脑组织特异表达hS100B转基因小鼠帕金森样运动协调能力改变的初步分析

目的研究S100B在帕金森病发病机制中的作用并探讨脑组织特异表达hS100B转基因小鼠作为帕金森病模型小鼠的可能性。方法构建hS100B转基因小鼠。小鼠分为S100B转基因组、基因敲除组和阴性对照组。爬杆法和转棒法检测运动协调能力;逆转录-PCR、Western blot对脑组织中S100B、多巴胺D1、D2受体,G蛋白偶联受体激酶2、5及酪氨酸羟化酶的表达进行测定;高效液相色谱-荧光法检测脑组织中酪氨酸、左旋多巴、多巴胺及高香草酸的含量。结果与阴性对照组相比,转基因组小鼠脑组织中S100B蛋白显著升高(P<0.05),3月龄时可表现出运动协调能力下降,且随着月龄增加,运动协调能力下降呈明显的进行性降低(P<0.05);脑组织中多巴胺D2受体、G蛋白偶联受体激酶2mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);左旋多巴、多巴胺、高香草酸生成增多,高香草酸/多巴胺比值升高(P<0.05);酪氨酸羟化酶的表达虽呈下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。S100B基因敲除小鼠脑组织中无S100B蛋白表达,与阴性对照组相比,各检测指标无异常(P>0.05)。结论 S100B很可能是参与帕金森病行为学异常的重要蛋白,脑组织特异表达hS100B转基因小鼠的建立为研究该基因在帕金森病中的作用提供了工具。

食管鳞癌中hTERT表达、DNA含量与细胞增殖周期的关系

目的探讨食管鳞癌中hTERT表达与细胞DNA含量、细胞增殖周期的关系。方法采用免疫组化检测hTERT表达,流式细胞术检测hTERT和DNA含量及增殖指数。结果(1)癌组hTERT阳性率和荧光指数(FI)显著高于癌旁组(P<0.01);(2)癌组DNA指数(DI)和异倍体率均高于癌旁组(P<0.05),癌组增殖指数(PI)显著高于癌旁组(P<0.01)。结论hTERT过量表达、DNA含量增加和增殖指数升高与食管鳞癌的发生、发展密切相关。

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素5在鼻息肉中表达

目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granuIocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素5(interleukin-5,IL-5)在单发鼻息肉组织及多发鼻息肉组织中的表达水平的差异。方法分别采用ELISA法及免疫组化SP法检测单发鼻息肉组30例、多发复发鼻息肉组23例及对照组15例(下鼻甲部分切除术患者下鼻甲黏膜标本)中GM- CSF及IL-5的表达状况。结果多发性鼻息肉组中GM- CSF及IL-5表达量均明显高于单发鼻息肉组,单发鼻息肉组明显高于对照组,两组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论鼻息肉的多发、复发机制可能与GM- CSF及IL-5的高表达水平有关,它们在鼻息肉的发病机制中占有重要地位。

KISS-1蛋白和MMP-9在妊娠滋养细胞病变中的表达

目的:探讨KISS-1基因蛋白(metastin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠滋养细胞病变(妊娠滋养细胞疾病和自然流产)中的表达及二者的相关性。方法:采用免疫组化S-P法分别检测20例正常早孕绒毛、25例自然流产绒毛、30例完全性葡萄胎、15例侵袭性葡萄胎和15例绒毛膜癌中KISS-1蛋白和MMP-9的表达。结果:KISS-1蛋白在自然流产绒毛中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达显著低于完全性葡萄胎(P均<0.01);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈负相关。MMP-9在自然流产绒毛中的表达低于正常早孕绒毛(P<0.05);在完全性葡萄胎中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达高于完全性葡萄胎(P均<0.05);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈正相关。在自然流产绒毛、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中KISS-1蛋白表达和MMP-9表达均呈负相关。结论:KISS-1蛋白和MMP-9表达的变化可能参与了自然流产和妊娠滋养细胞疾病(葡萄胎、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌)的发生、发展过程,在此过程中两种基因存在着相互作用。

食管鳞癌组织中的端粒延长替代机制

目的研究食管鳞癌组织中端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白和端粒延长替代(ALT)机制的表达,探讨其与食管癌关系。方法应用免疫组织化学法,观察11例正常食管黏膜、12例癌旁伴有上皮不典型增生组织和64例食管鳞癌组织中早幼粒细胞白血病蛋白(PML)蛋白和hTERT蛋白的表达情况。结果癌旁组织和癌组织PML蛋白阳性例数分别为1(8.33%)和10(15.62%),hTERT蛋白阳性率分别为41.67%(5/12)和84.38%(54/64),两者hTERT蛋白阳性表达率存在显著差异(P<0.01)。结论hTERT蛋白表达和ALT途径都可能存在于食管鳞癌组织中维持端粒长度。

核型异常与疾病关系的分析

Battaglia于1952年给了将核型（karyotype）定义为是动物、植物、真菌等真核生物的某一个体或某一分类群的细胞内染色体组分中染色体的数目、大小和形态。而由体细胞中全套染色体按形态特征和大小顺序排列构成，并依次配对分组，则代表该个体一切细胞的染色体组成，又称染色体组型。核型异常即染色体异常可导致疾病的发生，严重地威胁着人类健康，进行核型分析，

学法教学刍议

为了提高教学质量,教会学生科学的学习方法,在医学基础课的教学中必须加强学法教学。加强学法教学主要从三个方面入手:①引导学生端正学习态度;②培养学生对医学知识的兴趣以及形成良好的学习意志品质和探索品质;③引导学生科学的学习。

GST-Π、TopoⅡ在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨GST-Π及TopoⅡ在人脑胶质瘤中表达与肿瘤发生和病理分级的关系,以进一步研究原发性脑胶质瘤多药耐药机制。方法免疫组化法检测10例正常脑组织及33例人脑胶质瘤标本GST-Π和TopoⅡ表达。结果正常脑组织中GST-Π和TopoⅡ均无表达。在脑胶质瘤组织中,不同病理分级胶质瘤间GST-Π及TopoⅡ表达率随病理级别升高而有上升趋势(P<0.05)。GST-Π和TopoⅡ在表达强度方面无明显相关(P>0.05)。结论 GST-Π及TopoⅡ的表达与脑胶质瘤的发生及其病理分级存在一定关系,且共同形成肿瘤耐药,但耐药机制各不相同。检测原发胶质瘤细胞中GST-Π与TopoⅡ的表达,有利于指导临床更加合理地选择化疗方案。

卡介苗联合药物缓释剂在抗肿瘤方面的初步研究

目的初步探讨卡介苗(BCG)联合药物缓释剂的抗肿瘤性。方法建立大鼠肿瘤动物模型并给予不同BCG处理,取新鲜胸腺组织,行胸腺细胞增殖和凋亡的流式细胞学检测,并取皮下肿瘤常规制备石蜡切片行HE染色,光镜观察肿瘤内的形态变化。结果①造模后7天、14天,注射BCG及BCG结合泊洛沙姆407(P407)组肿瘤组织坏死明显,肿瘤周围有明显的纤维化。②BCG与P407混合液处理组胸腺细胞凋亡率明显低于空白对照组,而增殖指数明显高于该组;BCG原液在造模后7天时,胸腺细胞凋亡率与空白对照组相比无显著差异,而增殖指数明显高于该组,造模后14天时,胸腺细胞凋亡率及增殖指数均明显高于正常对照组。结论P407可增强BCG的抗肿瘤作用。

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在人类鼻息肉及鼻息肉病组织中的表达

目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在人类鼻息肉及鼻息肉病中表达水平的差异。方法分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法及免疫组织化学SP法检测30例鼻息肉标本(鼻息肉组)、23例鼻息肉病标本(鼻息肉病组)及15例下鼻甲部分切除术患者下鼻甲粘膜标本(对照组)中GM-CSF的表达状况。结果鼻息肉病中GM-CSF含量明显高于鼻息肉组,鼻息肉组又明显高于对照组,且每两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论鼻息肉病的高复发可能和GM-CSF的高表达水平有关,可以作为区分鼻息肉病和鼻息肉的重要参考指标之一。

HPA蛋白的表达与食管鳞癌血管生成、浸润、转移的关系

目的探讨HPA蛋白在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌血管生成、浸润、转移的关系。方法应用免疫组化法(Immunohistochmeistry,IHC)检测70例食管鳞癌组织和23例切缘正常组织中HPA、CD34蛋白的表达。结果癌组织中HPA蛋白的表达(65.7%)显著高于切缘正常组织(0.0%)(P<0.05)。有淋巴结转移的食管鳞癌组织中HPA蛋白的阳性表达率90.9%(30/33)高于无淋巴结转移组43.2%(16/37)(P<0.05);有纤维膜浸润的食管鳞癌组织中HPA蛋白的阳性表达率92.9%(39/42)高于无纤维膜浸润组25.0%(7/28)(P<0.05)。HPA蛋白阳性表达的食管鳞癌组织中的微血管密度(Mean Miciovessel Density,MVD)值(44.85±12.74)显著高于HPA蛋白阴性者的MVD值(33.05±7.32)(P<0.05)。结论HPA蛋白阳性表达与食管鳞癌的发生、血管生成、浸润深度、淋巴结转移有关。

hTERT蛋白在胃腺癌组织中定量表达的研究

目的探讨hTERT蛋白在胃腺癌组织中表达情况及其与胃癌进展的关系。方法对68例胃腺癌和10例正常组织采用流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达。结果hTERT蛋白流式细胞术测定在进展期胃癌、早期胃癌和正常胃黏膜荧光指数FI值分别为1.92±0.17、1.60±0.18和0.98±0.15,进展期胃癌hTERT含量高于早期胃癌(P<0.01)、早期胃癌高于正常胃黏膜(P<0.01);中、低分化腺癌hTERT蛋白FI值分别为1.89±0.20和1.92±0.19显著高于高分化腺癌1.71±0.19(P<0.01);有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.05);T1-T2级胃癌TERT蛋白FI值高于T3-T4级胃癌(P<0.05)。结论hTERT高表达与胃腺癌进展相关,可作为胃癌进展的生物学标志之一。

HPA和HIF-1α在食管鳞癌发生发展中的表达及生物学意义

目的探讨乙酰肝素酶(HPA)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与食管鳞癌发生、发展的关系。方法应用原位杂交技术检测70例食管鳞癌组织、26例癌旁不典型增生组织和23例切缘正常组织中HPAmRNA表达,同时,应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白在全部标本中的表达。结果HPA mRNA和HIF-1α的阳性表达率在正常食管组织、癌旁不典型增生组织和食管癌组织中依次增高(P<0.05);HPA mRNA和HIF-1α的表达与食管鳞癌侵袭深度、淋巴结转移及临床分期有关(P< 0.05),而与分化程度无关(P>0.05)。在食管鳞癌组织中,HPA mRNA的表达与HIF-1α的表达显著相关(P<0.01)。结论HPA mRNA和HIF-1α阳性表达与食管鳞癌的生长、侵袭及转移有关,两者在食管鳞癌的发生、发展过程中可能存在着一定的协同作用;检测HPA mRNA与HIF-1α表达有助于食管鳞癌生物学性能的判断。

钙结合蛋白S1OOB对多巴胺受体及神经递质多巴胺、5-羟色胺生成和代谢的影响

目的 研究钙结合蛋白S100B对与帕金森病运动协调能力改变有关的多巴胺受体及神经递质多巴胺、5-羟色胺生成和代谢的影响.方法 建立hS100B转基因小鼠模型,将其分为S100B转基因组、基因敲除组和阴性对照组3组,每组均14只.用转棒法检测运动协调能力;采用逆转录-PCR、蛋白免疫印迹法对小鼠脑组织中多巴胺D1、D2受体,酪氨酸羟化酶和磷酸化的酪氨酸羟化酶（Ser19、31、40位点）表达进行测定;用高效液相色谱-荧光法检测多巴胺生成代谢途径中的酪氨酸、左旋多巴、多巴胺、高香草酸,5-羟色胺生成代谢途径中的色氨酸、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸在小鼠中脑组织中的含量.结果 与阴性对照组相比,3、6、9个月龄的S100B转基因小鼠在转棒仪上停留时间（s）缩短（3个月：4.60±0.30和4.25±0.21,q=5.194;6个月：4.52±0.31和4.07±0.22,q=6.139;9个月：4.43±0.25和3.60±0.18,q=13.484;均P＜0.05）,且随着月龄的增加,停留时间呈进行性降低.与阴性对照组相比,9个月龄时,转基因小鼠脑组织中多巴胺D2受体mRNA和蛋白表达降低（1.34±0.13和0.48±0.07,q=21.578;1.05±0.15和0.69 ±0.10,q=8.063,均P＜0.05）;Ser19和Ser40位点磷酸化的酪氨酸羟化酶表达升高（0.95±0.10和1.14±0.13,q=4.972;0.94±0.12和1.17±0.14,q=5.382,均P＜0.05）,酪氨酸羟化酶的表达量呈下降趋势,但差异无统计学意义;转基因小鼠中脑组织中左旋多巴、多巴胺及高香草酸生成增多（87.04±11.77和115.28±16.80,q=4.764;56.66±9.87和72.96±11.02,q=3.923;26.58±8.11和38.65±6.67,q=3.981,均P＜0.05）,5-羟色胺含量降低（925.50±74.26和637.87±56.76,q=11.084,P＜0.05）,高香草酸/多巴胺和5-羟基吲哚乙酸/5-羟色胺比值升高（0.45±0.05和0.54±0.08,q=3.325;0.94±0.07和1.42±0.12,q=12.367,均P＜0.05）.与阴性对照组相比,S100B基因敲除小鼠各检测指标差异无统计学意义.结论 S100B很可能是参与帕金森病发生发展的一种重要蛋白,脑组织特异表达S100B的转基因小鼠的建立为研究该基因在帕金森病中的作用提供了工具.

乙酰肝素酶、缺氧诱导因子-1α的表达与食管鳞癌浸润转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPA)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factors-1α,HIF-1α)在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌浸润转移的关系。方法:应用原位杂交技术检测70例食管鳞癌组织和23例切缘正常组织中HPA mRNA表达,同时应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白在全部标本中的表达。结果:癌组织中HPA mRNA和HIF-1α的阳性表达率分别为65.7%(46/70)和55.7%(39/70),显著高于切缘正常组织(P<0.05);HPA mRNA和HIF-1α的表达与食管鳞癌组织浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05);在食管鳞癌组织中HPA mRNA的表达与HIF-1α的表达关系密切(Kappa=0.615,P<0.05)。结论:HPA和HIF-1α阳性表达与食管鳞癌的生长及浸润转移有关,两者在食管鳞癌的发生、发展过程中可能存在着一定的协同作用;检测HPA与HIF-1α表达有助于食管鳞癌生物学性能的判断。