六种中草药抗突变及抗肿瘤活性的实验报告

目的 :探讨仙鹤草、山楂、香菇、杏仁、大枣、板蓝根等 6种中草药的抗突变抗肿瘤作用及其机制。方法 :采用抗突变和致突变同步快速试验研究了 6种中草药的抗突变和致突变性 ;采用体外抑瘤试验研究了 6种中草药的 4个浓度组对 4种肿瘤细胞的抑制作用。结果 :经加和不加大鼠肝脏微粒体酶 (S9) 2种试验 ,6种中草药均未显示有致突变毒性 ,香菇、山楂、杏仁、大枣显示对MMC引起的致突变作用有拮抗效应 ;仙鹤草、山楂、香菇水溶性提取液的各浓度组对 4种肿瘤细胞的3 H TdR掺入均有抑制作用 ,且随浓度的增加 ,抑制作用有增强趋势。结论 :香菇、山楂、杏仁、大枣具有抗突变活性 ,仙鹤草、山楂、香菇对MT Ⅱ、L92 9、SK、K562 4种细胞的DNA合成有明显抑制作用。

贲门腺癌中E-钙黏蛋白基因甲基化状态研究

目的:研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的基因甲基化状态及其蛋白表达情况。方法:分别应用巢式甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的甲基化和蛋白表达情况。结果:92例贲门癌组织中有63例E-cadherin发生了甲基化,甲基化率为68.5%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001);Ⅲ期和Ⅳ期的发生率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P=0.01);低分化腺癌组发生甲基化的比率显著高于中、高分化腺癌组(P<0.01)。92例贲门癌组织中有51例蛋白表达呈明显的异质性,贲门癌组织的E-cadherin蛋白表达率为44.6%,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.001)。Ⅲ期和Ⅳ期患者的蛋白表达明显低于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.01);低分化腺癌组的蛋白表达率也低于中、高分化腺癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:E-cad-herin基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一,可作为反映贲门腺癌生物学行为的指标。

贲门腺癌、癌前病变组织和血浆中HLTF基因启动子区甲基化状态的对比研究

目的:研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)及癌前病变患者组织及血浆中螺旋酶样转录因子(heli-case-like transcription factor,HLTF)基因启动子区甲基化状态,探讨其在贲门癌发生和早期诊断中的价值。方法:采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific PCR,nMSP)的方法检测贲门腺癌及癌前病变患者病变组织及其血浆中HLTF基因的甲基化情况。结果:HLTF基因在轻、中、重度不典型增生、贲门原位癌及贲门腺癌组织中的甲基化率分别为13.5%(7/52)、24.0%(6/25)、38.9%(7/18)、42.9%(3/7)和45.8%(44/96)。在贲门慢性炎症患者及健康对照者中未发现HLTF基因的甲基化。重度不典型增生、贲门原位癌及贲门腺癌组织中HLTF的甲基化率明显高于贲门慢性炎症患者及健康对照者(P<0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者组织中HLTF基因发生甲基化的比率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)。有上消化管肿瘤家族史的阳性贲门癌患者组织中发生HLTF甲基化的比率明显高于家族史阴性患者(P<0.05)。癌前病变和贲门慢性炎症患者及健康对照者的血浆中未发现HLTF基因的甲基化,7例贲门原位癌患者血浆中有1例(14.3%)发现HLTF甲基化,96例贲门癌患者血浆中有20例(20.8%)发现HLTF甲基化。结论:HLTF基因启动子区甲基化可能是贲门腺癌发生的早期分子事件及其贲门腺癌发生的机制之一。

放射性食管炎动物模型的构建

目的:用Wistar大鼠作为实验对象,构建放射性食管炎动物模型。方法:分别用不同剂量的^(60)Co-射线局部照射Wistar大鼠,照射后第7天处死大鼠,取全长食管组织作石蜡包埋、切片、HE染色、组织化学染色-Van Gieson染色,与空白组对照,进行病理学分析。观察43Gy^(60)Co照射后7、14、21和28d大鼠全长食管的病理变化。观察43Gy^(60)Co照射组放射性射线照射后与正常对照组相比大鼠1周内每日饮食量、饮水量的变化。结果:经不同剂量^(60)Co-射线对食管局部照射后,从22Gy开始,Wistar大鼠可出现放射性食管炎(16.67%),随着照射剂量的增加放射性食管炎发生率呈增加趋势。当照射剂量达43Gy时,照射组大鼠全部出现放射性食管炎病理改变,P<0.001。大鼠经43Gy射线局部照射后1、2周食管组织变化积分差异无统计学意义,P>0.05。放射性食管炎动物模型构建成功时,实验动物饮食量和饮水量达到最低点。结论:Wistar大鼠经43Gy^(60)Co-射线局部照射后第7天,放射性食管炎动物模型建立。

贲门腺癌中VEGF-C、VEGF-D和D2-40的表达及意义

目的以一种新的淋巴管特异标记物D2-40标记贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)及癌周组织淋巴管,并进行淋巴管计数,研究其与VEGF-C、VEGF-D表达的关系及其临床病理意义。方法应用免疫组化SP法检测贲门癌、癌旁及正常黏膜组织中VEGF-C、VEGF-D、D2-40的表达情况。结果癌及癌旁组中淋巴管密度(lymphatic vesseldensity,LVD)明显高于正常组(P<0.05),而癌组与癌旁组间LVD统计学无明显差异。癌组织中LVD与淋巴结转移、TNM分期及肿瘤浸润深度呈正相关(P<0.01),而与分化程度无关;VEGF-C、VEGF-D在贲门癌中的表达明显高于癌旁组和正常组(P<0.01);癌组织中LVD在VEGF-C和VEGF-D表达阳性组中高于阴性组(P<0.05);LVD与VEGF-C、VEGF-D的表达呈正相关(P<0.05)。结论贲门癌及癌周间质中D2-40标记的LVD升高可能增加了贲门癌淋巴结转移的风险;D2-40、VEGF-C、VEGF-D的联合检测可作为评估贲门癌淋巴结转移潜能的标志物,并且对其预后评估有一定的价值。

贲门腺癌中SFRP1、DKK3基因启动子区甲基化状态的联合分析

目的研究贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中Wnt通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和DKK3(Dickkopf3)基因的甲基化状态,探讨其与贲门腺癌发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测89例贲门腺癌及相应正常黏膜组织中SFRP1和DKK3基因的甲基化状态,并分析与临床病理参数间的关系。结果89例贲门腺癌组织中SFRP1和DKK3基因发生甲基化的分别有77例(86.5%)和16例(20.0%),而正常黏膜组织中仅有15例(13.9%)发生了SFRP1基因的甲基化,未发现有DKK3基因的甲基化现象,癌组织中两基因的甲基化率均明显高于正常黏膜组织(P<0.05);SFRP1基因的高甲基化与肿瘤组织的淋巴结转移相关,而与肿瘤的浸润深度、临床分期及病理分级无关,DKK3基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P>0.05);联合分析SFRP1和DKK3基因,在贲门腺癌组织中两基因共同发生甲基化的有12例,其共同甲基化率与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论贲门腺癌中SFRP1和DKK3基因的高甲基化状态可能是引起贲门腺癌发生的分子机制之一;SFRP1、DKK3基因甲基化的联合检测对于贲门腺癌的预后评估有一定的参考价值。

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

目的研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。结果92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01)。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异(P<0.01)。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织(P<0.01)。结论RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。

Syk、c-erbB-2和EGFR在贲门腺癌中的表达及其临床意义

目的:检测贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中抑癌基因脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)及原癌基因c-erbB-2、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达情况,探讨其相互关系及其与贲门腺癌发生、发展的关系。方法:收集河北医科大学第四医院胸外科2006年10月至2007年2月手术切除贲门腺癌标本91例,患者术前未经任何抗癌治疗。应用免疫组化SP法检测贲门腺癌组织及相应切缘外正常黏膜组织中Syk、c-erbB-2、EGFR的表达情况,进行相关性比较。结果:Syk在贲门腺癌组织的阳性表达率为24.18%,明显低于相应切缘外正常组织(60.44%,P<0.01)。c-erbB-2、EGFR在贲门腺癌组织的阳性表达率分别为56.04%和58.24%,明显高于其在相应切缘外正常组织中的阳性表达率(20.88%,21.98%;均P<0.01)。Syk及c-erbB-2表达均与肿瘤组织的病理分级、淋巴结转移及TNM分期有明显的相关性(P<0.05或P<0.01)。EGFR表达仅与淋巴结转移相关(P<0.01)。Syk与c-erbB-2和EGFR表达均有相关性(P<0.05),而Syk和EGFR表达两者无明显相关性(P>0.05)。结论:Syk、c-erbB-2、EGFR基因在贲门腺癌中均异常表达,可能与贲门腺癌的发生有关;3种蛋白的联合检测对贲门腺癌的预后评估有一定的指导意义。

NDRG2基因在贲门腺癌中的甲基化状态及表达

目的:探讨贲门腺癌(GCA)中NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2)基因启动子区的甲基化状态,并分析其甲基化与表达之间的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中基因的甲基化状态,应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2的mRNA和蛋白表达情况。结果:NDRG2基因启动子区在贲门腺癌组织中的甲基化率(49.5%)显著高于癌旁正常组织(5.1%)(P<0.05),且Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中NDRG2基因甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者,低分化组中NDRG2基因发生甲基化的比率显著高于高中分化组。贲门腺癌组织中NDRG2 mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达阳性率为44.3%(43/97),显著低于相应癌旁正常组织的蛋白表达94.8%(92/97)(P<0.01),且贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达缺失与其启动子区的甲基化有明显的相关性(r=-0.510,P<0.01)。结论:NDRG2基因启动子区的高甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因表达降低的机制之一。

包含氧化还原酶的WW结构域基因甲基化与食管鳞状细胞癌的关系

目的:研究食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)包含氧化还原酶的WW结构域(WW domain containing oxidoreductase,WWOX)基因启动子甲基化及mRNA的表达与ESCC发生发展的关系。方法:采用改进的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和RT-PCR技术检测69例ESCC组织及48例相应癌旁正常组织中WWOX基因的DNA甲基化和mRNA表达情况。结果:ESCC组织中WWOX基因启动子的甲基化发生率为26.1%(18/69),显著高于癌旁正常组织4.2%(2/48)(P=0.002);Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者中WWOX基因甲基化发生率(43.3%,13/30)显著高于Ⅰ、Ⅱ期(12.8%,5/39)(P=0.004);低分化癌组的甲基化发生率(33.3%,4/12)高于高分化(20.0%,3/15)和中分化组(26.2%,11/42),但其差异均无统计学意义(P>0.05)。ESCC组织中WWOX基因mRNA的相对表达量比相应癌旁正常组织低,差异具有统计学意义(P<0.05)。ESCC组织中WWOXmRNA的相对表达量与临床病理因素无明显相关关系(P>0.05)。结论:WWOX基因启动子甲基化可能与ESCC的形成和进展有关。

贲门腺癌中转化生长因子βⅡ型受体基因启动子区高甲基化及其与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-beta receptor type 2,TGFBR2)基因启动子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织中TGFBR2基因启动子区甲基化情况、TGFBR2 mRNA和蛋白表达情况,并应用免疫组织化学法检测相应组织中TGF-β1的蛋白表达情况。结果:TGFBR2基因在贲门腺癌组织中甲基化率为47.3%(52/110),显著高于癌旁正常组织(P<0.01);Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中TGFBR2基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05);TGFBR2基因在高、中、低分化的贲门癌组织中甲基化率差异亦有统计学意义(P<0.05)。贲门癌组织中TGFBR2 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05)且与其甲基化状态之间有明显的相关性(P<0.01)。TGF-β1在贲门癌组织中的表达(65.5%)明显升高,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05)。TGFBR2和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关(P<0.05)。结论:TGFBR2受体基因启动子区的高甲基化及其TGF-β1的过表达可能均参与了贲门腺癌的发生发展过程。TGFBR2基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。