胃贲门腺癌中长链非编码RNA FOXD3-AS1的表达及其对肿瘤生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)FOXD3-AS1在胃贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测FOXD3-AS1在GCA中的表达。应用细胞功能实验检测FOXD3-AS1异常表达与肿瘤生物学特征的关系;qRT-PCR及Western blot法检测FOXD3-AS1异常表达对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA及蛋白表达的影响。结果GCA组织中的FOXD3-AS1表达量明显高于癌旁正常组织(Z=-2.695,P=0.007),FOXD3-AS1的表达水平与临床分期(Z=-2.981,P=0.003)和淋巴结转移(Z=-3.43,P=0.001)相关。FOXD3-AS1在胃癌细胞中的表达均高于空白对照组(P<0.05)。细胞增殖实验、平板克隆形成、划痕愈合实验以及Transwell侵袭实验结果显示,FOXD3-AS1敲低明显抑制细胞的体外增殖、迁移、侵袭能力;FOXD3-AS1敲低上调胃癌细胞中E-cadherin mRNA及蛋白的表达,同时下调N-cadherin、β-catenin和vimentin的表达(P<0.05)。结论FOXD3-AS1在GCA组织和细胞中的表达明显上调,敲低FOXD3-AS1可以抑制胃癌的发生、发展。

Gadd45G基因在食管鳞癌组织中的异常甲基化及表达

目的:检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,本文中简称为食管鳞癌)中生长阻滞和DNA损伤诱导基因G(growth arrest and DNA-damage-inducible 45gamma,Gadd45G)的异常甲基化及表达,并探讨其临床意义。方法:分别应用亚硫酸氢盐转换-甲基化特异性PCR(bisul te conversion-methylation specific PCR,BS-MSP)、RT-PCR及免疫组织化学法检测Gadd45G基因在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的甲基化、mRNA及蛋白表达情况,并分析Gadd45G异常甲基化及表达水平与食管鳞癌患者临床病理特征的相关性。结果:食管鳞癌组织中Gadd45G远端启动子区(region1)的甲基化率为4.7%(6/128),与癌旁正常组织(0.0%,0/128)相比差异有统计学意义(P<0.05);Gadd45G此区域发生甲基化的食管鳞癌组织其mRNA和蛋白表达水平与未发生甲基化的食管鳞癌组织相比差异无统计学意义(P>0.05)。食管鳞癌组织Gadd45G第2个CpG岛的近端启动子区(region2)及第1外显子区(region3)的甲基化率相同,均为45.3%(58/128),与癌旁正常组织相比(0.0%,0/128),差异具有统计学意义(P<0.01);且食管鳞癌组织中此2个区域的甲基化与TNM分期及组织学分化程度密切相关(P<0.05)。食管鳞癌组织中Gadd45G的mRNA和蛋白表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.05),并与TNM分期和组织学分化程度密切相关(P<0.05),与其近端启动子区(region2)及第1外显子区(region3)的甲基化状态之间也有明显相关性(P<0.05)。结论:Gadd45G基因近端启动子区及第1外显子区的高甲基化导致其表达降低,这可能是食管鳞癌发生的机制之一。

贲门腺癌中Caveolin-1基因的甲基化状态及其与β-catenin异位表达的关系

目的 :检测贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中Wnt通路相关因子Caveolin-1基因的甲基化状态,探讨该基因甲基化对其mRNA、蛋白表达及Wnt通路中心因子β-catenin异位表达的影响。方法 :采用甲基化特异性PCR(methylation-specii c PCR,MSP)法检测138例贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中Caveolin-1基因的甲基化状态,并进一步分析基因甲基化与患者临床病理特征之间的关系;采用RT-PCR法检测贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中Caveolin-1 mRNA表达情况,应用免疫组织化学法检测Caveolin-1及β-catenin蛋白的表达情况,并进一步应用Spearman等级相关分析法分析Caveolin-1基因甲基化与Caveolin-1 mRNA、蛋白表达以及β-catenin蛋白异位表达的相关性。结果 :在贲门腺癌组织中,Caveolin-1基因的甲基化率为26.1%(36/138),明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01);癌组织中Caveolin-1基因的高甲基化与肿瘤患者的淋巴结转移、上消化管肿瘤(upper gastrointestinal cancers,UGIC)家族史以及肿瘤组织的病理分级有关(P<0.05),而与临床分期无关(P>0.05);癌组织中Caveolin-1 mRNA及蛋白的阳性表达率分别为48.6%和32.6%,均明显低于癌旁非肿瘤组织(P<0.01)。癌及癌旁组织中β-catenin蛋白的异位表达率分别为87.7%和39.9%,差异有统计学意义(P<0.01)。癌组织中Caveolin-1 mRNA及其蛋白表达和β-catenin蛋白的异位表达均与Caveolin-1基因的甲基化状态明显相关(P<0.05)。结论 :CpG岛甲基化是Caveolin-1基因表达下调的机制之一。Caveolin-1基因甲基化可能通过激活Wnt/β-catenin信号转导通路,在贲门腺癌的发生中发挥着重要的作用。

微RNA-203b基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态分析

目的 :检测微RNA-203b(microRNA-203b,miR-203b)基因在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其甲基化状态,探讨miR-203b基因在ESCC发生和发展中的作用。方法 :应用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine,5-aza-dC)处理前后食管癌细胞系(TE1、TE13、YES-2、EC109和T.TN)和54例ESCC及其癌旁正常组织中miR-203b基因的表达水平。应用甲基化特异性PCR法检测5-aza-dC处理前后5种食管癌细胞系和83例ESCC及其癌旁正常组织中miR-203b基因的甲基化状态。统计学分析ESCC组织中miR-203b基因表达水平和甲基化状态与患者临床病理特征的关系,以及miR-203b基因表达水平与其甲基化状态的相关性。结果 :未经5-aza-dC处理的5种食管癌细胞系中miR-203b基因的表达水平均相对较低,同时表现为高甲基化状态;经5-aza-dC处理后,食管癌细胞系中miR-203b基因的表达水平均升高(P<0.05),同时甲基化程度均降低(P<0.05)。miR-203b基因在ESCC组织中的表达水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05),并与肿瘤组织的分化程度密切相关(P<0.05)。ESCC组织中miR-203b基因的启动子区甲基化率明显高于癌旁正常组织(P<0.05),并与肿瘤组织的分化程度密切相关(P<0.05)。发生miR-203b基因甲基化的ESCC组织中miR-203b基因的表达水平明显低于未发生甲基化的ESCC组织(P<0.05)。结论 :miR-203b基因在ESCC中异常低表达,可能与ESCC的发生和发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致miR-203b基因沉默的机制之一。