miR-496通过SFMBT1抑制子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的相关研究

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)已被证实与子宫颈癌的发病相关。分析miR-496与SFMBT1的相互关系,阐明miR-496在子宫颈癌中的作用及其机制。方法:预测并验证miR-496的靶基因。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-496 mimics对SFMBT1表达的影响。使用免疫荧光和Western blot分析SFMBT1在子宫颈癌组织中的表达变化。细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和transwell实验分别检测miR-496和SFMBT1对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。观察miR-496在BALB/c裸小鼠移植瘤模型中对肿瘤生长的影响。结果:相比癌旁正常组织,SFMBT1在子宫颈癌组织中的mRNA(1.69±0.23 vs 1.00±0.12)以及蛋白(1.73±0.28 vs 1.00±0.15)均呈高表达,miR-496能通过特异性结合SFMBT1的3’-UTR抑制SFMBT1的mRNA(0.81±0.07 vs 1.00±0.15)以及蛋白表达(0.26±0.02 vs 1.00±0.14);细胞实验中相比对照组,miR-496 mimics处理组能抑制HeLa细胞增殖(1.39±0.10 vs 2.01±0.09)、迁移(40.50±3.17 vs 28.42±1.21)和侵袭能力(15.03±1.67 vs 25.71±2.56),但相比miR-496 mimics处理组,miR-496+SFMBT1处理组迁移(33.21±2.66 vs 19.28±1.50)和侵袭能力增强(30.11±2.73 vs 15.03±1.67)。子宫颈癌裸小鼠移植瘤模型发现,相比对照组miR-496组裸小鼠中移植瘤体积、重量均明显降低。miR-496组裸小鼠中病变程度、SFMBT1表达和Ki-67增殖指数均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-496通过靶向调控SFMBT1抑制子宫颈癌细胞的生物学行为和裸小鼠移植瘤的生长。

IL-6对卵巢癌细胞迁移和侵袭影响及机制探讨

目的由于卵巢癌早期无法诊断以及在腹腔内的高转移性导致该病具有较高的死亡率。白细胞介素6(IL-6)是一种重要的炎性因子,其高表达及异常信号与上皮性卵巢癌的预后密切相关。本研究旨在探讨IL-6对卵巢癌A2780和SKOV-3细胞迁移和侵袭能力的影响以及相关的信号通路。方法采用划痕以及基质胶侵袭实验等检测IL-6对人卵巢癌细胞A2780及SKOV-3的迁移、侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分析IL-6对基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,以及对p38和细胞核因子κB(NF-κB)信号通路的影响;将p38和NF-κB信号通路抑制剂分别作用于A2780和SKOV-3细胞,基质胶侵袭实验分析在IL-6处理下抑制剂对细胞侵袭能力的影响,蛋白质印迹法检测MMP-2和MMP-9的表达。结果 IL-6处理24h后,卵巢癌细胞A2780和SKOV-3伤口愈合能力分别为65.51±6.09和58.21±5.14,相对于对照组的24.51±2.27和18.86±2.02增强,t值分别为15.093和15.582,均P<0.05;A2780和SKOV-3侵袭能力分别为3.42±0.25和6.50±0.54,相对于对照组的1.01±0.05和1.05±0.04增强,t值分别为6.125和17.792,均P<0.05。A2780和SKOV-3细胞中,MMP-2的mRNA水平在IL-6处理下分别增加2.6和2.1倍,MMP-9分别增加1.7和1.3倍;MMP-2的蛋白水平分别增加2.5和1.9倍,MMP-9分别增加1.6和1.5倍,P<0.05。IL-6可显著增加A2780和SKOV-3细胞中p38磷酸化,分别增加了4.1和3.7倍;p65的磷酸化分别增加了2.9和2.6倍,P<0.05。与IL-6处理相比,联合SB203580抑制剂作用于A2780和SKOV-3细胞后侵袭能力分别下降为80.9%和90.3%,联合PDTC抑制剂作用后侵袭能力分别下降为81.1%和89.8%,P<0.05;同时抑制MMP-2和MMP-9的表达,差异均有统计学意义,P<0.05。结论 IL-6通过p38/NF-κB信号通路协调激活基质金属蛋白酶的表达促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,为卵巢癌的治疗提供可靠靶点。