脑蛋白水解物注射液对培养神经胶质抗原2阳性神经祖细胞的影响

背景:脑蛋白水解物注射液能缓解多种神经系统疾病的症状,但其作用机制并不明确。研究显示,脑蛋白水解物注射液在体内和体外实验中有促进神经发生的潜能。目的:观察脑蛋白水解物注射液对培养的神经胶质抗原2阳性神经祖细胞增殖和分化的影响。方法:取成年大鼠海马原代及传代培养神经胶质抗原2细胞,以免疫荧光染色法鉴定细胞性质,以乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,以原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡,BrdU掺入法鉴定新生细胞。结果与结论:脑蛋白水解物注射液干预显著减少TUNEL阳性细胞数,并明显增加神经胶质抗原2细胞数和神经胶质抗原2细胞中微管相关蛋白2a+2b、突触蛋白Ⅰ、γ-氨基丁酸和囊泡γ-氨基丁酸转运体表达水平。说明脑蛋白水解物注射液能抑制神经胶质抗原2细胞凋亡,促进神经胶质抗原2细胞增殖,并能促进神经胶质抗原2细胞向神经元(特别是γ-氨基丁酸能抑制性中间神经元)分化。

糖皮质激素对成体海马神经祖细胞的影响

背景:体内研究显示,高浓度糖皮质激素可抑制大鼠内源性神经前体细胞增殖。而神经胶质抗原2蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)是成熟中枢神经系统中最大的增殖细胞群体,具有多分化潜能。目的:观察糖皮质激素对体外培养的成熟大鼠海马由来的NG2细胞生存和增殖的影响。方法:原代及传代培养成年大鼠海马NG2细胞,以0,0.1,1,10,100μmol浓度糖皮质激素类药物地塞米松干预48h后,采用乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡情况,5’-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法鉴定细胞增殖状况。结果与结论:1,10,100μmol浓度地塞米松干预明显减少NG2细胞数,并显著增加TUNEL阳性细胞率,明显减少BrdU阳性细胞率。结果可见高浓度糖皮质激素能抑制NG2细胞分裂增殖,并诱导细胞凋亡,从而明显减少NG2细胞数。

Btk/NF-κB信号通路在视神经脊髓炎谱系疾病中变化及意义

目的检测NMOSD急性期患者单个核细胞(PBMCs)的BTK/NF-κB信号通路中BTK、NF-κB、PI3K、IKK mRNA水平,探讨BTK、NF-κB、PI3K、IKK在NMOSD患者急性期变化及可能作用;探讨NMOSD患者血清AQP4-Ab阳性与否、抗体水平与脊髓MRI受累节段数的相关性。方法选取2018年1月-2019年1月就诊于河北医科大学第二医院神经内科NMOSD急性期患者33例为实验组,性别、年龄相匹配的33例健康人为对照组。入组的NMOSD患者进行EDSS评分、脊髓MRI检查、血AQP4-Ab测定。留取外周血,分离PBMCs,采用RT-PCR法检测PBMCs中BTK、NF-κB、PI3K、IKK水平,将其与健康人比较。结果 NMOSD组BTK/NF-κB信号通路中Btk、NF-κB、PI3K、IKK mRNA水平均较对照组明显升高,差异有统计学意义;NMOSD急性期患者AQP4-Ab阳性者较AQP4-Ab阴性者脊髓受累节段数多,差异有统计学意义;AQP4-Ab抗体滴度与脊髓受累节段数无线性相关关系。结论BTK/NF-κB信号通路中4项激酶在NMOSD急性期增高,在调控B细胞分化时异常激活,可能参与了疾病发生;NMOSD患者急性期脊髓受累节段数可能与血AQP4-Ab阳性相关,滴度并不能预测脊髓受累节段数。

CD19+CD24high CD38high调节性B细胞及相关细胞因子在视神经脊髓炎谱系疾病患者外周血中的变化及意义

目的检测NMOSD患者外周血中CD19^+CD24^highCD38^high Breg及其细胞因子IL-10、TGF-β水平,探讨CD19^+CD24^highCD38^high Breg、IL-10、TGF-β在NMOSD急性期的变化及可能作用;检测NMOSD患者外周血GFAP水平,结合EDSS评分,探讨GFAP与疾病严重程度的相关性。方法选取2016年12月-2018年1月就诊于河北医科大学第二医院神经内科NMOSD急性期患者27例为实验组,性别、年龄相匹配的20例健康人为对照组。入组的NMOSD患者进行EDSS评分、流式细胞术检测外周血CD19^+CD24^highCD38^high Breg数量,PCR法检测外周血IL-10、TGF-β、GFAP的mRNA水平,并与健康人比较。结果NMOSD组CD19^+CD24^highCD38^high Breg水平较对照组下降,差异有统计学意义,CD19^+CD24^highCD38^high Breg与EDSS之间无线性关系。NMOSD组IL-10、TGF-β的mRNA水平较对照组下降,差异有统计学意义。NMOSD组GFAP水平较对照组升高,差异有统计学意义。GFAP与EDSS之间无线性关系。结论CD19^+CD24^highCD38^high Breg在NMOSD急性期发病中数量和功能上均受损,血清GFAP水平增高,但不能反应复发患者疾病残疾程度。

SOCS1-JAK2-STAT3信号通路在C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中作用机制探讨

目的:探讨SOCS1-JAK2-STAT3通路在C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用机制,为多发性硬化(MS)的治疗寻找新的靶点。方法:对比AG490干预组、EAE模型组和空白对照组各组小鼠发病情况,各组发病初期和发病高峰期胸腺组织HE染色,及胸腺中IL-17、RORγt、SOCS1及p-STAT3免疫组化阳性细胞表达。结果:AG490干预组发病时间迟于EAE组(P<0.05),其高峰期神经功能评分显著低于EAE组(P<0.05),AG490干预组胸腺组织中IL-17、RORγt、SOCS1及p-STAT3的表达与EAE组比较明显下降(P<0.05),但各组发病高峰期均较发病初期含量增高(P<0.05)。结论:①AG490可以通过抑制SOCS1-JAK2-STAT3信号通路,降低特异性免疫应答,减少炎症反应。②SOCS1-JAK2-STAT3信号通路在EAE中发挥重要作用,可以作为治疗的新靶点。

Th17细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病中的表达及依达拉奉的保护作用研究

目的:探讨Th17细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病中的动态变化及依达拉奉可能的保护作用机制。方法:对比EAE组和依达拉奉组大鼠发病前期、急性期和缓解期Th17相关细胞因子。评估大鼠临床发病情况;组化染色观察脊髓组织炎症细胞中RORγt阳性表达;ELISA法检测血清中IL-17、IL-6含量;实时定量PCR检测脊髓组织IL-17mRNA、HO-1mRNA含量。结果:依达拉奉组平均发病时间、发病率、急性期神经功能评分明显低于EAE组(P<0.05);免疫组化结果显示依达拉奉组各时期RORγt阳性细胞平均秩次均低于EAE组(P<0.05);ELISA结果显示依达拉奉组发病前外周血中IL-17、IL-6的含量低于EAE组(P<0.05),在急性期和缓解期依达拉奉组外周血中IL-17均含量低于EAE组(P<0.05);实时定量PCR发现依达拉奉组急性期IL-17mRNA表达低于EAE组(P<0.05),依达拉奉组不同时期HO-1mRNA含量均高于EAE组(P<0.05)。结论:依达拉奉可延迟EAE发病时间、减轻神经功能损伤、降低发病率;可能通过作用于HO-1起到抗氧化应激和抗炎作用。

Foxp3和HO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的相关性表达及依达拉奉保护作用的研究

目的探讨叉头样转录因子-3(Foxp3)和血红素加氧酶(HO-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的相关性及依达拉奉对EAE的保护机制。方法建立大鼠EAE动物模型,观察依达拉奉干预前后动物发病情况,应用Real-time PCR方法检测脊髓组织中Foxp3 mRNA和HO-1 mRNA的含量变化;应用免疫组化染色观察脊髓组织Foxp3和HO-1阳性表达。结果依达拉奉能降低EAE的发病率,延迟发病,改善神经功能评分,减少脊髓中炎性细胞浸润和"血管袖套"的形成,促进脊髓中Foxp3和HO-1的转录。结论依达拉奉对EAE和MS具有保护作用,这种作用在病程早期更明显,是通过促进HO-1的表达上调和CD4+CD25+Foxp3+T调节型淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs)的发育和功能实现的,具有抗炎和抗氧化的双重作用。

轴索损伤在大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎不同时期的动态变化及意义

目的:研究不同发病时期实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠轴索损伤的动态变化及意义。方法:对不同发病时期EAE大鼠进行HE染色判断炎症损害,以免疫组化方法标记β-淀粉样前体蛋白(β-APP)和磷酸化tau蛋白,了解轴索急性损伤及反复发病后的神经变性情况。结果:急性组大鼠脊髓组织内可见大量炎症细胞弥散分布,在炎症细胞区内有大量β-APP阳性表达,神经纤维变性标志物tau蛋白只有少量沉积;瘫痪组大鼠血管周围有淋巴细胞浸润,呈袖套样分布,β-APP在无炎症的区域也有部分表达,并有tau蛋白大量沉积,提示反复发病的瘫痪大鼠存在持续的轴索损伤,并发生明显的轴索变性。急性组、瘫痪组轴索中β-APP和tau蛋白阳性数均多于正常组,差异显著,急性组和瘫痪组比较,轴索中β-APP和tau蛋白阳性表达数亦有显著差异。结论:(1)发病早期轴索损伤与炎症破坏有关,并呈可逆性。(2)神经变性主要存在于EAE的慢性病程中。(3)在EAE发病过程中轴索损伤呈动态变化,疾病后期轴索发生神经变性并导致神经功能不可逆损伤,在EAE研究中有重要意义。

脑梗死对影像学脑小血管病患者表现的影响及相关因素分析

目的 许多老年患者有脑小血管病(CSVD)影像学表现,但无特征性临床症状,本研究探讨脑梗死(CI)的发生对有CSVD影像学表现患者的影响及相关因素分析。方法 收集老年患者,MRI检查为多发性腔隙性脑梗死(LI),脑白质病变(WMH)或脑萎缩等一种或多种表现,按照是否有CI临床症状分为CI组和非CI组,CI组包括既往有CI史和新发CI患者,所有患者于入院7d内行MMSE认知测评、ADL评分,对比两组患者一般资料、影像学类型、既往病史、生活方式等,并对相关因素分析。结果 共入组460例患者,CI组307例,占66.74%,与非CI组相比,患者在性别、高血压、吸烟、饮酒、NIHSS评分、跌倒评分、ADL评分、影像学类型等方面存在明显差异;两组在年龄、婚姻、糖尿病、冠心病等方面无差异;Logistic多因素回归分析,男性、高血压、ADL评分及影像学类型与CI发生密切相关。随CI发生次数增多,血管性痴呆(VaD)病例增多,差异有统计学意义。结论 影像学cSVD表现的CI组,男性、高血压是其独立危险因素,与跌倒评分、ADL评分、影像学受累程度呈正相关,CI组VaD发病数量增多,应引起临床医生关注。

血管性痴呆危险因素及发病机制的研究进展

血管性痴呆现已经成为一个重要的公共卫生问题,以缺血缺氧性或出血性脑损伤造成的病理组织学损伤和进行性智能减退为特征。血管性痴呆是仅次于阿尔茨海默病的第二大痴呆类型,其发病率逐年增加。血管性痴呆的确切的发病机制还不是很清楚,但目前公认脑缺血缺氧是血管性痴呆的主要病因。海马是学习记忆的重要结构,并且对脑缺血缺氧极其敏感。因此,脑缺血缺氧极易导致海马神经元凋亡,从而使学习记忆能力下降。目前,血管性痴呆是唯一一种可以防治的痴呆。因此,对血管性痴呆危险因素和发病机制的研究具有重要意义。

NBP对器官型脑片糖氧剥夺模型中细胞凋亡的影响

目的观察正丁基苯酞（NBP）对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型（OGD）中细胞凋亡和线粒体电位的影响。方法建立SD乳鼠大脑皮质运动区的器官型脑片,SMI-32染色观察锥体细胞。2 w后,随机分为对照组（C组）和实验组（T组）,T组在OGD干预30 min后给予不同剂量NBP,分为T0、T0.01、T0.1、T1、T10组,给NBP前和后1 h观察PI染色;选择T0组、T10组,观察两组在OGD 30 min、NBP 1 h、24 h、72 h、7 d等不同时间点PI染色变化。于NBP后1 h各T组进行JC-1线粒体膜电位检测。结果器官型脑片OGD 30 min给予NBP 1 h后,C组和各T组PI染色可见不同亮度红色荧光,各T组荧光强度均大于C组,荧光强度与NBP浓度（0~10μmol/L范围内）呈负相关,各T之间组及与C组相比差异有显著性（P〈0.05）;T0组和T10组在OGD 30 min均出现明显细胞凋亡,两组无显著性差异。复氧复糖后随时间延长T0组细胞凋亡增加,T10组逐渐减少,差异显著（P〈0.05）;C组和各T组JC-1线粒体检测试剂盒染色可见OGD 30 min,复氧复糖1 h后,红色荧光/绿色荧光（R/G）的值明显减小,R/G的值与NBP浓度呈正相关,各T组R/G值均小于C组,差异显著（P〈0.05）。结论 OGD模型可模拟缺血性脑损伤的病理变化,重复性良好;NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用;NBP对脑片损伤后线粒体电位的耗散有阻止作用,且与剂量相关。

器官型脑片培养OGD复氧复糖模型中丁苯酞对于bcl-2/bax、及bim蛋白的调节作用

目的观察正丁基苯酞(NBP)对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型(OGD)中细胞凋亡bcl-2、bax及bim蛋白的调节作用。方法用生后7 d的SD乳大鼠制备大脑皮质运动区器官型脑片,将培养2 w的脑片随机分为对照组(C组)、模型组(M组)、溶剂对照组(Sc组)和实验组(T组),T组在OGD干预30 min后给予NBP 10μM。将脑片制备OGD模型30 min,部分脑片在NBP干预前后不同时间点(0 h、1 h、24 h、72 h)进行PI染色;部分脑片在NBP干预后6 h用戊二醛固定,做石蜡切片,行HE染色及bcl-2、bax、bim免疫组化染色。结果 PI染色可见C组在不同时间点荧光强度无明显变化,M组、Sc组和T组荧光强度均随时间有不同程度增强,M组和Sc组各时间点荧光强度无明显差异,T组荧光强度较前两者降低,随时间延长,降低幅度增大,尤其是72 h时间点。HE染色C组可见皮质运动区特有的大锥体细胞,结构清晰,M组和T组可见细胞肿胀,细胞核溶解,M组相对明显。免疫组化染色可见在3种染色中M组和T组阳性细胞数均较C组增多,其中bcl-2染色中T组阳性细胞增多更明显,bax和bim染色中M组阳性细胞增多更明显,3种染色中C、M、T各组之间差异均有统计学意义。结论NBP对OGD后的细胞损伤具有保护作用,可能是通过对bcl-2、bax以及bim蛋白的调节减少细胞凋亡。

缺血性脑卒中复发与阿司匹林抵抗的相关性研究

目的观察缺血性脑梗死初发以及复发患者阿司匹林(ASP)疗效,探讨缺血性脑梗死复发与阿司匹林抵抗(AR)的关系,并对复发患者的危险因素进行相关性分析。方法采用回顾性研究方法,将急性缺血性脑梗死患者分为初发组和复发组,复发组入院后即行血栓弹力图(TEG)检测,初发组规律服用ASP后1 m进行TEG检测,比较初发组及复发组AR发生率。并对患者生化指标、TOAST分型及危险因素等进行Logistic回归分析,探讨缺血性脑梗死复发的临床相关因素。结果初发组AR发生率为28.57%;复发组AR发生率为56.76%。复发组AR明显高于初发组(P<0.01)。糖尿病、冠心病在复发组出现率高(P<0.05);年龄、性别、吸烟、饮酒、高血压、高脂血症、动脉粥样硬化型、BMI、TG、CHOL、LDL、HDL、HCY及hs-CRP的水平两组差异无显著性(P>0.05)。对P<0.1危险因素的Logistic回归分析示AR、糖尿病与缺血性脑梗死复发明显相关。结论 AR能显著增加缺血性脑梗死复发风险;糖尿病增加缺血性脑梗死复发风险。

JAK2抑制剂AG490对EAE小鼠C57BL/6的Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探讨AG490对EAE小鼠Th17/Treg平衡的影响及其治疗作用。方法以MOG33-35多肽免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,观察AG490干预前后EAE组、AG490组和对照组小鼠脊髓组织炎性细胞浸润情况及p-STAT5、Foxp3和IL-17免疫组化染色阳性细胞数目。结果 AG490组较EAE组小鼠炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目减少(P<0.05),AG490组小鼠p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目较EAE组增多(P<0.05),两组小鼠发病高峰期较发病初期炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目增多,而p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目减少(P<0.05)。结论 (1)AG490通过抑制JAK2-STAT3信号通路抑制炎症反应和免疫应答;(2)JAK2抑制剂可以通过JAK2-STAT3信号通路调节Th17/Treg细胞平衡。

脑小血管病患者双任务步行时认知-运动干扰模式的探讨

目的 探讨急性期脑小血管病(CSVD)患者进行双任务(DT)步行时,不同类型认知任务下认知-运动干扰(CMI)发生的情况。方法按照影像学表现共选取急性发病、肌力正常的CSVD患者12例,性别、年龄、受教育程度匹配的正常对照组12例,进行自然步态下直线行走18m距离,即单任务(ST)行走,以及步行同时分别执行2个难度的连续减法任务(SS)、单词生成任务(WLG)。采用超高分辨率3D结构光传感器搭配前沿AI深度学习算法的运动功能定量评价系统收集单、双任务步行的26个步态参数并进行比较。结果①组内比较,与ST比较,正常组执行DT步态参数中分别有14、13、15个指标有差异(P<0.05);CSVD组分别有2、1、0个指标有差异(P<0.05)。②组间比较,与正常组比较,CSVD组ST时13个步态指标有差异(P<0.05),DT时,SS有步态参数变化和计算数量的减少,无差异,WLG说动物名数量有差异(P<0.05)。结论执行ST时,CSVD组步态参数较正常组明显异常;执行DT时,正常组为认知干扰步态模式,CSVD组为认知运动相互干扰模式;WLG较SS任务简单,不同难度SS未显示出差别。

脑梗死患者COX-1及COX-2基因多态性与阿司匹林抵抗的相关性分析

目的分析脑梗死患者COX-1-1676A>G、C50T、-A842G及COX-2-765G/C位点基因多态性与阿司匹林抵抗(AR)关系。方法选取首次发作急性脑梗死,规律服用阿司匹林(ASP)7d进行血栓弹力图(TEG)检测,分为阿司匹林抵抗组(AR,25例)和阿司匹林敏感组(AS,45例);对两组患者COX-1及COX-2基因共4个功能多态性位点测序,比较其基因型差异;完善患者生化指标、危险因素等临床资料,规律服用ASP并进行半年临床随访。结果70例患者中AS组为64.3%,AR组为35.7%;两组一般临床特征无差异(P>0.05);COX-1C50T、-A842G位点未见多态性,两组COX-1基因-1676A>G位点及COX-2基因-765G/C位点的基因型频率比较无差异(P>0.05);半年随访,终点事件发生率AR组脑梗死复发率较AS组增高(P<0.05);COX-2-765G/C及COX-1-1676A>G基因型与临床主要终点事件脑梗死复发进行比较无差异(P>0.05)。结论AR组脑梗死复发率高;AR组和AS组COX-1基因-A842G、C50T均未发现突变;COX-1-1676A>G与COX-2-765G/C基因型与AR、主要终点事件脑梗死复发间比较未发现明显相关性。

多发性硬化及EAE动物模型相关信号通路研究进展

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种以中枢神经系统(central nervous system,CNS)白质脱髓鞘为主要病理特点的慢性炎性自身免疫性疾病。CD4+T淋巴细胞介导的对自身髓鞘抗原产生的免疫应答为其可能的发病机制。目前公认小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)为研究MS的动物模型。目前关于MS的治疗尚缺乏有效方法,近年研究发现多种信号通路在MS/EAE中发挥调控作用,通过研究MS/EAE中的相关信号通路及相关通路靶点药物的干预效果,将对MS的治疗起到启示性作用。本文就有关MS/EAE相关信号通路的研究进展做一综述。

胸腺切除对EAE大鼠发病影响及机制的探讨

目的通过对比胸腺切除前后实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)大鼠(regulatory T cells,Treg)细胞含量变化,探讨胸腺在EAE发病中的作用。方法手术切除胸腺建立去胸腺大鼠模型,并对其免疫建立EAE模型。于发病不同时期进行HE染色观察炎症变化,并应用免疫组化及流式细胞学技术,分别检测脊髓和脾脏Treg细胞的含量。结果在发病不同时期去胸腺组EAE大鼠临床症状、神经功能损伤评分及炎症程度均重于EAE组,其脊髓及脾脏Treg细胞含量均较EAE组大鼠减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论在EAE大鼠发病过程中,胸腺能诱导分化产生Treg细胞,并通过输出到外周免疫环境和靶器官中,抑制炎症进展,促进疾病恢复,发挥免疫调节作用。

颈内动脉海绵窦瘘1例报告及文献复习

1病历资料 患者男，25岁，2010—03—26就诊。主诉左眼充血2个半月，左眼外凸伴左耳耳鸣2个月。该患者2个半月前无明显诱因出现左眼充血，无眼部痒感、异物感，无视物不清，无眼球活动障碍，就诊于当地医院以“左眼结膜炎”治疗未见好转。2个月前出现左眼外凸伴左耳耳鸣，耳鸣呈持续性“吹风机样”，当地考虑“脑血管病”，为求进一步诊治就诊于我院。