病毒性肝炎患者血清IL-6和T细胞亚群的关系

采用ＭＴＴ比色法和抗体致敏的红细胞花环试验（间接法）检测了９１例病毒性肝炎患者血清ＩＬ－６和Ｔ细胞亚群。结果显示，病毒性肝炎患者血清ＩＬ－６活性均明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）；以重型肝炎为最高；且与肝细胞损害程度呈正比（Ｐ〈０．０１）；ＣＤ４＾＋细胞、ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋均明显降低，与血清ＩＬ－６呈负相关；ＣＤ８＾＋细胞明显增高，与血清ＩＬ－６呈正相关（Ｐ〈０．０１）。表明。

带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证

目的构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系。方法以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞提取质粒,测序正确后将pcDNA3.0-Flag和pcDNA3.0-Flag-Sirt4分别转染肝癌细胞HepG2,Western印迹实验鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌细胞HepG2生长的影响,Transwell证明Sirt4对肝癌细胞HepG2体外侵袭能力的影响。结果双酶切结果显示,pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功;Western印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达Sirt4基因抑制HepG2细胞增殖,Transwell证明过表达Sirt4明显抑制HepG2细胞体外侵袭能力。结论pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功,过表达Sirt4基因可抑制肝癌细胞增殖及体外侵袭能力,为进一步研究Sirt4在肝癌中的发生与发展奠定了基础。