利用多功能等离子体诱变技术选育糙皮侧耳新菌株

以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株‘新河大P-2号’为出发菌株,利用多功能等离子体诱变技术(multifunction plasma mutagenesis system,MPMS)对菌丝进行诱变,获得367个在黍子(Proso millet)秸秆培养基上生长良好的菌株,通过拮抗实验获得39个诱变菌株。通过观察菌丝长势,测定菌丝生长速度、漆酶活性、生物学效率,最终筛选到5个在黍子秸秆栽培料上菌丝长势旺盛,菌丝生长速度、漆酶活性、生物学效率显著高于出发菌株(P<0.05)的诱变菌株(PA5、PA22、PA36、PA61、PA143),其中菌株PA36最优。与出发菌株相比,菌株PA36菌丝生长速度提高13.51%,漆酶活性提高28.30%,生物学效率提高12.66%。ISSR分子标记实验结果表明,这5个诱变菌株与出发菌株存在遗传差异。与市售糙皮侧耳相比,利用黍子秸秆栽培料栽培的PA5、PA22、PA36、PA61、PA143和出发菌株子实体膳食纤维、多糖含量显著提高,除菌株PA143子实体中蛋白质含量与市售糙皮侧耳的无显著性差异,其他菌株子实体中蛋白质含量均显著提高。本研究不仅为糙皮侧耳菌株的选育提供高效可行的方法,且获得了对黍子秸秆高效利用的新菌株。

基于MPMS诱变体系的茶树菇细胞工程育种

利用多功能等离子体(MPMS)诱变技术对茶树菇(Agrocybe aegirita)菌丝体进行诱变处理,共获得262株诱变菌株。初筛得到的20株诱变菌株与出发菌株有较明显的拮抗反应,复筛通过对菌丝长势、生长速度、多酚氧化酶活性以及生物学效率的测定,得到优于出发菌株的5株诱变菌株,通过ISSR分子标记技术确定均与出发菌株相比产生了不同程度的变异。其中优良诱变菌株AM220是最适宜分解荆条的诱变菌株,其菌丝生长速度达3.42 mm·d^(-1),生物学效率为81.70%,较出发菌株菌丝生长速度提高0.34 mm·d^(-1),生物学效率提高11.57%。

小球藻病毒PBCV-1编码的Cu,Zn-SOD酶学稳定性

将小球藻病毒模式株PBCV-1编码的Cu, Zn-SOD截短突变体tcvSOD克隆到大肠杆菌表达载体pET23a(+)后,经IPTG诱导在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达得到了可溶性tcvSOD重组蛋白.该蛋白具有典型的SOD活性,能强烈抑制邻苯三酚的自氧化作用,最高抑制率为97%,反应体系中酶蛋白终质量浓度为0.2μg/mL时达到最大抑制,由此计算出其比活力为16 050 U/mg.tcvSOD的热稳定性和对蛋白变性剂SDS胁迫的反应与酶蛋白在反应体系中的质量浓度有关.终质量浓度为1μg/mL时tcvSOD可以耐90℃、30 min以及质量分数2%~10%的SDS处理而活性保持不变或略有丧失,终质量浓度为0.05和0.1μg/mL时则对上述处理非常敏感. 0.05、0.1、1μg/mL 3种质量浓度的tcvSOD对反应体系中pH4~12的变化,以及2~10 mol/L尿素和1~4 mol/L盐酸胍胁迫处理,酶活性保持恒定.实验结果表明tcvSOD具有较强热稳定性和pH稳定性,对常见蛋白变性剂也有良好抗性,有进一步开发利用的潜能.

HACCP体系在黑木耳主产区质控中的应用

目的为响应乡村振兴战略,建立产业发展中的质控体系,确保黑木耳初级产品的质量安全管理问题。方法应用HACCP体系的基本原理,对黑木耳生产过程进行危害分析,通过关键控制点判断树确定关键控制点,并确立关键限值及纠偏措施。结果将HACCP体系应用于黑木耳主产区生产过程中,确定该过程的原材料的选择、菌种的选择、营养生长阶段、生殖生长阶段、黑木耳采收加工和菌糠的处理6个关键控制点。结论预防或降低黑木耳生产过程中的危害,确保黑木耳质量安全,进而促进黑木耳产业可持续发展。

基于MPMS方法的黑木耳优良菌株选育

为获得高产优质的黑木耳菌株,以黑木耳(Auricularia auricula)菌株Aa66为出发菌株,采用多功能等离子体诱变系统(multifunction plasma mutagenesis system,MPMS)进行诱变育种实验,共获得315株诱变菌株.通过初筛拮抗实验及复筛对菌株长速长势、酶活及生物学效率的测定,共得到8株优良诱变菌株,且使用简单重复序列区间扩增多态性分子标记技术(inter-simple sequence repeat,ISSR)在分子水平上确定其均与出发菌株Aa66有明显差异,其中优良诱变菌株Y9生长速度最快,为4.98 mm/d,较出发菌株Aa66提高0.54 mm/d,生物学效率为115.34%,较出发菌株Aa66提高8.43%,表明MPMS可以作为一种选育优良黑木耳菌株的新方法.

菌糠资源化开发中激素类物质检测及利用

为缓解大量的废弃菌糠造成的面源污染,研究菌糠的资源化开发.以黑木耳菌糠为底物,通过分光光度法检测黑木耳菌糠中赤霉素和吲哚乙酸的含量,结果发现:赤霉素质量分数为45.52μg/g,加标回收率达98.28%;吲哚乙酸质量分数为38.42μg/g,加标回收率为94.70%.利用黑木耳菌糠与菜园土、砂质土按不同质量配比混匀种植紫叶生菜,结果发现,与对照相比,一定比例的黑木耳菌糠的使用,可以提高发芽率、缩短发芽时间;当黑木耳菌糠添加量为35%(质量分数)时,栽培出来的紫叶生菜发芽率最高,达到86.91%,且发芽时间最短,约为7 d,表明其具有资源化开发价值.