逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在小鼠结肠癌细胞中的表达及其抗肿瘤活性

目的: 获得表达小鼠IL -23 (mIL- 23 )基因的小鼠结肠癌细胞株。方法: 应用逆转录病毒载体, 将mIL -23基因导入小鼠结肠癌细胞株Colon26, 经G418筛选后获得表达mIL 23的阳性细胞克隆(Colon26 /IL- 23)。用PCR和RT -PCR检测目的基因的表达, 用ELISA法检测mIL -23的产生及mIL- 23诱导的小鼠脾细胞IFN -γ的产生, 用MTT比色法检测Co lon26 /IL -23细胞和Colon26细胞的体外增殖。将Colon26 /IL- 23细胞接种于BALB/c小鼠的右侧背部皮下, 观察其致瘤性。结果: 建立了可表达mIL -23基因的小鼠结肠癌细胞株。分泌至培养上清中的IL -23, 可诱导小鼠脾细胞产生IFN- γ。在体外Colon26 /IL- 23细胞的生长与Colon26细胞无明显不同, 但其在体内的致瘤性下降, 具有抗瘤作用。结论: Colon26 /IL- 23细胞可分泌IL -23并证明其具有抗瘤活性。

一种植物由来的糖蛋白(郑氏植物蛋白)——肿瘤相同性抗原的研究

目的 :研究一种植物提取物的肿瘤相同抗原性及其在肿瘤早期诊断上的应用。方法 :采用3H掺入法测定了淋巴细胞和肿瘤细胞增殖反应 ;将人新鲜肿瘤组织块移植于小鼠 ,观察肿瘤在异种动物体内成活情况。瘤细胞DNA含量用流式细胞仪测定。通过凝胶层析及SDS PAGE等方法对该提取液进行了化学成分鉴定。结果 :该植物提取物对恶性肿瘤和癌前病变患者的淋巴细胞增殖有很强的刺激作用 (P <0 0 1) ,但对正常人淋巴细胞无刺激作用。提取物对 70 %以上肿瘤患者的肿瘤细胞增殖有刺激作用。将人新鲜肿瘤组织块移植到经该提取物预处理的幼鼠后 ,成活率达 90 %以上 ,而且可以成功传代 ;未经提取物预处理的小鼠 ,30天后肿瘤组织死亡而被吸收。经初步鉴定 ,该提取物的化学成分为 5 0kD的糖蛋白。结论 :该植物糖蛋白具有肿瘤抗原活性或肿瘤相同抗原性 ,这种特性可应用于肿瘤诊断、治疗和肿瘤疫苗制备等。

syk基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞侵袭性抑制作用的体外研究

目的:构建非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在乳腺癌细胞中稳定表达,为进一步探讨Syk抑制肿瘤细胞侵袭转移的具体机制奠定基础。方法:构建syk基因的真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/syk,以脂质体介导法转染Syk表达缺失的MDA-MB-231细胞,经G418筛选,获得syk基因稳定表达的MDA-MB-231/syk细胞。通过流式细胞术和RT-PCR技术检测转染细胞MMP-9的表达变化,用体外迁移和侵袭力实验测定转染细胞的迁移和侵袭能力。结果:构建了syk基因的真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/syk,并在MDA-MB-231细胞中获得稳定表达。与野生型MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/syk细胞表达MMP-9的水平明显降低(P<0.01),并且该细胞的迁移和侵袭能力也明显降低(P<0.01)。结论:候选抑癌基因syk通过脂质体可有效转染MDA-MB-231细胞,MDA-MB-231/syk细胞迁移和侵袭能力明显降低,这为进一步研究Syk在体内的抑瘤作用和乳腺癌基因治疗奠定了基础。

中药拮抗P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展

综述了近年来中药提取物拮抗 P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展。中药通过多种途径抑制 P-糖蛋白的表达和其功能而拮抗多药耐药。许多中药成分既可以从转录和翻译水平抑制 P-糖蛋白的表达 ,还可以通过与抗癌药物竞争 P-糖蛋白的药物或 ATP结合位点、或通过对肿瘤细胞膜或 Ca2 + 浓度的影响等而抑制 P-糖蛋白的功能。另外 ,有的中药可以通过增强细胞免疫功能而拮抗 P-糖蛋白介导的多药耐药。

HSP70多肽复合物的抗肿瘤作用研究

目的:研究HSP70多肽复合物对结肠癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法:Colon26细胞经42℃水浴1h、再分别于37℃培养8和12h,并用反复冻融法筛选出含有高表达HSP70多肽复合物的瘤细胞裂解液。建立Colon26细胞的荷瘤小鼠模型,分别将含有高表达HSP70多肽复合物的瘤细胞裂解液(实验组),常规培养条件下制备的瘤细胞裂解液(对照组Ⅰ),以及PBS(对照组Ⅱ)分4次注射于小鼠皮下,观察小鼠体内成瘤性、生长情况及小鼠生存期。用流式细胞技术检测小鼠脾脏+++CD3、CD4和CD8等T细胞亚型的变化。用ELISA法检测荷瘤小鼠血清中TGF-β1和IFN-γ水平的变化。结果:将高表达HSP70多肽复合物的瘤细胞裂解液注射于荷瘤小鼠后,小鼠的肿瘤生长速度、肿瘤体积和质量明显小于对照组Ⅰ与对照组Ⅱ,生存期也明++显延长(P<0.05);实验组小鼠脾脏单个核细胞表面分子与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比CD8T细胞显著增加(P<0.05),而CD3和++CD4/CD8T细胞显著降低(P<0.05);实验组小鼠血浆中TGF-β1与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比显著降低(P<0.05),但IFN-γ含量则显著升高(P<0.05)。结论:含高表达HSP70多肽复合物的瘤细胞裂解液能抑制荷瘤小鼠瘤组织增长,延长荷瘤小鼠生存期,证明该多肽复合物通过调节免疫功能在小鼠体内发挥抗肿瘤作用。

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。

血管内皮生长因子在食管癌组织中的表达及其临床意义研究

目的探讨食管癌组织中VEGF的表达水平与食管癌生物学特性的关系。方法应用免疫组化法分析人食管癌组织中VEGF的表达和微血管密度;应用RT-PCR法检测食管癌组织及人食管癌细胞株VEGFmRNA的表达。结果食管癌组织的VEGF阳性表达率为70.9%,VEGF在肿瘤组织的表达水平明显高于癌旁组织,其表达水平与肿瘤的病理学分级、肿瘤的浸润深度及淋巴结转移等行为有关。食管癌组织中微血管分布不均,血管密集区主要集中在癌灶边缘;MVD与肿瘤的分化程度和淋巴结转移相关;MVD与VEGF的表达之间存在正相关关系。食管癌组织的VEGFmRNA表达比癌旁组织增高,以VEGF189、VEGF165和VEGF121三种亚型为主。结论VEGF在食管癌组织中呈高表达状态,该现象与肿瘤的恶性程度、转移情况及微血管形成能力相关。

中药香加皮与其易混品体外抑瘤效果研究

背景与目的:比较中药香加皮及其易混品水提取物的体外抗肿瘤效果。材料与方法:采用四甲基偶氮唑蓝(3_[4,5_dimethylthiazol_2_yl]_2,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT)法测定了中药香加皮及其易混品水提取物对多种不同组织来源的肿瘤细胞增殖反应的影响。结果:香加皮水提取物对人红白血病细胞株K562,人胃癌细胞株BGC_823,人食管癌细胞株TE_13的增殖有明显的抑制作用,且量效关系明显;对实验组其它肿瘤细胞株也有较高抑制率。香加皮易混品水提取物对肿瘤细胞虽也有一定的抑制作用,但其强度明显弱于香加皮水提取物。结论:香加皮水提取物对不同组织来源的肿瘤细胞株有广泛的抑制作用,其抗肿瘤作用明显高于其易混品,香加皮作为抗肿瘤药物有待进一步开发。

中药香加皮提取物的体内外抑瘤效果研究

背景与目的:研究中药香加皮水提取物(cortex periplocae extract,CPE)的体内、外抗肿瘤效果。材料与方法:采用MTT法和克隆形成实验,检测CPE对6种不同组织来源肿瘤细胞(K562、BGC-823、TE-13、SMMC-7721、MCF-7和HeLa)增殖反应的影响;将CPE灌胃给予S180和colon26荷瘤小鼠,观察其对肿瘤形成及小鼠生存期的影响。结果:CPE对6种不同肿瘤细胞株均有明显的抑制作用(P<0.05),其中对K562,BGC-823,TE-13的抑制作用量效关系明显(r分别为0.89、0.71和0.72,P值均<0.05)。将CPE灌胃S180或colon26荷瘤小鼠,可明显抑制肿瘤在体内的生长,并可明显延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.05)。结论:CPE对6种不同组织来源的肿瘤细胞均具有抑制作用,可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠寿命。香加皮作为抗肿瘤药物有待进一步开发研究。

香加皮水提物对小鼠淋巴细胞免疫调节作用的初步研究

目的：研究中药香加皮水提取物（cortex periplocae extract,CPE）对小鼠免疫功能的调节作用。方法：无菌分离小鼠淋巴细胞,与不同浓度CPE（250、125、64、32、16、8μg/ml）共同培养一定时间后,采用MTT法测定其对刀豆素A（ConA）诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的影响,采用LDH酶释放法测定对NK细胞杀伤活性的影响;采用对肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）敏感的L929细胞,使用生物法测定CPE对单核细胞产生TNF-α的影响。各实验均设对照组。结果：CPE在8-64μg/ml的浓度范围内可不同程度的提高小鼠体外淋巴细胞转化率和NK细胞杀伤活性,以及促进单核细胞分泌TNF-α,与对照组比较差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：一定剂量的CPE可以提高小鼠淋巴细胞的免疫功能,从而发挥抗肿瘤作用。

五加皮Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布

目的探讨五加皮抗肿瘤成分A ge蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布。方法用氯胺T法对A ge蛋白进行125I标记(形成125I-A ge),由尾iv小鼠后,于不同时间取组织和血液标本,测定放射cpm比值。以放射参与量(即脏器与血液中cpm比值)作为125I-A ge在组织中分布的依据。结果在一次性快速iv125I-A ge 2 h后,正常小鼠和荷瘤小鼠体内均以肾脏中125I-A ge的分布量最高,肝脏和肺部放射参与量也较高,与心脏、脾脏等其他脏器相比差异有显著性(P<0.01);尿中125I-A ge的量很高。iv同等剂量125I-A ge后,荷瘤小鼠的肾脏、肝脏和肺部组织的放射参与量比正常小鼠偏高(P<0.05)。结论五加皮A ge蛋白在小鼠体内主要分布于血流丰富的组织,主要通过泌尿系统排泄,不易透过血脑屏障。

MDR逆转因子筛选技术P-gp细胞系的建立及其生物学特性评价

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达Pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转Pgp的药物。方法经RTPCR反应得到小鼠肿瘤细胞PgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞PgpmRNA和Pgp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性。结果成功构建了稳定表达特异性Pgp基因和Pgp分子的BMDC1(ADR+/+)细胞系。经阿霉素诱导,BMDC1(ADR+/+)细胞Pgp的表达明显增高,在阿霉素增加至12000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而BMDC1(wt)细胞在1000ng/mL时100%细胞死亡。BMDC1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD123有较低的聚集量和较高的排放量,加入Pgp逆转剂Verapamil后,BMDC1(ADR+/+)细胞MD123聚集量增加,药物外排作用消失。结论BMDC1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转Pgp的药物,Verapamil可逆转Pgp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转Pgp耐药性。

间充质干细胞应用于类风湿关节炎组织修复的研究进展

类风湿关节炎(RA)是以滑膜炎及其所致的关节损伤为特征的自身免疫性疾病,现有的治疗方法多是通过药物抑制滑膜炎,而修复关节破坏的疗效甚微。由于间充质干细胞(MSC)是一类具有免疫调节作用,兼具多向分化潜能的干细胞,因此研究者希望通过其在抑制关节炎的同时,修复关节损伤。目前已有将MSC用于RA患者或动物模型治疗的研究报道,但研究结果存在分歧,且关于改善关节破坏的研究相对较少。本文主要总结MSC在RA组织修复中的研究进展,为临床治疗提供参考。

Syk对三氧化二砷诱导脑瘤细胞周期阻滞的影响

背景与目的:探讨Syk(Spleentyrosinekinase)的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的作用。材料与方法:将syk基因整合至逆转录病毒载体pIND,与载体pVgRXR协同转染携带突变P53基因的脑瘤细胞U373,诱导Syk表达。用Westernblot法分析Syk诱导细胞周期负性调控因子P21的表达;用流式细胞仪分析细胞DNA含量,用共聚焦显微镜观察Syk的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的调节作用。结果:转染syk基因的U373细胞(U373Syk_ind)在诱导剂PonA的作用下表达Syk蛋白。As2O3可使U373细胞周期停滞于G2/M期,而表达Syk的U373细胞被As2O3阻滞于G2/M期的细胞比例下降。Syk的表达可上调P21的表达。结论:As2O3可影响脑瘤细胞U373的细胞周期发展,将其阻滞于G2/M期,但在诱导癌细胞凋亡的同时也产生了致瘤性,而Syk蛋白的表达可以使被阻滞的细胞比例下降,减少了As2O3治疗肿瘤中的副作用。

五加皮Age蛋白的药动学研究

目的研究五加皮Age蛋白的药动学特征。方法采用氯胺T法用125I标记Age蛋白,形成125I-Age复合物。S180荷瘤小鼠iv给药后,采用同位素示踪法结合SDS-PAGE电泳测定血浆中Age蛋白质量浓度。用3P87药动学软件分析血浆中Age蛋白的药动学参数。结果小鼠iv125I-Age后,Age蛋白在体内的代谢符合二房室分布模型。按剂量50、100、200μg/kgiv后,测得Age蛋白分布相半衰期(t1/2α)分别为0.34、0.45、0.26h,消除相半衰期(t1/2β)为14.13、16.49、17.42h,全身清除率(CLs)为0.0454、0.0491、0.0533mL/(h·kg)。结论Age蛋白在荷瘤小鼠体内药动学行为符合线性二室模型,在体内的分布和消除均较慢。

IL-18对NK细胞的调节

1 IL-18对NK细胞增殖和分化的影响及其机制 在免疫应答中NK细胞的增殖和分化受多种细胞因子的调节[1]。例如,IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素（Leukoregulin,LR）对NK细胞的活化和分化都有正调节作用,体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK细胞的杀伤活性。前列腺素（PG）E1、E2、D2和肾上腺皮质激素等则对NK细胞的活性有抑制作用。Jason等[1]最近的研究表明IL-18可促进NK细胞的成熟。

恩度联合TEC方案新辅助治疗Ⅲ期乳腺癌临床研究

目的Ⅲ期乳腺癌患者属于局部晚期乳腺癌,治疗上以新辅助化疗为主。重组人血管内皮抑制素恩度(Endostar;recombinant human endostatin,EN)是我国学者自主研发的抗血管生成新药,单药或联合化疗后,在肺癌等治疗上效果显著。本研究探讨EN联合TEC方案新辅助化疗对Ⅲ期乳腺癌的有效性及安全性,为其个体化治疗提供参考。方法收集河北医科大学第四医院乳腺中心2011-05-01-2015-05-31收治的乳腺癌71例,遵循分层随机对照原则,将空心针穿刺确诊、需新辅助化疗的Ⅲ期乳腺癌分为TEC组(多西他赛75mg/m^2,静脉滴入,d1;表柔比星75mg/m^2,静脉推注,d1~d2;环磷酰胺600mg/m^2,静脉推注,d1)34例及EN联合TEC组(TEC同时接受EN15 mg,静脉滴入,d1~d14)37例,21d为1个周期,4个周期后手术。观察肿瘤客观缓解率(objective response rate,ORR)、病理完全缓解率(pathological complete response rate,pCR)、无复发生存(relapse-free survival,RFS)、总生存(overall survival,OS)和毒副作用。结果 EN联合TEC组和TEC的ORR分别为83.8%(31/37)和58.8%(20/34),差异有统计学意义,P=0.020。EN联合TEC组中位RFS为53.0个月(95%CI为49.45~56.56个月),较TEC组48.0个月(95%CI为39.65~56.35个月)延长,P=0.932。EN联合TEC组OS为67.8个月(95%CI为64.37~71.25个月),较TEC组57.7个月(95%CI为51.43~63.99个月)显著延长,差异有统计学意义,P=0.047。TEC联合EN后,提高了Ⅲ期乳腺癌患者的pCR率(13.5%,5/37),高于TEC组的8.8%(3/34),但差异无统计学意义,P=0.532。未出现不可控制的血液、神经及心血管系统等毒副作用,2组不良反应比较差异无统计学意义,无预期以外的不良反应发生。结论 EN联合TEC方案新辅助化疗有效提高乳腺癌ORR,延长患者OS,毒副作用可控,为Ⅲ期乳腺癌的治疗提供了新选择。