三氧化二砷联合5-杂氮-2′-脱氧胞苷对U937细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

目的探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)联合三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株U937中JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1表达水平的影响,并探讨它们在白血病发病中的作用。方法 5-aza-CdR、As2O3单用及联合处理U937细胞,5-aza-CdR浓度为0.5、1、2μmol/L,As2O3的浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O3 1μmol/L+5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5μmol/L+5-azaCdR 1μmol/L、As2O3 35μmol/L+5-aza-CdR 2μmol/L及不加药物组,分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,荧光实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果 As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在U937细胞中的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐升高;JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;SHP-1与JAK3、TYK2负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论 (1)甲基化抑制剂5-aza-CdR和As2O3可使SHP-1表达升高,JAK3、TYK2表达降低,与浓度及作用时间有关。(2)SHP-1基因的重新表达与其发生去甲基化有关,对JAK/STAT通路有负调控作用。

三氧化二砷联合5-杂氮脱氧胞苷对K562细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

本研究旨在探讨甲基化抑制剂三氧化二砷(As2O3)及5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-CdR)对JAK-STAT信号转导通路中JAK家族成员JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1在慢性髓系白血病细胞株K562中表达的影响及它们在白血病发病中的作用。K562细胞分为单药组、联合用药组及不加药物组(空白对照)。5-aza-CdR单用浓度为0.5、1、2μmol/L,As2O3单用浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O31μmol/L+5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5μmol/L+5-aza-CdR 1μmol/L。As2O3联合用药浓度为5μmol/L+5-aza-CdR 2μmol/L。对细胞分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果表明,As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在K562细胞中的表达呈剂量及时间依赖性升高,JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,TYK2 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,SHP-1与JAK3、TYK2呈负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论:As2O3和5-aza-CdR单独及联合应用时,随着浓度增高和作用时间延长,SHP-1表达上调,JAK3和TYK2表达下调,且两药有协同去甲基化作用;SHP-1基因可能通过抑制JAK/STAT通路发挥作用,JAK3所受影响较TYK2更为显著。在JAK/STAT通路中,JAK3可能发挥更为重要的作用。