大鼠骨髓间充质干细胞定向成骨诱导的动态观察(英文)

背景：骨髓间充质干细胞由于其具有多向分化潜能和高增殖潜能而在组织工程领域具有广泛的应用前景。目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞在向成骨细胞分化过程中细胞及生物活性变化。设计、时间和地点：随机对照实验,实验于2004-07/2006-06在解放军广州军区广州总医院医学实验科干细胞组织工程实验室完成。材料：成年清洁级SD大鼠20只,雌雄不拘用于取骨髓。方法：按随机数字表法将动物分为实验组和对照组,每组10只。通过改良的骨髓培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,对照组以基础培养液（10%胎牛血清＋高糖DMEM＋100U/L青霉素＋100U/L链霉素＋2mmol/L谷氨酰胺）培养,实验组用条件培养液（基础培养液,10mmol/Lβ-甘油磷酸纳,10^-7mol/L地塞米松,50mg/L维生素C）进行诱导培养。一段时间后制备细胞爬片。主要观察指标：①用倒置显微镜和透射电子显微镜进行细胞形态学观察。②采用Gomori改良钙钴法进行碱性磷酸酶染色,应用免疫细胞化学染色方法测定骨钙素的表达。结果：骨髓间充质干细胞接种48h后,较多细胞贴壁,72h后增殖,生长良好;7-9d时细胞融合率可达到80%。透射电镜下骨髓间充质干细胞的细胞核较大,形态幼稚。经过体外成骨诱导的骨髓间充质干细胞表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征,诱导1周后表达碱性磷酸酶活性,2周后骨钙素表达呈阳性。结论：骨髓间充质干细胞经体外成骨定向诱导1周后进入成骨细胞的转化过程,并可以保持一定程度的增殖活性,可作为骨组织工程的种子细胞。