CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞通过NKG2D增强急性髓性白血病中NK细胞毒性

目的CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞在急性髓性白血病中调控NKG2D介导NK细胞毒性的研究。方法免疫磁珠法分离急性髓性白血病(AML)和健康对照外周血NK细胞和CD4^(+)CD25^(+)细胞,分析foxp3与NKG2D表达,CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例与NK细胞的细胞毒作用相关性。Spearman法分析CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞比例与NK细胞的细胞毒性和NGK2D相关性。foxp3过表达处理AML外周血淋巴细胞后,流式细胞术检测NKG2D,IFN-γ和CD107a表达,LDH法检测NK细胞毒性。GEPIA2数据库分析AML患者NKG2D和foxp3基因表达相关性,TCGA数据库分析AML转录组数据中与NKG2D表达高相关性基因。IL-2(10μg/mL),IL-15(10μg/mL)处理NK细胞24 h后,流式细胞术检测NKG2D和CD107a表达,酶联免疫反应法检测NK细胞分泌的IFN-γ,LDH法检测NK细胞毒性。采用t检验等方法统计分析组间差异及变量相关性。结果与对照比较,AML组NK细胞中NKG2D表达(平均荧光强度MFI:942.25±117.17比3245.28±367.43)降低(P<0.001)。foxp3表达与NKG2D呈正相关性(r=0.590,P<0.001),NKG2D表达百分数与外周血淋巴细胞中CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例呈正相关(r=0.708,P=0.002),AML患者外周血NK细胞活力也与CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例呈正相关(r=0.655,P=0.006)。与OE-NC比较,OE-foxp3组细胞中NKG2D的表达水平(MFI:2115.37±269.53比914.28±103.36)、杀伤能力(58.24%±3.17%比24.18%±2.35%)、NK细胞毒性评估指标CD107a(45.43%±1.28%比18.24%±1.49%)和IFN-γ水平(24.16%±1.17%比16.28%±0.95%)升高(P均<0.001)。TCGA数据分析发现,NKG2D表达与CD3G、IL-3、IL-2、CD3E、IL-10、IL-17、IL-7R、IL-15、EZH2等基因相关性较高,流式细胞术检测发现,与对照比较,IL-2和IL-15处理后NK细胞的表面受体NKG2D和CD107a表达、IFN-γ水平、NK细胞毒性均升高。结论AML外周血中,NK细胞表面受体NKG2D低于正常对照,其中CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞通过IL-2和IL-15影响NKG2D表达进而调控NK细胞毒性。