纳米银涂层可吸收线吻合小鼠肠壁近期抗炎疗效的实验研究

目的探讨纳米银涂层可吸收缝合线的近期抗炎疗效。方法采用化学涂层法将纳米银颗粒涂层在普通可吸收缝合线(Vicryl suture,4-0,Polyglactin 910)表面,制备纳米银涂层线。12只Balb/C小鼠随机分3组:普通可吸收线、抗菌可吸收线和纳米银涂层可吸收线。在小鼠回肠制备肠切开模型后,分别采用上述3组缝线行单层间断端端吻合。术后7天取材吻合口处肠管组织标本,连续冰冻切片进行白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、增殖性细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)免疫组化观察和半定量分析。结果免疫组化和半定量分析显示纳米银涂层可吸收线组吻合口处IL-6和TNF-α表达最少,普通可吸收线组IL-6和TNF-α表达最多(普通、抗菌和纳米银涂层可吸收线IL-6的光密度值分别为0.25±0.03、0.19±0.02、0.10±0.02,F=41.378,P=0.000;TNF-α光密度值分别为0.39±0.04,0.29±0.03,0.13±0.02,F=77.885,P=0.000)。PCNA标志物染色显示纳米银涂层线组吻合口内增殖细胞数量最多[(48.0±7.6)个,(83.5±14.2)个,(126.5±13.2)个,F=42.857,P=0.000]。结论纳米银涂层可吸收线用于肠切除肠吻合之后,吻合口处炎症反应轻微,组织细胞增生和修复明显。

脱蜡丝线与传统丝线介导腹壁线结周围炎症反应的实验研究

目的分别采用传统丝线与脱蜡丝线在小鼠腹壁缝合打结,探讨术后早期线结周围炎症细胞浸润及迟发型超敏反应情况,比较两种丝线的差异性。方法研究时间为2017年11月至2018年1月。实验动物为12只Balb/C小鼠。传统丝线组采用无菌4-0带针慕丝线,取9只小鼠,随机分为皮下组、肌内组、腹膜外间隙组3个亚组,每组3只,术后7天取材。脱腊丝线组取3只小鼠,只在腹膜外间隙打结,术后5天取材。进行HE染色及免疫组织化学染色。结果各组肉眼下均未见明显异物反应和线结所致的组织学硬块。HE染色可见线结准确位于腹壁的不同解剖学位置。传统丝线组术后7天的免疫组织化学结果显示,皮下组、肌内组、腹膜外间隙组小鼠的线结周围均未见巨噬细胞浸润(F4/80标志物)和炎症蛋白(IL-6、TNF-α标志物)表达。脱腊丝线组术后5天的免疫组织化学结果显示,小鼠腹膜外间隙线结周围可见明显的巨噬细胞浸润、炎症蛋白表达、MHCⅠ/Ⅱ和CD4浸润,以及抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC)和T淋巴细胞生成的细胞外基质,提示发生迟发型超敏反应。结论脱腊丝线在腹壁组织内打结术后5天时,即可诱导线结周围的迟发型超敏反应及异物炎症反应,而传统丝线因表面具有蜜蜡而延迟了异物炎症反应的发生。

自体外周血单个核细胞血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病的研究

目的 评价动员后自体外周血单个核细胞（PBMNCs）经血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病的临床疗效及影响因素。方法确诊严重的动脉硬化闭塞症（ASO）患者38例、糖尿病足（DMF）65例和血栓闭塞性脉管炎（TAO）2例，分别给予粒细胞集落刺激因子（G-CSF）300μg肌肉注射，每日2次。第3天时采集和分离PBMNCs，配成单个核细胞混悬液。经皮微球囊扩张狭窄动脉，同时将分离的PBMNCs通过导管腔内注入缺血部位。观察12个月，进行各项指标综合评估。结果PBMNCs移植后，患肢冷感、间歇性跛行等临床症状不同程度好转。跛行距离由入院时的（24．0±14．8）m逐渐提高到12个月时的（642．0±224．1）m，表现为持续延长（P〈0．01）。溃疡于移植后1～3个月逐渐愈合。踝肱指数（ABI）短期明显提升，由入院时的0．60±0．07提高到1个月的0．84±0．11，12个月时略有下降，为0．70±0．07，但仍高于入院时的水平。移植前后未出现任何并发症和不良反应。结论采用动员后的PBMNCs经血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病，方法简单、安全、有效，值得进一步深入研究。

脱蜡丝线线结在小鼠腹壁不同解剖层次诱导早期局部免疫应答的组织学研究

目的探讨脱蜡丝线在腹壁不同解剖层次内的线结诱导早期局部免疫应答的情况,并分析传统丝线蜜蜡涂层降解后的影响。方法采用10~12周Balb/C小鼠共18只。4-0带针慕斯线经脱蜡处理。每只小鼠的腹壁从左向右分3组打结:皮下组、肌层组和腹膜外间隙组。术后1周取材以线结为中心的全腹壁组织。免疫组织化学染色了解线结周围抗原肽-主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ/Ⅱ、CD4、巨噬细胞标志物F4/80、IL-6的表达水平,测量积分光密度(integral optical density,IOD)和面积(area)并计算出平均光密度(optical density,OD)。OD=IOD/Area。Masson染色了解线结周围纤维化情况。统计学方法采用ANOVA分析和student’s t检验。结果HE染色可见线结准确位于腹壁不同解剖学层次和位置。免疫组织化学结果显示,线结周围抗原肽-MHCⅠ/Ⅱ类分子复合物的表达、CD4分子表达、巨噬细胞浸润和IL-6表达情况,皮下组表达最明显,腹膜外间隙组表达最轻微,3组间差异具有统计学意义(P值均<0.05)。Masson染色显示,皮下组线结周围有较多胶原蛋白生成,而腹膜外间隙组线结周围胶原蛋白较少。结论传统丝线涂层降解后可诱导小鼠腹壁局部免疫应答,线结位于小鼠腹膜外间隙引起的炎症反应轻微。

采用电切法建立小鼠皮肤线形深Ⅱ°烫伤模型

目的采用电切法建立小鼠皮肤线形深Ⅱ°烫伤模型,观察线形烫伤切口边缘的形态和组织损伤的深度,探讨该方法的可行性和可控性。方法采用10~12周龄Balb/C小鼠,腹腔麻醉后对背部皮肤经脱毛处理,俯卧位固定于操作平台。高频电刀阴极板卷曲包绕鼠尾,开启高频电刀,将电切档调节到15~18 J。用镊子提起小鼠背部全层皮肤,采用针式电刀尖头刺入皮内,匀速纵向划出1 cm长切口,单层无菌纱布覆盖伤口。于术后12 h采用断髓法处死小鼠,取材烫伤部位全层皮肤标本(面积:1.0 cm×1.0 cm),常规行固定、脱水、石蜡包埋,沿着纵行切口断端平面平行切片(厚度5μm),所切组织贴近断缘处线形烫伤组织。HE染色观察组织学形态。结果HE染色显示,线形伤口创面可准确累及全层皮肤,镜下表现为烫伤深度达“皮肤真皮网状层和部分皮下组织层”,包括皮肤肌层。断面形态学观察可见:表皮和真皮网状层因烫伤瞬间能量释放引起的组织凝固性坏死;表皮内的毛芽和真皮内毛囊、毛干结构消失;真皮内的胶原蛋白液化、空泡变形;损伤可部分累积皮肤肌层,肌纤维出现断裂;皮下组织反应性增厚,有炎症细胞浸润。结论外科高频电刀电切法可制备细胞和组织损伤深度符合线形皮肤深Ⅱ°烫伤的小鼠模型,具有稳定可靠、简单易行、造模周期短、实用性较好的优势。

6种固定液对小鼠皮肤急性炎性反应冷冻组织切片免疫组织化学染色效果的比较

目的探讨不同固定液对小鼠冷冻切片免疫组织化学染色的影响,筛选出相对适合的固定液。方法选取Balb/C小鼠2只,制作皮肤炎性反应模型。小鼠麻醉后剃除背部皮肤表面的毛发,局部暴露于70℃热水中35 s,形成1处1.5 cm×1.5 cm的深Ⅱ°皮肤烫伤,第7天取材,部位为以烫伤为中心的大小2.5 cm×2.5 cm全皮层组织,包埋后冷冻连续切片。取1组切片,即刻进行免疫组织化学染色,EAF(85%丙酮+10%甲醛+5%醋酸)、AAF(85%无水乙醇+10%甲醛+5%醋酸)、甲醛钙(100%甲醛+1%氯化钙)、甲醛(10%)、丙酮(100%)、乙醇(95%)6种固定液分别染色4张,2张切片不经固定液处理;取另一组切片,先采用丙酮、乙醇分别固定4张,另有2张切片不经固定液处理,再在-20℃保存14 d后取出进行免疫组织化学染色,检测表达于巨噬细胞胞浆的F4/80和表达于细胞膜表面的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)受体。结果小鼠皮肤炎性反应模型造模成功,HE染色结果提示炎性反应。即刻染色的切片中,F4/80表达结果显示,AAF、EAF、甲醛、甲醛钙固定切片为阴性,丙酮、乙醇固定和未固定切片为阳性;TNF-α表达结果显示,AAF、EAF固定切片为阴性,甲醛、甲醛钙、丙酮、乙醇固定和未固定切片为阳性。低温保存2周后,丙酮、乙醇固定切片的TNF-α阳性表达低于即刻染色组,但F4/80表达未见明显差异。结论不同固定液对冷冻切片的免疫组织化学染色结果有影响。丙酮和乙醇固定液更适用于炎性组织冷冻切片的固定,是相对理想的固定液。

丝线线结在小鼠腹壁不同解剖层次异物炎症反应的组织学观察研究

目的小儿腹腔镜监视下经腹壁腹膜外内环结扎后有时会出现线结反应。本研究旨在探索腹壁不同层次打结与线结炎症反应的相关性。方法Balb/C小鼠随机分组，在同一小鼠腹壁左向右分别纵向剪开3个皮肤切口（0.5 cm长），分别经切口处用无菌平镊提起全腹壁，采用4-0带针慕斯线进针贯穿腹壁至壁腹膜内，经切口直视下经原针孔采用钩针将带针丝线折返钩出，经原线道出针，分别打结于皮下、肌层内和腹膜外间隙。术后7 d、14 d取材打结部位腹壁标本，连续冷冻切片用于组织学观察和分析。结果HE染色显示各组线结位于腹壁不同解剖层次内（皮下、肌层和腹膜外间隙组）。免疫组织化学和半定量检测显示术后14 d标本皮下组线结周围巨噬细胞、IL-6和TNF-α的表达，异物巨细胞浸润，以及纤维化最显著，腹膜外间隙组线结周围巨噬细胞、IL-6和TNF-α的表达，异物巨细胞浸润，以及纤维化最轻微。结论丝线用于腹壁打结深度与线结异物反应呈相关性；线结位于腹膜外间隙引起异物炎症反应轻微，皮下线结异物炎症反应明显。提示对于腹腔镜监视下经腹壁腹膜外内环结扎术，将线结打在腹膜外间隙有利于降低线结炎症反应和线结反应相关并发症的发生率。

小鼠腹壁不同解剖层次丝线线结周围异物巨细胞浸润和纤维化程度的组织学比较

目的比较腹壁不同层次线结周围异物巨细胞浸润和纤维化程度,探索打结深度与线结炎症反应的相关性。方法 18只Balb/C小鼠在腹壁左向右分别纵向剪开3个皮肤切口,分别经切口用4-0带针慕斯线进针贯穿缝合腹壁至壁层腹膜不同层次,3个切口处分别打结于皮下、肌层内和腹膜外间隙。术后14和28 d取材打结部位腹壁标本,连续冰冻切片组织学观察。结果 HE染色显示各组线结位于腹壁不同解剖层次内(皮下、肌层和腹膜外间隙)。免疫组织化学和半定量检测显示皮下组线结周围异物巨细胞浸润和纤维化最显著,腹膜外间隙组线结周围异物巨细胞浸润和纤维化最轻微。结论丝线用于腹壁打结深度与线结异物反应呈相关性;位于腹膜外间隙线结周围引起异物巨细胞浸润和纤维化程度轻微,皮下线结周围异物巨细胞浸润和纤维化程度明显。腹腔镜经皮腹膜外内环结扎术中将线结打在腹膜外间隙,有利于降低线结炎症反应和线结反应相关并发症的发生率,并为其提供理论依据。

丝线线结在小鼠腹壁不同解剖层次诱导局部免疫应答的比较研究

目的小儿腹腔镜监视下经皮腹膜外内环结扎术后有时会出现线结反应。本研究旨在探索腹壁不同层次打结与其诱导迟发型超敏反应过程中抗原呈递细胞(APC)和CD4+ Th细胞浸润的相关性。方法在同一Balb/C小鼠腹壁自左向右分别纵向剪开3个皮肤切口(0.5 cm长),分别经切口处用无菌平镊提起全腹壁,采用4-0带针慕斯线进针贯穿腹壁至壁层腹膜内,经切口直视下经原针孔采用钩针将带针丝线折返钩出,经原线道出针,分别打结于皮下、肌层内和腹膜外间隙。术后14 d取材打结部位腹壁标本,连续冰冻切片进行组织学观察和分析。结果HE染色显示各组线准确位于腹壁不同解剖层次内(皮下、肌内和腹膜外间隙组)。APC膜表面表达抗原肽-MHC Ⅰ/Ⅱ类分子复合物的免疫组织化学显示皮下组线结周围APC浸润最明显,腹膜外间隙组线结周围浸润最轻微。半定量检测结果显示:皮下组(2.23±0.31)与肌层组(1.67±0.12)比较,差异有统计学意义(P=0.043 9);肌层组与腹膜外间隙组(0.89±0.06)比较,差异亦有统计学意义(P=0.002 0)。三组线结周围CD4+ Th细胞免疫组织化学检测显示皮下组线结周围CD4+分子表达最明显,腹膜外间隙组线结周围表达最轻微。半定量检测结果显示:皮下组(1.79±0.17)与肌层组(1.42±0.20)比较,差异有统计学意义(P=0.009 5);肌层组与腹膜外间隙组(0.51±0.15)比较,差异亦有统计学意义(P=0.002 8)。结论丝线位于不同层次腹壁打结与其诱导的迟发型超敏反应过程中APC和CD4+ Th细胞浸润具有相关性;线结位于深层腹膜外间隙引起超敏反应轻微,皮下浅层线结引起超敏反应最明显。提示对于腹腔镜监视下经皮腹膜外内环结扎术,将线结打在腹膜外间隙有利于降低线结诱导的超敏反应和超敏反应相关并发症的发生率。