CIK体内外抗宫颈癌HeLa细胞的作用及其荷瘤小鼠体内分布特点

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对荧光素酶标记的人宫颈癌HeLa-luc细胞的体内外抗肿瘤作用,了解CIK回输荷瘤小鼠后在不同器官的分布特点。方法:由健康志愿者外周血单个核细胞体外诱导培养CIK,流式细胞术检测CIK表面分子的表达,RT-PCR法检测IFN-γmRNA的表达,MTT法和瑞氏-姬姆萨染色测定CIK对HeLa-luc细胞的杀伤作用。建立荷HeLa-luc瘤BALB/c裸鼠模型,体内成像系统观察荷瘤小鼠肿瘤大小变化及CIK治疗效果,共聚焦显微镜观察不同器官中CIK的分布情况。结果:CIK在体外诱导培养14～21 d,其生长达到高峰,此时CD3+CD56+T细胞的比例增加50倍以上,IFN-γmRNA表达水平也达到高峰。在效靶比为20∶1、40∶1时,CIK对HeLa-luc细胞的杀伤率分别为(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%,明显高于对照组的(16.33±3.09)%、(21.26±2.71)%(P<0.05)。CIK治疗5周和8周后,对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为47.18%、64.38%。CIK治疗组荷瘤小鼠外周血中IFN-γ水平为(61.92±6.49)pg/ml,明显高于对照组的(34.30±1.78)pg/ml(P<0.05)。CFSE标记的CIK经腹腔和瘤旁注射入荷瘤小鼠3 h,在肺、肝、脾、外周血、肿瘤中均可观察到绿色荧光;腹腔途径注射24 h时,肿瘤组织中CIK浓度达到高峰(20.56±1.72)%;瘤旁途径注射3 h时,肿瘤组织中CIK达到高峰(25.75±3.45)%。结论:CIK在体内外对宫颈癌HeLa-luc细胞均有较强的杀伤作用,CIK经不同途径注射荷瘤小鼠后可以广泛分布于全身器官,其到达各脏器的浓度与输注途径及时间密切相关。

食管鳞癌组织中Gadd45G基因家族的表达及其临床意义

目的:观察生长阻滞和DNA损伤诱导基因(growth arrest and DNA-damage-inducible 45,Gadd45)家族在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达,并探讨其临床意义。方法:选取河北医科大学第四医院2004-2008年间食管鳞癌患者128例的癌组织和癌旁组织标本。RT-PCR检测Gadd45家族Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G mRNA在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达,免疫组织化学方法检测Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G蛋白在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G表达与食管鳞状细胞癌的临床病理特征和预后之间的关系。结果:与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中Gadd45A mRNA表达水平显著升高[(0.8924±0.3457)vs(0.6123±0.2132),P<0.05];Gadd45B mRNA表达水平没有显著变化[(0.8256±0.3110)vs(0.8173±0.3069),P>0.05];Gadd45G mRNA表达水平显著降低[(0.3855±0.1210)vs(0.8214±0.3069),P<0.05],癌组织中Gadd45G mRNA表达与TNM分期和组织学分化程度密切相关。Gadd45A在癌旁组织中的蛋白表达以细胞核着色为主,而在部分肿瘤组织中表现为细胞质表达模式。与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中Gadd45A的表达显著升高(χ2=55.603,P=0.000);Gadd45B的表达没有显著性差异(χ2=0.456,P=0.500);Gadd45G的表达显著降低(χ2=70.134,P=0.000)。Ⅲ期和Ⅳ期食管鳞癌患者Gadd45G蛋白表达水平显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者(χ2=5.768,P=0.016),低分化组的Gadd45G蛋白阳性表达率显著低于中高分化组(χ2=4.483,P=0.034)。Gadd45G阳性患者的5年存活率明显高于阴性患者(44%vs 21%,P<0.05);Cox模型分析显示,Gadd45G蛋白的表达是食管鳞癌患者的一个独立预后因素。结论:Gadd45 A和Gadd45 G基因在食管鳞癌中的异常表达可能参与了食管鳞癌的发生、发展。

Atrogin-1基因在贲门腺癌组织中的表达及其异常甲基化

目的：探讨atrogin-1基因在贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma，GCA）中的异常甲基化及表达，并分析其临床意义。方法： 选用河北医科大学第四医院2004—2008年间的贲门腺癌患者手术标本共139例，分别应用亚硫酸氢盐转换-甲基化特异性PCR（bisulfite conversion-methylation specific polymerase chain reaction，BS-MSP）、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁（距癌灶边缘3～5 cm）组织中atrogin-1基因的甲基化、mRNA和蛋白表达情况，应用免疫组织化学法检测相应组织中Smad4蛋白的表达。结果： 贲门腺癌组织中atrogin-1基因启动子区的甲基化率[44.6%（62/139）] 显著高于癌旁组织[3.6%（5/139）]（χ^2=63.891，P=0.001），且atrogin-1基因的甲基化与TNM分期及肿瘤的组织学分化程度密切相关（χ^2=6.144, P〈0.05）。贲门腺癌组织中atrogin-1基因的mRNA和蛋白表达水平显著低于癌旁组织[（0.482 5±0.175 4） vs （0.896 9±0.290 1），t=10.62, P=0.01；34.5% vs 82.0%, χ^2=4.441，P=0.001]，且与其启动子区的甲基化状态之间有明显的相关性（r=-0.256，P=0.001）。贲门腺癌组织中Smad4蛋白表达的阳性率显著低于癌旁组织（46.0% vs 95.7%； χ^2=2.945，P=0.001），且与atrogin-1蛋白表达之间呈明显的正相关（r=0.604，P=0.001）。结论： Atrogin-1基因启动子区高甲基化导致的基因沉默可能是贲门癌组织中此基因表达降低的机制之一。

转染CD40L基因对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:本研究通过将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞,观察其对小鼠结肠癌细胞生物学特性的影响,以期探讨CD40L作为结肠癌基因治疗靶点的可行性。方法:经脂质体将CD40L基因转染小鼠结肠癌colon26细胞后,采用半定量RT-PCR法、Western印迹法和激光共聚焦显微镜检测CD40L mRNA及蛋白的表达情况,新型四氮唑盐MTS比色法检测CD40L基因转染对细胞生长的影响,FCM法检测其对细胞表面分子表达的影响,半定量RT-PCR法检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)mRNA的表达情况,以及Transwell法检测细胞的侵袭能力变化。结果:RT-PCR检测结果显示,转染CD40L基因的小鼠结肠癌colon26细胞中CD40L mRNA的表达量为1.09±0.12,与转染空质粒细胞和未转染细胞相比,分别上调了59.21%和58.33%,差异有统计学意义(P<0.05);而基因转染后colon26/CD40L细胞中MMP-2 mRNA水平降低。MTS法检测结果显示,colon26/CD40L细胞的生长速度与未转染细胞无明显变化。FCM法检测结果显示,colon26/CD40L细胞表面共刺激分子CD80和CD86水平升高。同时,Transwell实验结果显示,colon26/CD40L细胞侵袭能力下降(P<0.05)。结论:CD40L基因提高了结肠癌colon26细胞的免疫原性,降低了结肠癌细胞的侵袭能力,抑制了结肠癌细胞的恶性表型。