激活减曲酿造酱油的研究

研究了添加激活剂和减曲技术在酱油生产中的应用。结果表明,激活减曲法能提高米曲霉的孢子发芽率,增强杭菌能力。与对照相比,成曲中蛋白酶活力、淀粉酶、糖化酶活力都有提高,发酵10d时酱醅氨基氮的含量提高13,6%。激活减曲工艺降低物料损耗,提高酱油产量。

日本酱油缩短发酵周期的研究

采取不同原料配比制曲，提高制曲质量。发酵前采用抽真空法使成曲与盐水充分混匀，发酵时高浓度盐水抑制细菌生长，从而可以提高发酵温度，缩短发酵周期，在酱醅发酵过程中，试验组的氨基氮含量比对照组要高30％～100％。

黑曲霉突变株9-1-D糖化酶糖化淀粉条件研究

研究了黑曲霉突变株9-1-D耐热糖化酶糖化淀粉的条件,结果表明,耐热糖化酶9-1-D的最适糖化温度为60℃,糖化液的DE值为94.83%。在65℃时糖化液的DE值仍可达到90%以上,达到相同DE值时,糖化时间较市售糖化酶缩短了15h。

花绒寄甲控制果园桃红颈天牛的研究

花绒寄甲Dastarcus helophoroides是林木蛀干害虫天牛类的重要天敌昆虫,已在我国应用于多种天牛类害虫的生物防治。桃红颈天牛Aromia bungii是多种蔷薇科果树和园林树木的主要蛀干害虫,近年来在华东和华北地区危害严重。为有效、可持续性地控制桃红颈天牛对果园桃树危害,根据受害树的受害等级于2020年5月底分别释放不同数量的花绒寄甲成虫,于天敌释放后1个多月和4个多月调查不同受害等级的受害树数量。结果表明:释放天敌1个多月后的7月中旬,桃树的受害程度比释放天敌前有所减轻;释放天敌4个月后的9月底检查,果树受害程度相比7月中旬有所增加,但相比释放天敌前仍有所降低;管理水平较好和中等的果园,桃红颈天牛危害有所下降,但管理水平较差果园的天牛危害程度呈现加重的态势。花绒寄甲对果园桃红颈天牛有一定的控制作用,果园不同管理水平对应用天敌控制桃红颈天牛的效果有不同的影响,在管理水平中等以上的果园,释放花绒寄甲成虫可以达到较为明显的生物防治效果。

释放管氏肿腿蜂防治桃红颈天牛效果评价

桃红颈天牛Aromia bungii是严重危害桃树的蛀干害虫,管氏肿腿蜂Sclerodermus guani是防治天牛类蛀干害虫的主要天敌昆虫。2020年9月下旬在桃园释放管氏肿腿蜂防治桃红颈天牛低龄幼虫,以受害树受害级别和数量的变化作为检测指标,通过计算受害减退率判断管氏肿腿蜂是否适合作为桃红颈天牛的生防因子。结果表明,释放天敌的果园内桃树的受害程度有所下降,校正受害减退率达63.23%,而对照区果园内桃树的受害程度则有所上升。管氏肿腿蜂可以作为桃红颈天牛的生防因子。提出桃红颈天牛生物防治的评价方法和管氏肿腿蜂释放时机的建议。

蚯蚓冻干粉的抗氧化作用

为了探讨蚯蚓冻干粉的体内外抗氧化活性,取60只小鼠,随机分为5组,空白对照组饲喂基础饲料,高脂饲料组饲喂高脂饲料,其余3组在饲喂高脂饲料的同时按0.6,0.4,0.2 g/kg体重灌胃蚯蚓冻干粉悬液.8周后,断尾采血测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;体外采用邻苯三酚反应系统产生超氧阴离子(O2-),过氧化氢反应体系产生羟基自由基(OH-),检测不同浓度蚯蚓冻干粉悬液上清对自由基的清除作用.结果表明:血清中MDA的含量和SOD活力显著降低(p<0.01);蚯蚓冻干粉悬液在实验质量浓度(0.06 g/mL)时对超氧阴离子有显著的清除作用,清除率为23.9%,对羟基自由基的抑制率可达94.6%.

BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞对AD大鼠认知障碍的改善

目的:研究经侧脑室移植脑源性神经生长因子(BDNF)修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)对AD大鼠认知功能的改善作用。方法:采用双侧海马注射Aβ25-35制备AD大鼠模型,筛选40只雄性SD大鼠随机分为5组,假手术组(Sham组),AD模型组(AD组),移植骨髓MSCs治疗组(MSCs组),移植pIRESneo转染的骨髓MSCs治疗组(CON组)和移植pIRESneo-EGFP-BDNF转染的骨髓MSCs组(BDNF组),每组各8只。采用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力。结果:AD组与Sham组大鼠比较平均逃避潜伏期(AEL)延长、跨越平台次数明显减少(P<0.01),搜索策略明显差(P<0.01);MSCs组、CON组、BDNF组与AD组大鼠比较AEL明显缩短、跨越平台次数显著增加(P<0.05或P<0.01),搜索策略显著好转(P<0.01),且BDNF组与CON组、MSCs组大鼠比较改善更显著(P<0.05或P<0.01)。结论:经侧脑室移植BDNF修饰的骨髓MSCs可以显著改善AD大鼠的学习认知能力。

米曲霉种内原生质体融合选育优良菌株

米曲霉HL和L5是来自酱油酿造企业的生产菌株。HL的生长速度快,而L5的中性蛋白酶活力高。以HL和L5为亲本,进行原生质体融合,筛选得到一株融合株R6。融合株比亲本株生长速度更快,孢子成熟时间快3h,中性蛋白酶活力分别比2株亲本菌株提高25.6%和19.9%,酱醅氨基氮值也比亲本菌株提高8%和5.6%。

活性染色电泳鉴定酱油成曲中的淀粉酶组分

淀粉酶是酱油成曲中的主要酶系之一,对成曲淀粉质原料的分解和酱油风味的形成起到了关键的作用,研究成曲中淀粉酶组分的构成具有重要意义。实验分别采用Starch-PAGE和改进的SDS-Starch-PAGE对酱油成曲中的淀粉酶进行鉴定。结果表明,成曲中至少存在3种可以水解淀粉的酶,初步鉴定为α-淀粉酶和2种糖化酶,在成曲中各占淀粉酶总活力的48.2%,37.3%和14.5%。

硫代硫酸钠滴定法测定淀粉DE值

建立了基于硫代硫酸钠滴定法测定糖化酶活力的DE值测定方法,确定了测定淀粉DE值的条件、步骤及计算公式。该方法具有简便、快速、精确度高、终点易观察等特点。

酱油成曲淀粉酶组分的鉴定及单组分的分离纯化

淀粉酶是酱油成曲中的主要酶系之一,对成曲淀粉质原料的分解和酱油色、香、味、体的形成起到了关键作用。研究采用PAGE、Starch-PAGE及SDS-Starch-PAGE分析了酱油成曲中的淀粉酶组分,结果表明:酱油成曲中至少有4种不同分子量的淀粉酶组分,分子量分别是88000,71000,60000,52000Da,以制备电泳方法纯化回收了活性最高的组分2,获得了高纯度的单一淀粉酶组分,并测得该酶分子量是52000 Da。采用薄层层析法分析检测回收组分2是α-淀粉酶,酶促反应最适pH6.2,最适温度为50℃。

转染pIRESneo-EGFP-BDNF的骨髓间充质干细胞侧脑室注射对帕金森大鼠行为学的影响

目的观察转染pIRESneo-EGFP-BDNF的骨髓间充质干细胞(MSCs)侧脑室注射对帕金森病(PD)大鼠行为学的影响。方法将pEGFP(N1)-BDNF与pIRESneo进行双酶切后再连接,构建高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电穿孔法将其转染MSCs。采用6-羟多巴(6-OHDA)制备PD大鼠模型(36只),造模成功后将其随机分为3组,每组12只。B组为模型组:侧脑室注射生理盐水;C组:侧脑室注射MSCs;D组:侧脑室注射转染pIRESneo-EGFP-BDNF的MSCs;A组(12只大鼠,为假手术组):以生理盐水代替6-OHDA后,侧脑室注射生理盐水。分别于侧脑室注射后2、48、周腹腔注射阿扑吗啡(APO)诱导大鼠旋转,观察各组大鼠行为学变化。结果经双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF构建成功。侧脑室注射细胞干预PD大鼠模型后2、4、8周,大鼠旋转次数D组<C组<B组(P均<0.05);D组大鼠旋转次数明显减少,但仍较A组多。结论侧脑室注射转染pIRESneo-EGFP-BDNF的MSCs能明显改善PD大鼠的行为能力。

蚯蚓冻干粉对高血脂小鼠胆固醇逆转运相关基因的调节作用

以高脂饲料饲喂昆明种小鼠构建高血脂小鼠模型,灌胃给予高、中、低剂量(0.4,0.2,0.1g/kg)蚯蚓冻干粉,每天1次,同时饲喂高脂饲料,以仅饲喂高脂饲料组小鼠为对照,共饲养10周.提取小鼠肝脏总RNA,应用半定量RT-PCR技术检测实验组与对照组小鼠胆固醇逆转运相关基因卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol acyltransferase,LCAT)和脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)mRNA表达水平.结果表明,蚯蚓冻干粉极显著提高实验组小鼠LCAT mRNA表达水平(P<0.01),显著提高LPL mRNA表达水平(P<0.05),提示这是蚯蚓冻干粉能够降低高血脂小鼠血浆胆固醇水平的原因之一.

重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

目的探讨重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓间充质干细胞(MSCs)制备BDNF基因工程细胞的方法。方法将pEGFP(N1)-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电转染技术转染骨髓MSCs,经G418筛选,通过倒置荧光显微镜判断转染效率,采用Western blot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白。结果经过双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因,以EGFP为报告基因,质粒构建成功;通过电穿孔技术以及G418筛选,提高pIRESneo-EGFP-BDNF转染骨髓MSCs效率。结论成功制备高效表达携带BDNF基因的质粒,且转染骨髓MSCs,为进一步开展BDNF基因治疗神经系统变性疾病奠定基础。

蚯蚓冻干粉对高血脂症小鼠载脂蛋白AI和载脂蛋白B基因表达的影响

目的研究蚯蚓冻干粉(earthworm lyophilized powder,ELP)的降血脂作用是否与调节载脂蛋白AI(apolipoproteinAI,ApoAI)和载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)基因表达有关。方法健康昆明种小鼠60只,随机分为5组,基础饲料组(normal diet control group,NCG)、高脂饲料组(high fatdiet control group,HCG)、高脂饲料+高剂量ELP组(high-dose gavage group,HDG)、高脂饲料+中剂量ELP组(middle-dose gavage group,MDG)、高脂饲料+低剂量ELP组(low-dose gavage group,LDG)。ELP干预10周后,测定各组小鼠血脂水平,RT-PCR测定各组小鼠肝脏ApoAI、ApoB mRNA表达量。结果 ELP明显降低高血脂小鼠血浆TG(totalcholesterol)、TG(triglycerol)和LDL-C(low-density lipoprotein-cholesterol)水平,同时升高HDL-C(high-density lipoprotein-cholesterol)水平。HDG组和MDG组小鼠ApoAI mRNA表达量明显上升,ApoB mRNA表达量明显降低。结论 ELP具有明显的降血脂作用,其降血脂作用可能与其调节载脂蛋白基因表达有关。

糖链对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响

应用以大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)为配基的亲和色谱从赤子爱胜蚓中分离了蚯蚓纤溶酶,亲和介质Sepharose-4B对蚯蚓纤溶酶的吸附量为0.04mg/g;以糖苷酶A去除固定在SBTI上的蚯蚓纤溶酶的糖链。辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(ConA-HRP)亲和印迹和Schiff's染色结果表明,蚯蚓纤溶酶的糖链已基本去除,去除糖链后蚯蚓纤溶酶的活性降低约30%。

广东酱油成曲中细菌的分离、纯化和鉴定

成曲是影响酱油质量的关键因素,成曲中细菌的种类和数量直接影响成曲的质量。从成曲样品中分离出20株细菌,并鉴定了其中的9株细菌,分别为乳杆菌属1株,微球菌属2株,假单胞菌属1株,芽孢杆菌属1株,葡萄球菌属2株,埃希氏菌属1株,乳球菌属1株,此结果为研究酱油的防腐保鲜技术提供了理论基础。

产Nisin突变株发酵条件的优化

研究了产Nisin突变株WY-4的发酵条件,最适接种量为5%,最适发酵温度为30℃,最适起始pH值为6.75,采用流加1 mol/L的NaOH溶液来控制发酵过程中发酵液pH值不低于6,在此条件下,Nisin的效价达到718.98 IU/mL,比对照提高了29.14%.

产Nisin突变株发酵条件的优化

研究了产Nisin突变株WY-4的发酵条件,最适接种量为5%,最适发酵温度为30℃,最适起始pH值为6.75,采用流加浓度为1mol/L的NaOH溶液来控制发酵过程中发酵液pH值不低6,在此条件下,Nisin的浓度达到718.98 IU/mL,比对照提高了29.14%。

重组人SOD工程菌发酵表达条件的优化

采用正交试验优化重组人超氧化物歧化酶工程菌的LB培养基,得到培养基最佳配比(g/L):蛋白胨12,酵母膏5,葡萄糖1和氯化钠10。以此为基础优化基因工程菌发酵条件,确定培养基初始pH 6.5～7.5,装液量20%,菌体密度(D_(600))0.55～1.4,42℃诱导表达2～3 h,目的蛋白相对表达量由优化前的25%提高至41%,绝对表达量是优化前的2.4倍。