬功能有一定的促进作用。而北豆根水提物 (RMW)和醇提物 (RME)对小鼠脾细胞、人淋巴细胞的增殖具有抑制作用 ,对小鼠巨噬细胞的代谢及吞噬功能也有抑制作用。结论 :不同的北豆根成分对免疫细胞有不同的作用 ,水提物和醇提物对免疫细胞的增殖、代谢和功能具有一定的抑制作用 ;北豆根多糖成分对淋巴细胞具有丝裂原样作用 ,能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能 ,该活性可用于临床辅助治疗肿瘤。

淫羊藿苷对化疗后小鼠骨髓和细胞免疫抑制作用的影响

目的:观察淫羊藿苷(ICA)对环磷酰胺(Cy)所致小鼠骨髓和免疫抑制作用的影响,探讨ICA促进化疗后小鼠造血功能和免疫功能的作用及机制。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,阳性对照组,ICA高、中、低剂量组。除正常对照组小鼠外,其余各组小鼠均腹腔注射Cy(200mg/kg)。第2天开始,对ICA高、中、低剂量的实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA(150、80、40mg/kg.d),阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1mL/d),模型对照组给予等量生理盐水,连续给予10d。经HE染色后观察小鼠胸腺组织结构的变化。用MTT比色法检测脾淋巴细胞的增殖率。用乳酸脱氢酶(LDH)法检测腹腔巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。用ELISA试剂盒检测混合细胞培养上清中TNF-α和IL-12的含量。用全自动血液分析仪检测外周血红细胞、白细胞和血小板数量的变化;外周血和股骨骨髓涂片经瑞氏-吉姆萨染色后,光镜下计数单根股骨骨髓细胞(BMC)的数量。结果:ICA具有保护小鼠胸腺、骨髓免受Cy损伤的作用。不同剂量的ICA组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力增加,巨噬细胞吞噬能力和分泌细胞因子的能力均增强,外周血红细胞、白细胞和血小板数量均明显上升。结论:ICA可逆转Cy化疗后小鼠骨髓造血和免疫功能的抑制状况。

miR-124通过靶向BECN1基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170细胞的侵袭和迁移

目的:探讨mi R-124通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:食管癌KYSE170细胞转染mi R-124 mimic,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证mi R-124对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting分析对BECN1、P62及LC3蛋白表达水平的影响。向KYSE170细胞中转染BECN1 si RNA沉默BECN1的表达,Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting检测BECN1、P62及LC3蛋白的表达。将mi R-124 mimic与BECN1过表达质粒共转染至KYSE170细胞,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting检测自噬相关基因表达的变化。结果:转染mi R-124 mimic后,KYSE170细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62表达增高,LC3表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1使mi R-124 mimic对KYSE170细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62表达降低、LC3蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论:mi R-124能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1的表达影响细胞自噬有关。

Celecoxib下调NF-кB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确。本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-кB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡。方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2mRNA的表达。MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化。Westernblot法检测0、40、80、120μmol/LCelecoxib作用MDA-MB-231细胞24h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化。结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低。Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡。Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调。结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-кB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的:Wnt/β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT-PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c-myc和cyclin D1 mRNA的表达。结果:CPP明显抑制SW480细胞增殖(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;0.5μg/mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的β-catenin表达均明显降低(P<0.01),细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降(P<0.01),而β-catenin mRNA表达未见明显改变。结论:CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。