基于生物活性和分子对接的滇鸡血藤水煎液质量控制研究

目的:初步探究滇鸡血藤水煎液活血功效的生物评价方法并挖掘参与凝血酶抑制的核心成分。方法:采用体外凝血酶活性抑制试验,评价滇鸡血藤水煎液体外凝血酶抑制活性。然后利用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)挖掘滇鸡血藤水煎液中的化学成分,并通过分子对接技术对这些化学成分的生物活性进行评估,筛选核心抗凝成分。结果:凝血酶抑制试验表明滇鸡血藤的标准煎剂(0.2 g·m L^(-1))具有高达78.40%的凝血酶抑制率,并从滇鸡血藤水煎液中推测鉴定了14个化合物,将其与凝血酶进行分子对接评价:戈米辛C(-7.9 kcal·mol^(-1))、戈米辛G(-7.6 kcal·mol^(-1))、内南五味子素C(-8.1kcal·mol^(-1))、内南五味子素D(-9.4 kcal·mol^(-1))、阿里山五味子灵C(-9.4 kcal·mol^(-1))、五味子素C(-7.9 kcal·mol^(-1))、五味子素A(-7.3 kcal·mol^(-1))、异型南五味子素E(-8.2 kcal·mol^(-1))、五味子酯D(-8.6 kcal·mol^(-1))、红花五味子素(-7.4 kcal·mol^(-1))、内南五味子酯B(-7.6 kcal·mol^(-1))、内南五味子酯A(-8.1 kcal·mol^(-1))、乙酰基氧代南五味子烷(-8.5 kcal·mol^(-1))、内南五味子酯D(-9.2 kcal·mol^(-1))。其中内南五味子素D和阿里山五味子灵C与凝血酶蛋白具有紧密结合的空间构型以及理想的结合能。结论:滇鸡血藤水煎液具有较好的凝血酶抑制活性,筛选出的2个具有凝血酶抑制活性的核心成分,可作为其质量标志物候选成分,为滇鸡血藤水煎液生物活性评价方法的建立和质控研究提供了参考依据。

豆科与木兰科鸡血藤类药材活性成分及药理作用研究进展

鸡血藤是传统的活血化瘀类中药,具有活血补血、调经止痛、舒筋活络的功效,临床应用广泛。约有26种药用植物曾作为鸡血藤在临床使用,其所含化学成分复杂多样,主要包括黄酮、蒽醌、木脂素、三萜及挥发油等,表现出促进造血功能、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、保肝及抗人免疫缺陷病毒(HIV)等多种药理活性。根据本草著作、文献研究和现代应用情况,分别对来自豆科和木兰科的11种鸡血藤类药材的主要化学成分和药理活性进行综述,对比两者所含成分及药理活性的异同,为其进一步的开发与合理利用提供依据。

天竺黄与人工天竺黄的光学显微镜及SEM-EDS鉴别

目的:对比分析天竺黄和人工天竺黄的微观结构及元素组成,为天竺黄和人工天竺黄的快速鉴别提供参考。方法:采用普通光学显微镜与偏光显微镜比较天竺黄和人工天竺黄的粉末显微特征与偏光性,联用扫描电镜-能谱仪(SEM-EDS)比较天竺黄和人工天竺黄的微观形貌与元素组成。结果:普通光学显微镜显示,天竺黄与人工天竺黄的差异在于有色团块和条状物;偏光显微镜显示,天竺黄与人工天竺黄均无偏光性;扫描电镜显示,天竺黄呈粒状集合体、粗糙,而人工天竺黄紧实、平滑;能谱仪检测结果表明,天竺黄和人工天竺黄的主要元素含量顺序及其他元素种类有一定差异。结论:天竺黄和人工天竺黄的微观结构及元素组成存在差异性,综合利用普通光学显微镜、扫描电镜和能谱仪可快速鉴别天竺黄和人工天竺黄。

基于天竺黄中15种蛋白质氨基酸含量分析的营养价值评价

通过PITC柱前衍生化-HPLC测定天竺黄中15种蛋白质氨基酸的含量,结果发现15种总蛋白质氨基酸(TAA)质量分数为0.61~12.25 mg·g^(-1),此15种蛋白质氨基酸中平均含量排名前五的是天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)和缬氨酸(Val)。必需蛋白质氨基酸(EAA)质量分数为0.24~4.75 mg·g^(-1),儿童必需蛋白质氨基酸(CEAA)质量分数为0.30~4.73 mg·g^(-1),非必需蛋白质氨基酸(NEAA)质量分数为0.40~7.50 mg·g^(-1),药用蛋白质氨基酸(MAA)质量分数为0.36~6.51 mg·g^(-1),呈味蛋白质氨基酸中甜味(SAA)、苦味(BAA)、鲜味(FAA)和无味(OAA)蛋白质氨基酸质量分数分别为0.22~4.70、0.19~4.03、0.13~2.26、0.06~1.26 mg·g^(-1),甜味蛋白质氨基酸含量最高,苦味蛋白质氨基酸次之。21批天竺黄中蛋白质氨基酸成分组成一致,但其含量却存在显著差异。在3个产地中,广东产地的总蛋白质氨基酸(TAA)含量、必需蛋白质氨基酸(EAA)含量、儿童必需蛋白质氨基酸(CEAA)含量、非必需蛋白质氨基酸(NEAA)含量、药用蛋白质氨基酸(MAA)含量、呈味蛋白质氨基酸含量均是最高。运用氨基酸比值(RAA)、氨基酸比值系数(RCAA)、氨基酸比值系数分(SRCAA)进行天竺黄中蛋白质氨基酸的营养价值评价,结果表明,广东产地的天竺黄营养价值更优。基于天竺黄中15种蛋白质氨基酸含量分析的营养价值评价,以期为天竺黄的质量等级评价提供数据支撑,也为其资源的开发利用奠定基础。

基于电感耦合等离子体质谱法的天竺黄中无机元素的分析

运用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法,测定天竺黄中的25种无机元素含量,并根据元素含量,建立元素指纹图谱,同时运用SPSS 20.0和SIMCA 14.1进行化学计量学分析。结果发现,在天竺黄中共测得25种元素,分别为硼(B)、钠(Na)、镁(Mg)、铝(Al)、钾(K)、钙(Ca)、钪(Sc)、钒(V)、铬(Cr)、锰(Mn)、铁(Fe)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、镓(Ga)、砷(As)、硒(Se)、锆(Zr)、钼(Mo)、镉(Cd)、铟(In)、钡(Ba)、铅(Pb)和铋(Bi),可定量的为13种元素,平均含量排名前三且由高到低依次是K>Fe>Na,其中B、Na、Al、Ca、Fe和Ba这6种元素在不同产地批次天竺黄中含量差别较大。通过相关性分析,发现Ca和Mg之间相关系数最高,其次是Mn和Zn,均呈现显著正相关关系,并且推测Ca和Mg、Mn和Zn分别存在协同增量的关系;由主成分分析可得,Fe、As、Ni、Cu、Mn、Na、Mg、Ca、Al、Ba和B元素是天竺黄的主要元素;由正交偏最小二乘法判别分析可得,Cu、As、Mn是3个产地的共同差异元素,表明通过对Cu、As、Mn 3种元素的定量鉴别,可使3个产地批次的天竺黄简单区分。该研究通过对不同产地批次天竺黄元素种类和含量进行测定分析,以期为天竺黄药效物质基础及调控机制的探究提供理论支撑,为天竺黄质量评价、临床用药安全及资源开发利用奠定基础。

天竺黄本草考证

通过研读历代本草、医典古籍等资料,发现关于天竺黄的记载存在差异,为正本清源,该研究以本草古籍为基础,结合植物形态和调查研究,对其始载古籍、品名、功效主治和质量评价标准进行考证。在早期记载中,天竺黄还有多个不同名称,例如竹黄、天竹黄、竹膏、竹糖、竺黄等,且目前所知最早使用天竺黄为正名的是《日华子本草》;在历代古籍中,有关天竺黄的记载最早也是出现于《日华子本草》,而非《蜀本草》或其他古籍。《日华子本草》对其产地、功效主治也进行了相关描述,虽因其认知有限,存在错误,但为今后研究天竺黄提供思路,对以后形成成熟的体系具有开创性意义。随着研究深入,天竺黄的功效主治从《日华子本草》开始也是一脉相承,古今变化不大且经历多年临床佐证,逐步完善;在考证过程中,笔者发现,古籍中关于天竺黄质量评价的记载不多,但也为今后天竺黄的质量等级标准的制定奠定相应的基础。

大柴胡汤功效标志物的发现及其作用机制解析研究

大柴胡汤为经典名方之一,具有和解少阳、内泻热结之效。目前在临床上应用广泛,疗效显著,然而其质控指标及作用机制尚不明确。因此该研究利用文献挖掘、分子生物学、网络药理学多种技术,明确大柴胡汤的功效标志物及其作用机制,从而有效控制质量,确保临床疗效。首先,研究基于中药质量标志物(Q-marker)“五原则”对大柴胡汤功效标志物进行预测分析。其次,采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞构建体外炎症模型,以Griess法评价大柴胡汤功效标志物的抗炎活性,验证功效标志物的有效性。利用中药系统药理学数据库(TCMSP)、ChEMBL与SwissTargetPrediction平台获取功效标志物的潜在作用靶点,构建大柴胡汤功效标志物的蛋白互作网络。利用拓扑、GO、KEGG富集分析构建“关键靶点-信号通路-生物过程”网络,进而阐释大柴胡汤功效标志物的作用机制。研究结果显示柴胡皂苷B;、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、新橙皮苷、柚皮苷、橙皮苷、芍药苷8个化合物可作为大柴胡汤的潜在功效标志物。抗炎活性评价结果显示潜在功效标志物均可有效抑制NO的释放,具有较好的抗炎活性。网络药理学研究结果表明大柴胡汤功效标志物可能通过作用于MAPK、NF-κB信号通路调节炎症反应;作用于HIF-1、PI3K-AKT信号通路调节糖类代谢;作用于AMPK、PI3K-AKT信号通路调节脂质代谢。该研究利用文献挖掘结合分子生物实验确定大柴胡汤的功效标志物,并运用网络药理学从分子水平探讨其作用机制,旨在为大柴胡汤质量控制研究提供参考,并为其临床应用提供科学依据。

基于特征图谱及网络药理学的大柴胡汤质量标志物研究

大柴胡汤临床应用广泛、疗效确切,为治疗胆囊炎的经典方剂。然而其成分多样、作用复杂,传统质控指标难以反映其整体功效。因此本研究基于特征图谱和网络药理学预测大柴胡汤质量标志物,以期对大柴胡汤整体质量进行有效控制。研究首先利用虚拟筛选技术获得35个大柴胡汤潜在药效成分。其次采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)建立15批大柴胡汤的特征图谱,结合对照品,指认化学成分。初步将芍药内酯苷、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、柴胡皂苷b^(2)、柴胡皂苷b^(1)定为大柴胡汤潜在质量标志物。最后利用网络药理学技术手段,构建“成分-靶点-通路-生命过程”网络图,探究其治疗胆囊炎的作用机制,进而明确质量标志物的准确性。结果显示潜在质量标志物可作用于多靶点从而达到抗炎、调节代谢等目的,进而联合治疗胆囊炎。质量标志物与大柴胡汤主要药理作用吻合,可表征大柴胡汤的整体功效。该研究结合特征图谱及网络药理学,挖掘大柴胡汤的质量标志物,为大柴胡汤的质量控制及评价提供依据。