桂皮醛抗念珠菌的敏感性及对细胞壁的影响

为了研发靶向抗真菌药物,研究桂皮醛对念珠菌抗菌活性及对白念珠菌细胞壁的影响。参照CLSI的M27-A3方案,采用微量液基稀释法,测定桂皮醛对念珠菌(白念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌)的抗菌作用。将白念珠菌的菌悬液(1×10^(8)cfu/mL)加入到RPMI 1640液体培养基内,置于37℃孵育48 h后,离心、制片,在透射电镜下观察细胞结构,以卡泊芬净、氟康唑作对照。结果表明桂皮醛、卡泊芬净、氟康唑对念珠菌的MIC分别为白念珠菌3.91,15.62,31.25 mg/L,热带念珠菌3.91,15.62,31.25 mg/L,克柔氏念珠菌3.91,31.25,>250 mg/L)。电镜显示,0.1%(质量分数)的桂皮醛只作用于白念珠菌细胞壁,致细胞壁外层溶解脱落,细胞核及细胞器溶解消失,但细胞膜仍然完整;0.1%(质量分数)的卡泊芬净致白念珠菌细胞壁完全溶解脱落变薄,同时细胞膜部分受损;0.1%(质量分数)的氟康唑致白念珠菌细胞膜溶解脱落,但细胞壁较完整。桂皮醛、卡泊芬净对念珠菌(白念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌)均有较强的抗菌活性,氟康唑对白念珠菌、热带念珠菌也有较强的抗菌活性,但对克柔氏念珠菌显示耐药。桂皮醛的抗菌活性优于卡泊芬净,卡泊芬净优于氟康唑。桂皮醛作用于白念珠菌细胞壁而不影响细胞膜,卡泊芬净作用于白念珠菌细胞壁但对细胞膜也有一定影响,氟康唑作用于白念珠菌细胞膜,而不影响细胞壁。因此,桂皮醛有望成为一种靶向治疗念珠菌感染的理想药物。

免疫抑制BALB/c小鼠侵袭性白念珠菌感染动物模型的建立

目的建立免疫抑制BALB/c小鼠侵袭性白念珠菌感染的动物模型。为研发新型靶向抗真菌药物提供依据。方法对BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg,每日1次,连续2次,第4天经鼻腔灌注白念珠菌菌悬液50μl(107 cfu/ml),第7天取肺组织标本进行真菌直接镜检、培养、病理检查、(1,3)-β-D-葡聚糖检测及电镜观察。结果小鼠被注射环磷酰胺的第4天,白细胞2.48×10^(9)/L、中性粒细胞16.8×10^(9)/L降至最低值。免疫抑制的小鼠经鼻腔灌注白念珠菌菌悬液后的第7天,取肺组织标本进行真菌镜检,镜下可见大量菌丝及芽生孢子,沙堡培养有白念珠菌生长,组织病理可见大量菌丝及芽生孢子及炎性细胞浸润、坏死,(1,3)-β-D-葡聚糖检测(5 181.33±223.67)pg/ml与生理盐水对照组(75.62±18.34)pg/ml比较,差异有统计学意义(t=-4.536,P<0.01),透射电镜可见白念珠菌细胞壁为多层板状结构、清晰的细胞膜及细胞器。结论对免疫抑制BALB/c小鼠鼻腔灌注白念珠菌菌悬液后,经取肺组织标本进行真菌检查、培养、病理检查、(1,3)-β-D-葡聚糖检测及电镜观察方法,成功建立了免疫抑制BALB/c小鼠侵袭性白念珠菌感染动物模型,为观察药物在体内对真菌细胞壁及(1,3)-β-D-葡聚糖的影响提供了依据。