微RNA-429通过抑制Bmi-1表达提高食管鳞癌细胞的化疗敏感性

目的:研究微RNA(microRNA,miR)-429在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中表达及其与患者临床特征和预后之间的关系,并且探讨miR-429对ESCC细胞化疗敏感性的调控作用及其可能的机制。方法:选取2010年1月-12月于河北医科大学第四医院就诊的60例ESCC患者的癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测ESCC组织中miR-429的表达水平,并分析其与患者临床特征及预后的关系。将miR-429模拟物或抑制物分别转染ESCC细胞株Eca109和TE-13后,MTT法检测miR-429过表达或沉默对细胞增殖活性及顺铂(cisplatin,CDDP)敏感性的影响,同时FCM法检测细胞凋亡水平的变化。双荧光素酶报告基因系统分析miR-429是否直接调控B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell specific moloney murine leukemia virus insertion site-1,Bmi-1)基因表达,蛋白质印迹法检测细胞中Bmi-1及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达水平的变化。结果:ESCC组织中miR-429表达水平较癌旁组织明显降低(P <0.01)。而且miR-429低表达的ESCC患者往往肿瘤体积较大,临床分期较晚,更易发生淋巴结转移,同时患者生存期较短(P值均<0.05)。过表达miR-429的Eca109和TE-13细胞增殖活性明显降低,同时对CDDP的敏感性明显增强,细胞凋亡率明显升高,表达Bmi-1及P-gp的水平明显降低(P值均<0.05);敲低miR-429表达的Eca109和TE-13细胞增殖活性明显升高,同时对CDDP的敏感性明显减弱,细胞凋亡率明显降低,表达Bmi-1及P-gp的水平明显升高(P值均<0.05)。双荧光素酶报告基因系统分析显示,Bmi-1是miR-429的靶基因,二者表达水平之间存在负相关性(r=-0.340 4,P <0.05)。结论:ESCC组织中miR-429低表达与患者肿瘤进展及预后较差密切相关。同时,miR-429可能具有增强ESCC细胞对CDDP化疗敏感性的作用,且其作用机制可能与调控Bmi-1表达有关。