HPA与CXCR4的表达及其与肝癌浸润转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和趋化因子受体CXCR4在肝癌细胞中的表达及其与肝癌浸润转移的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测HPA和CXCR4在肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理学特征的关系。结果:在肝癌组织HPA和CXCR4的表达均显著高于癌旁及正常肝组织;HPA在肝癌组织中的表达与肿瘤大小、有无肝内或淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(P<0.05);CXCR4在肝癌组织中的表达与有无癌栓及有无肝内或淋巴结转移有关(P<0.05);肝癌组织中HPA与CXCR4的表达呈显著正相关(r=0.313,P=0.027)。结论:HPA与CXCR4可能在肝细胞癌的发生发展、浸润转移中发挥着重要的协同作用。

神经生长因子与人胆管癌神经浸润转移的相关性分析

目的探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其酪氨酸激酶受体A(TrkA)与人胆管癌神经浸润、淋巴转移和病理类型的关系。方法采用免疫组织化学技术,检测92例人胆管癌组织中β-NGF和TrkA的表达情况,Spearman’s等级相关检验β-NGF的表达与胆管癌神经浸润、淋巴转移以及病理分型的关系。结果β-NGF和TrkA均在胆管癌组织中高表达,二者存在相关性,且在神经浸润组和无神经浸润组的表达差异有统计学意义;NGF阳性表达随着肿瘤恶性程度的增高而增高,且与肿瘤的淋巴转移密切相关。TrkA还表达于神经鞘膜。结论NGF与胆管癌神经浸润密切相关。NGF可能通过旁分泌途径与TrkA作用促使癌细胞沿神经转移;通过自分泌作用促进胆管癌细胞增殖。

PPAR-γ和p27^(kip1)、Skp2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)-γ、p27kip1和细胞S期激酶相关蛋白(Skp)2蛋白在肝癌发生发展过程中的作用。方法:肝细胞癌组织标本57例(肝癌组)和正常肝组织标本(对照组)20例。采用免疫组织化学方法检测2组PPAR-γ、p27kip1及Skp2蛋白的表达,分析它们之间及其与肝癌临床病理特征的关系。结果:肝癌组PPAR-γ及Skp2蛋白的阳性表达率高于对照组,p27kip1蛋白阳性表达率低于对照组(P<0.05),PPAR-γ蛋白与Skp2、P27kip1蛋白在不同TNM分期中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。PPAR-γ蛋白与Skp2、p27kip1蛋白表达无相关性(P>0.05);Skp2与p27kip1蛋白的表达呈负相关(r=-0.307,P=0.020)。Skp2蛋白低表达组的1、3、5年生存率高于高表达组(P<0.001)。结论:PPAR-γ和Skp2蛋白表达与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,Skp2可作为判断肝细胞癌预后的指标。

检测人胰腺癌组织神经生长因子表达的临床意义初探

目的探讨神经生长因子及与人胰腺癌神经浸润、淋巴转移和病理类型的关系，以及神经生长因子对人胰腺癌细胞株增殖活性的影响。方法采用免疫组织化学技术，检测69例人胰腺癌组织中β-NGF的表达情况，卡方检验分析β-NGF的阳性在胰腺癌神经浸润、淋巴道转移以及病理分型中的作用。构建pNGF的真核表达载体并鉴定后，采用脂质体Lipofectamine将pcDNA3．0-NGF转染至人胰腺癌细胞株Panc-1。MTT法检测转染后细胞的增殖活性。结果β-NGF可在部分胰腺癌组织中表达，且在神经浸润组和无神经浸润组的表达存在显著差异；NGF阳性表达随着肿瘤恶性程度的增高而增高，且与肿瘤的淋巴转移密切相关。MTT检测转染后的细胞增殖活性增强，与空白对照组和转染空质粒组相比，差异有显著性（P〈0．01），且表现出量效依赖关系。结论^-NGF与胰腺癌的浸润、转移密切相关，可增强其增殖活性；检测胰腺癌组织中pNGF的表达，有望帮助评价胰腺癌的预后。

两种培养法对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的影响

目的观察对比贴壁培养法与悬浮培养法培养后的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞相关特性的变化。方法(1)收集采用普通培养基贴壁培养与无血清培养基悬浮培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。(2)观察两种方法培养后肿瘤细胞的形态学特征。(3)流式细胞仪检测两种方法培养后的肿瘤细胞中肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24的各自表达量。(4)采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测两种方法培养后的肿瘤细胞中肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24对应的mRNA相对表达量。(5)将两种方法培养后的肿瘤细胞各自注射到不同的裸鼠皮下,观察并记录种植瘤的体积变化,依此比较两种方法培养后肿瘤细胞的成瘤能力及增殖能力。结果倒置显微镜下观察到贴壁培养的SMMC-7721肿瘤细胞呈铺路石样生长,排列规整。而悬浮培养后肿瘤细胞逐渐由单细胞聚集、增殖成球状或类球状。流式细胞检测悬浮培养组中CD90、CD24的表达量(571.77±8.70、233.56±10.85)明显高于贴壁培养组(19.15±0.54、17.37±0.15)(CD90:P=0.000;CD24:P=0.000),但CD133在悬浮培养组与贴壁培养组中的表达量(1.42±0.61、1.48±1.09)比较差异无统计学意义。Real-timePCR结果同样显示,若贴壁培养组mRNA的表达量设定为1,悬浮培养后细胞肿瘤表面标志物CD90、CD24的mRNA相对表达量(1.72±0.19、1.72±0.19)明显高于贴壁培养组(CD90:P=0.020,CD24:P=0.000),而CD133的mRNA相对表达量两组间比较差异无统计学意义(1.05±0.03,P=0.080)。测量裸鼠皮下种植瘤体积大小变化显示随着时间的延长,悬浮培养组所致的皮下肿瘤体积变化趋势呈从开始注射到注射后6d为减小,6d后大幅增高;贴壁培养组所致的皮下肿瘤体积变化趋势则呈缓慢减小后趋于稳定,提示悬浮培养后的肿瘤细胞成瘤及增殖能力更强。结论对人肝癌细胞株SMMC-7721而言悬浮培养法可获得更多的肝癌干细胞样细胞。