非小细胞肺癌患者细胞学标本EGFR基因突变检测及其临床病理意义

目的:探讨细胞学标本在非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断及个体化治疗中的临床应用价值。方法:收集352例新鲜细胞学标本制片后,行常规HE染色;同时选择TTF-1、NapsinA、CK7、CEA、CD56、Syn、P63、CK5/6、WT-1、E-cadherin等抗体对来源不明的肿瘤细胞进行免疫细胞化学标记,并对明确诊断为NSCLC的病例,采用突变扩增阻滞系统(ARMS)检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况。结果:352例患者中,345例有癌细胞。经临床及免疫细胞化学证实345例恶性细胞中,NSCLC有335例,且NSCLC细胞学标本中有302例DNA提取成功,占90.15%(302/335)。EGFR基因检测结果显示,EGFR共突变123例,总突变率为40.73%(123/302)。其中,第18、19、20、21外显子的突变率分别为0.99%(3/302)、19.21%(58/302)、0.66%(2/302)和19.87%(60/302);EGFR 18、19、21外显子突变占EGFR突变总数的98.37%(121/123)显著高于EGFR 20外显子突变(P<0.05)。302例患者中,女性患者EGFR突变率为54.35%(75/138),明显高于男性患者29.27%(48/164)(P<0.05);非吸烟患者EGFR的突变率为51.49%(104/202),显著高于吸烟者19%(19/100)(P<0.05)。276例腺癌中EGFR突变率44.20%(122/276);非腺癌EGFR突变率4.34%(1/23);腺癌EGFR突变率明显高于其他类型(P<0.05)。结论:利用新鲜细胞学标本,结合免疫细胞化学标记和ARMS分子病理技术有助于晚期非小细胞肺癌的诊断,并为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)个体化治疗提供可靠依据。

晚期非小细胞肺癌细胞学涂片EML4-ALK融合基因的检测及意义

目的探讨利用细胞学涂片标本对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者进行棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因检测的可行性。方法收集48例NSCLC患者的细胞学涂片标本,HE染色常规诊断,免疫细胞化学染色分型,采用FISH技术检测EML4-ALK融合基因。结果 48例细胞学标本EML4-ALK融合基因阳性率为8.33%(4/48),其中31例NSCLC恶性胸腔积液标本中检测出3例EML4-ALK融合基因,17例NSCLC细针穿刺标本中检测出1例EML4-ALK融合基因。结论采用NSCLC细胞学涂片进行EML4-ALK融合基因检测,方法可靠,具有实用性。

晚期非小细胞肺癌患者恶性胸水中表皮生长因子受体的突变检测

目的探讨胸水表皮生长因子受体(EGFR)基因检测对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗的预测价值。方法纳入62例NSCLC患者,胸水取样通过ARMS检测EGFR基因突变,随访其口服吉非替尼的有效率、疾病控制率及无进展生存期。结果 EGFR突变患者的EGFRTKI治疗的有效率及疾病控制率均优于野生型患者(P<0.05),EGFR突变患者的无进展生存期优于野生型患者,但是两者之间的差异不显著(P>0.05)。结论胸水的EGFR基因检测对于NSCLC患者的EGFR-TKI治疗具有一定的预测价值。

肺腺癌胸腔积液DNA倍体异常与EGFR突变的关系及其对患者预后的影响

目的:回顾性分析转移性肺腺癌胸腔积液细胞的DNA倍体异常和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的关系,及其对肺腺癌患者预后的影响。方法:收集河北医科大学第四医院2012—2019年439例肺腺癌伴恶性胸腔积液患者的临床资料。使用计算机辅助DNA倍体定量分析系统检测胸腔积液中肺腺癌细胞DNA含量,计算大于5c细胞的百分比、大于9c细胞的数目、最大DNA指数(DI)值、大于5c细胞的平均DI值及非整倍体细胞峰。比较DNA倍体异常、EGFR基因突变各组间的差异,并检验DNA倍体异常与EGFR突变的相关性,分析DNA倍体异常及EGFR基因突变在肺腺癌预后中的价值。结果:439例肺腺癌患者中,共有244例(55.58%)检测出EGFR基因突变。与对照组比较,男性、有吸烟史、大于5c细胞的百分比<14%、大于9c细胞的数目<8、最大DI值<6、大于5c细胞的平均DI值<5的患者,其EGFR基因突变率降低(P<0.05)。不同非整倍体细胞峰的EGFR基因突变率不同,双峰和单峰比无峰的EGFR突变率高(P<0.05),而多峰与其他组的EGFR突变率差异无统计学意义(P>0.05)。与EGFR野生型患者相比,EGFR突变型患者的大于5c细胞的百分比、大于9c细胞的数目、最大DI值、大于5c细胞的平均DI值及非整倍体细胞峰的平均秩次更高(P<0.05),且上述5项指标均与EGFR突变均存在较弱的正相关关系(Kendall’s tau-b相关系数分别为0.186、0.153、0.110、0.156、0.148,均为P<0.05)。单因素生存分析显示,大于5c细胞的百分比≥14%、大于9c细胞的数目≥8、EGFR突变患者的中位总生存时间较对照组患者长(P<0.05)。多因素生存分析显示,EGFR基因突变是晚期肺腺癌患者的独立预后影响因素。结论:晚期肺腺癌患者中EGFR基因突变与DNA倍体异常存在关联,DNA倍体异常可能是预测EGFR基因突变的潜在指标。DNA倍体异常不是晚期肺腺癌患者的独立预后因素,但EGFR基因突变患者预后优于野生型患者。

肺腺癌患者新鲜细胞学标本EGFR基因突变检测及意义

目的:研究采用新鲜细胞学标本检测肺腺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,用于辅助判断阳性患者服用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的预后。方法:收集河北医科大学第四医院癌检中心的肺腺癌患者淋巴结针吸标本和胸腔积液标本313例,经HE染色、免疫细胞化学染色后由两位细胞病理医师确诊为肺腺癌后,采用ARMS法进行EGFR基因外显子18~21突变的检测,观察突变情况;对比EGFR基因突变阳性患者采用口服TKI药物靶向治疗或化疗的客观有效率(ORR)和无进展生存期(PFS)。结果:313例标本中确诊为肺腺癌293例,其中288例提取DNA成功并得到检测,提取成功率为98.1%(288/293),检测出130例突变,突变率为45.1%。肺腺癌患者的EGFR突变主要发生在女性、不吸烟患者中,与年龄无明显相关。EGFR基因外显子18~21突变阳性患者靶向治疗组和化疗组之间的ORR差异有统计学意义(P<0.01),靶向治疗组的疗效和生存期都优于化疗组。新鲜细胞学标本检测的EGFR基因突变结果以及所测阳性患者的预后与以往文献均一致。结论:新鲜细胞学标本检测的EGFR突变结果准确,可以作为肿瘤组织的代替标本。

自噬在顺铂诱导食管癌TE1细胞死亡中的作用

目的观察顺铂联合自噬特异性增强剂beclin1和特异性抑制剂3-MA对食管癌细胞增殖抑制的影响,探讨自噬在顺铂诱导的食管癌TE1细胞死亡中的作用。方法 MTT法检测空白对照组、顺铂组、顺铂分别联合beclin1和3-MA组对食管癌TE1细胞增殖抑制作用的影响;Western blot法检测顺铂对食管癌TE1各组细胞中bcelin1蛋白表达的影响;MDC荧光染色检测各组细胞内自噬囊泡数量的变化;流式细胞仪检测各组细胞中细胞周期和凋亡的改变。结果 MTT检测各组细胞的增殖抑制率分别为:1.06%,31.59%,18.93%,51.44%。DDP组能有效抑制TE1细胞的增殖。与单独使用DDP组相比,beclin1+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显降低(P<0.01);3-MA+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显增高(P<0.01);Western blot检测各组细胞中beclin1蛋白表达量分别为0.319±0.029,1.175±0.06,1.537±0.076,0.91±0.047(P<0.01);荧光显微镜观察beclin1+DDP组中MDC标记的自噬荧光强度最高,细胞质内出现了明显的绿色荧光;FCM检测细胞周期分布结果显示,各组细胞中G0/G1期细胞比例分别为(44.82±0.437)%,(56.25±0.624)%,(27.553±0.085)%,(66.48±0.638)%;各组细胞中S期细胞比例分别为(34.85±0.235)%,(24.417±0.607)%,(51.8±0.721)%,(19.167±0.666)%。各组细胞的凋亡率分别为(1.237±0.015)%,(4.813±0.025)%,(1.32±0.01)%,(6.117±0.035)%(P<0.01)。结论顺铂可以诱导食管癌TE1细胞自噬和凋亡;反应性的自噬活性增强可能与顺铂耐药的形成有关,自噬水平的下调可能增加了食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,提示监测及调控肿瘤细胞的自噬水平可能为逆转食管癌顺铂耐药提供新的思路。

非小细胞肺癌EGFR基因突变在外周血与淋巴结针吸标本中的对比分析

目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测105例NSCLC患者淋巴结针吸标本及其配对外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和淋巴结针吸标本基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与NSCLC临床病理特征的关系。结果105例外周血中检出45例突变(突变率为42.86%),淋巴结针吸标本中检出50例突变(突变率为47.62%),两者一致性为83.81%(88/105),差异有统计学意义(Kappa=0.674,P<0.001)。外周血标本EGFR基因突变与患者性别、是否吸烟、临床分期及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄及淋巴结直径无关(P>0.05);淋巴结针吸标本EGFR基因突变状态与患者性别、是否吸烟及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄、淋巴结直径及临床分期无关(P>0.05)。结论NSCLC患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为NSCLC患者提供临床诊疗帮助。

细针穿刺诊断乳腺鳞癌1例

患行女性．45岁。4天前无意中发现左乳肿物，左乳钼靶考虑乳腺癌B1-RADS V类。

肺腺癌胸水细胞学标本中PD-L1的表达及其与临床和分子特征的关系

目的评估胸水细胞学标本与配对组织学标本中PD-L1检测的一致性。方法采用全自动免疫组化仪对63例肺腺癌胸水细胞学标本和配对肺组织标本进行PD-L1免疫细胞化学及免疫组化染色;收集临床数据并检测胸水细胞学标本肺癌相关基因的突变状态。结果63例胸水细胞学标本与组织学标本的肿瘤细胞数量均满足检测要求。22.2%(14/63)的胸水细胞学标本PD-L1 TPS≥50%,36.5%(23/63)为1%~49%,41.3%(26/63)TPS<1%。PD-L1细胞学表达与组织学表达的符合率为77.8%,胸水细胞学标本与组织学标本中PD-L1的表达具有高度一致性(Kappa=0.650,P<0.01)。胸水细胞学标本中PD-L1表达与患者性别、年龄、淋巴结转移状况及EGFR突变状态无相关性(P>0.05),而与吸烟相关(P<0.05)。结论胸水细胞学标本与配对肺腺癌组织学标本中PD-L1的表达具有高度一致性,胸水细胞学标本是晚期肺腺癌患者行PD-L1检测的最佳选择。

针吸细胞学诊断甲状腺髓样癌2例

例1男性，35岁，囚发现颈部肿块2年入院。查体：甲状腺多发结节，较大并约2em，质巾，界欠清。B超：甲状腺左、右叶分别可见1-2个低回声结节，直径分别为1．0cm、1．5cm和2．3cm；甲状腺功能检奄正常。针吸检查：触及右侧较大结节行穿刺术，进针后感觉质稍脆，抽出少许血样物。例2女性，55岁，㈥右颈逐渐增大的肿块半年余而人院。查体：

非小细胞肺癌患者外周血及胸水中EGFR基因突变的研究

目的检测非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本在EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测51例非小细胞肺癌患者新鲜胸水及其外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和新鲜胸水基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与患者临床特征关系。结果 51例外周血中检出20例突变(突变率39.2%),其中19del突变11例(55%,11/20),L858R突变8例(40%,8/20),G719X突变1例(5%,1/20);新鲜胸水中检出24例突变(突变率47.1%),其中19del突变13例(54.2%,13/24),L858R突变10例(41.7%,10/24),G719X突变1例(4.1%,1/24)。两者突变一致性为80.4%(41/51),差异具有统计学意义(Kappa=0.603,P=0.000)。外周血及新鲜胸水EGFR基因突变状态均与性别、是否吸烟和病理类型有关(P<0.05),而与年龄及TNM分期无关(P>0.05)。结论非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为非小细胞肺癌患者提供临床诊疗帮助。

自噬在非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗中的作用

自噬是一种应激细胞反应,其与耐药的产生密切相关。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)对EGFR突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者有效;然而NSCLC的EGFR突变患者最终对EGFR-TKIs产生了耐药性。目前,自噬在EGFR-TKIs治疗中的作用尚存在争议,一方面,自噬抑制剂克服EGFR-TKIs的耐药性,增强了药物疗效;另一方面,自噬激活剂的使用促进了凋亡,从而增加药物疗效。该文着重对自噬在NSCLC的EGFR-TKIs治疗中的作用进行综述。

细针穿刺细胞学诊断原发性腮腺黏液腺癌1例

患昔女性，60岁，因右耳下肿物8个月，局部无疼痛、麻木等不适症状，肿物生长缓慢，于2013年4月12日来我院就诊．查体：右侧腮腺下极处隆起，表面皮色正常，皮温不高，可触及一大小5cm×3．5cm×3cm的肿物，界限清，质地中等偏硬，可推动，无明显触痛。

郑氏植物蛋白对乳腺癌及其癌前病变患者PBL的刺激作用及其意义

目的 :研究郑氏植物蛋白 (Zheng’splant protein ,ZPP)对淋巴细胞的刺激作用及其在乳腺癌早期诊断与治疗中的应用价值。方法 :采用3 H TdR掺入法测定人外周血淋巴细胞(PBL) )的增殖反应。用流式细胞仪测定ZPP对T淋巴细胞CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 抗原表达的调节作用。结果 :ZPP对乳腺癌及其前期病变患者PBL有较强的刺激作用 (SI分别为3.0 0± 1.4 5和 2 .5 3± 0 .80 ) ,明显高于对正常对照组和乳管上皮轻度增生患者PBL的刺激指数 (SI分别为 1.0 6± 0 .17和1.18± 0 .19) (P <0 .0 1)。而PHA对各组PBL的增殖反应均有不同程度的刺激作用 ,但各组间无明显差异 (P >0 .0 5 ) .经ZPP刺激后的PBL中CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 细胞均发生增殖反应 ,其中CD4 + 和CD8+ 者更为明显。结论 :ZPP可选择性刺激乳腺癌及其前期病变患者的PBL中T细胞发生增殖反应 。

胸腔积液肺腺癌细胞中CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin的表达及其与EGFR突变状态的关系

目的:研究胸腔积液肺腺癌细胞中趋化因子受体4(CXCR4)、增殖细胞核抗原Ki67、鼠双微体2(MDM2)和N-钙黏蛋白(Ncadherin)的表达与表皮生长因子受体(EGFR)突变状态的相关性。方法:收集46例晚期肺腺癌患者的胸腔积液,采用HE染色联合免疫细胞化学染色(ICC)法检测胸腔积液中是否含肿瘤细胞,突变扩增系统(ARMS)检测胸腔积液中癌细胞的EGFR基因突变状态,将癌细胞分为EGFR-TKI敏感突变组和EGFR野生型组。采用ICC法检测胸腔积液中肺腺癌细胞CXCR4、Ki67、MDM2和Ncadherin的表达,分析这些蛋白的表达阳性率和EGFR突变状态的相关性。结果:46例肺腺癌患者的恶性胸腔积液细胞中,31例(67.4%)存在EGFR-TKI敏感突变。CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达阳性率与EGFR突变状态相关(r分别为0.452、0.428、0.417、0.524,均为P<0.05),且EGFR-TKI敏感突变组细胞CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达的阳性率明显高于EGFR野生型组(P<0.05)。结论:EGFR突变状态与CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达相关,EGFR突变状态下,胸腔积液肺腺癌细胞的CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达阳性率高于非突变状态下的表达阳性率。

EGFR突变对肺腺癌细胞自噬活性及LC3、Beclin1基因表达的影响

目的观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变对肺腺癌细胞自噬活性和自噬相关基因LC3、Beclin1的影响。方法采集100例肺腺癌患者的胸腔积液,收集细胞进行ARMS定量荧光PCR检测EGFR基因突变情况,依据检测结果将患者分为突变组40例和非突变组60例,Western Blot检测EGFR、LC3、Beclin1蛋白表达,RT-PCR检测自噬相关基因LC3、Beclin1的mRNA水平。结果EGFR突变组EGFR的蛋白和mRNA表达水平明显低于EGFR非突变组(P<0.05);Western Blot结果显示,EGFR突变组自噬相关基因LC3和Beclin1的蛋白表达水平显著高于EGFR非突变组(P<0.05);RT-PCR结果显示,EGFR突变组自噬相关基因LC3和Beclin1的mRNA表达水平显著高于EGFR非突变组(P<0.05)。结论EGFR与肺腺癌细胞自噬活性存在明显的相关性,EGFR突变可以增强肺腺癌细胞自噬活性,增加自噬LC3和Beclin1基因的表达,对于肺腺癌的临床研究和靶向治疗具有重要意义。

HE染色细胞学涂片和FFPE标本用于EGFR突变检测的对比分析

目的探讨HE染色细胞学涂片与FFPE标本中EGFR检测的一致性。方法收集275例HE染色细胞学涂片标本,经HE染色及免疫细胞化学染色确诊为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),刮取HE染色细胞学涂片中的肿瘤细胞进行DNA提取,并行EGFR检测,与配对的275例FFPE标本应用荧光PCR法检测EGFR突变。结果113例HE染色细胞学涂片检测有EGFR突变,阳性率为41.1%;其中G719X突变4例,19del 41例,L858R突变58例,20ins 3例,获得性耐药T790M和19del双突变6例,L858R和S768I双突变1例。113例FFPE标本检测到EGFR突变,其中G719X、L858R、20ins、L858R和S768I双突变结果与细胞学结果一致,19del 47例,未检测到T790M和19del双突变。2例EGFR野生型FFPE标本检测失败。结论HE染色细胞学涂片与FFPE标本EGFR检测比较,具有较好的敏感性和特异性。HE染色细胞学涂片可广泛用于EGFR检测,是一种稳定、结果可靠的检测方法,尤其对于不能获得组织标本进行病理诊断的患者,可以指导临床酪氨酸激酶抑制剂的治疗。

沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响

目的:研究降低表皮生长因子受体(EGFR)的表达对肺腺癌A549细胞自噬活性的影响.方法:A549细胞中加入EGF处理,分为4组,即未处理组和10、25、50 ng/mL EGF处理组,用Western blot方法检测EGFR的蛋白表达;采用转染siRNA降低肺腺癌细胞A549细胞EGFR的表达,将A549细胞分为4组,即未处理组、EGFR siRNA-1组、EGFR siRNA-2组和EGFR siRNA-3组,分别采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测EGFR mRNA和蛋白表达水平来评价3个siRNA的沉默效果;将A549细胞分为转染EGFR siRNA组、转染空载体组、转染试剂组(只加入等量转染试剂)及未处理组,且4组均加入等量的50 ng/mL EGF,用Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,观察沉默EGFR表达对自噬活性变化;A549细胞分为转染EGFR siRNA组和转染空载体组,用透射电子显微镜观察自噬小体.结果:转染siRNA后A549细胞EGF蛋白的表达降低,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化水平升高(P<0.05),细胞内出现较多自噬小体,自噬活性明显增加.结论:降低EGFR的表达可以提高肺腺癌A549细胞自噬活性.

甲状腺髓样癌1例

患昔女性，78岁，因甲状腺肿物及纵膈病变入院。入院后查血Calcitonin〉2000pg／mL（5．17～9．82pg／mL）、CEA35．43．g／mL（0～5ng／mL）、TG在正常参考值内。颈部超声：甲状腺多发实性及囊实性结节，考虑为TI-RADS3级；左侧颈部及锁骨上窝多发实性占位。CT示：气管周围前上纵膈软组织肿物，侵袭性胸腺瘤？

Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达

目的探讨转染Beclin1质粒的自噬基因Beclin1和免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达,分析Beclin1在卵巢癌免疫应答中的作用。方法应用基因转染技术、RT-PCR、Western blot法检测Beclin1质粒转染SKOV3细胞前后Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ的mRNA和蛋白表达水平的变化。应用免疫荧光显微镜观察Beclin1质粒转染SKOV3细胞后,其自噬小体的变化。用MTT法检测Beclin1质粒转染SKOV3前后细胞的增殖活性。结果 SKOV3细胞转染Beclin1质粒后,Beclin1的转录和翻译水平分别是空载体组的5、2倍。荧光显微镜观察,转染Beclin1质粒组卵巢癌细胞MDC标记的自噬小体数量显著增多。RT-PCR和Western blot结果显示,转染Beclin1可诱导HLAⅠ、Ⅱ等位基因的转录和翻译。Beclin1质粒组的HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的mRNA分别是空载体组的2、1.6、3倍和2、6、3倍;其HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表达分别是空载体组的2、1.6倍。MTT结果显示,Beclin1质粒组与空载体组、空白对照组相比,在转染24、48、72、96 h后,其细胞生长抑制率分别为42.6%、37.8%、24.35%、14.81%。结论在人卵巢癌SKOV3细胞中,转染外源性Beclin1可诱导细胞自噬并使免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ的表达增加。HLAⅠ、Ⅱ表达的增加可能使卵巢癌细胞免疫应答增强。转染外源性Beclin1可抑制卵巢癌SKOV3的细胞增殖。