SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2 wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±0.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%。原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。

高糖对人肾小球系膜细胞SREBP-1、FAS表达的影响

目的探讨高糖环境中人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)SREBP-1、FAS表达。方法体外培养HMC细胞,随机分为正常糖组、高糖组,免疫细胞化学、Western Blot和RT-PCR方法检测固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)表达。采用脂质体转染技术将特异性SREBP-1质粒引入细胞内并进行表达,进一步采用RT-PCR方法检测脂肪酸合酶FAS的表达。结果与正常糖组比较,高糖培养的人肾小球系膜细胞固醇调节元件结合蛋白1前体和成熟体以及FAS mRNA表达均升高,差异有统计学意义。质粒转染后HMC细胞经免疫组化和Western blot检测证实特异性质粒能够在细胞内高表达SREBP-1蛋白,进一步对FAS的检测证实了FAS mRNA表达升高。结论高糖可诱导人肾小球系膜细胞固醇调节元件结合蛋白1和FAS表达增强且SREBP-1和FAS之间存在有直接关系。