人长链非编码RNA基因SPRY4-IT1对肺癌细胞A549侵袭和迁移能力的影响

背景与目的人长链非编码RNA基因的异常表达与多种肿瘤有关。本研究旨在探讨人长链非编码RNA基因SPRY4-IT1对肺癌细胞A549侵袭和迁移能力的影响及机制。方法将SPRY4-IT1转染入肺癌A549细胞系,采用RT-PCR方法检测重组质粒在细胞中表达水平比较;采用MTT和Transwell检测A549细胞侵袭和迁移能力的变化,采用Western blot方法检测SPRY4-IT1对MMP-2和MMP-9蛋白的影响。结果转染pc DNA3.1-SPRY4-IT1细胞划痕两侧细胞间距较转染pc DNA3.1细胞明显变窄,其穿膜细胞数为(207±34)个/视野,相比对照组明显增多(P<0.05),且转染pc DNA3.1-SPRY4-IT1细胞中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2及MMP-9蛋白表达较转染空质粒组均有升高。结论在肺癌A549细胞中过表达SPRY4-IT1可增强细胞的侵袭、迁移能力,且细胞内MMP-2及MMP-9表达升高,提示SPRY4-IT1可能通过调控MMP影响肺癌的侵袭和转移能力。

MicroRNA-98对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移的影响

目的:探讨microRNA-98(miR-98)对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移的影响。方法:将人视网膜母细胞瘤细胞株Y79分为四组:miR-98干预组、阴性miRNA对照组、空白脂质体组和空白对照组。通过脂质体介导,将miR-98的拟似物(miR-98mimics)转染入上述四组细胞,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测细胞miR-98的表达,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。Western blot技术检测细胞信号分子Ras的表达。结果:脂质体转染成功地将miR-98mimics转染入Y79细胞,干预组miR-98的表达水平(89.15±3.25)显著高于对照组、空白脂质体组和空白对照组,且4组间有显著性差别(F=219.17 P<0.001)。miR-98对Y79细胞增殖有明显抑制作用。Y79细胞周期被抑制在G1期。对照组和干预组穿膜细胞数分别为(181.2±4.1)个/高倍视野和(50.6±3.5)个/高倍视野,两组相比有显著性差别(t=39.18,P<0.01),miR-98抑制了Y79细胞的侵袭能力。miR-98表达增高的Y79细胞的信号分子Ras表达下降。结论:miR-98可以抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移,且负调控原癌基因Ras的表达。

LncRNA AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706转移潜能影响机制探讨

目的食管癌是常见的消化道肿瘤,其细胞侵袭与迁移机制尚不清楚。本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制。方法构建AFAP1-AS1真核表达载体,用脂质体2000将pcDNA3.1-AFAP1-AS1表达载体及pcDNA3.1空载体转染食管癌细胞EC9706。通过G418筛选,建立稳定表达AFAP1-AS1RNA的EC9706-AFAP1-AS1细胞系。Millicell小室检测2株细胞侵袭及迁移能力的变化,Real-time PCR法检测2株细胞中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)及Artemin的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测2株细胞中VEGF-C及Artemin蛋白表达的变化。结果成功构建稳定表达AFAP1-AS1的EC9706细胞系,过表达AFAP1-AS1后,EC9706细胞的迁移(数据分布符合正态分布,SW1=0.912,SW2=0.878,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.002,P<0.001)及侵袭(数据分布符合正态分布,SW1=0.945,SW2=0.972,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.02,P<0.001)能力均增加,VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.931,SW2=0.922,均P>0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.14,P>0.05)和Artemin(数据分布符合正态分布,SW1=0.964,SW2=0.981,均P>0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.29,P>0.05)的mRNA表达差异无统计学意义,但VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.762,SW2=0.82,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.005,P<0.001)及Artemin(数据分布符合正态分布,SW1=0.892,SW2=0.853,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.004,P<0.001)的蛋白表达明显增加。结论 AFAP1-AS1可能通过增加EC9706细胞中VEGF-C及Artemin的蛋白表达来增强其侵袭及迁移能力,在食管癌侵袭及进展中发挥作用。