何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

脑星形细胞瘤中乙酰肝素酶和血管内皮生长因子表达与血管形成及预后的关系

目的探讨脑星形细胞瘤中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管形成和预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测69例星形细胞瘤中HPA蛋白和VEGF的表达,并以八因子相关抗原(Ⅷ-R-Ag)作为标记计数微血管密度(MVD)。结果 HPA蛋白与VEGF表达有正向关联(P<0.01),HPA表达阳性者的MVD高于HPA表达阴性者(P<0.01)、生存时间小于表达阴性者(P<0.01)。VEGF表达阳性者MVD高于HPA表达阴性者(P<0.01)生存时间小于表达阴性者(P<0.01)。结论 HPA和VEGF可能参与了星形细胞瘤血管的形成,并且与预后有关,上调VEGF的表达可能是HPA促进血管形成的机制之一。

何首乌饮延缓大鼠睾丸间质细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1信号通路的关系

目的探讨何首乌饮延缓大鼠睾丸间质(Leydig)细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号通路的关系。方法采用氧化损伤的方法建立大鼠Leydig细胞衰老模型。用流式细胞术检测各组细胞周期的变化。应用Real-time PCR、免疫荧光和Western blotting技术检测Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平,并运用胰岛素受体/IGF受体特异性抑制剂BMS-754807处理细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%(P<0.05),G1期所占比重明显增加,S期所占比重明显减少(P<0.05)。胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化:衰老组胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS1)、IRS2、IGF1表达水平明显低于正常组(P<0.05),胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)的mRNA表达明显高于正常组(P<0.05),何首乌饮可逆转上述现象。用BMS-754807处理衰老的Leydig细胞后,Bcl-2mRNA表达水平低于衰老组(P<0.05),用何首乌饮和BMS-754807同时处理衰老的Leydig细胞,细胞凋亡率高于何首乌饮组(P<0.05)。结论何首乌饮通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓Leydig细胞衰老。

何首乌饮减轻β-淀粉样蛋白诱导的海马神经元损伤的作用机制

目的探讨何首乌饮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法采用新生24h内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组及空白对照组。Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测各组海马神经元硫氧还蛋白1(Trx1)蛋白和mRNA的表达情况。结果模型组细胞凋亡率增高(P<0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显减少(P<0.05);与模型组相比,何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低(P<0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显增加(P<0.05)。结论何首乌饮可明显减轻Aβ诱导的海马神经元的损伤,其机制可能与增加抗氧化蛋白Trx1的表达有关。