人工伴侣条件下谷胱甘肽浓度对溶菌酶复性的影响

利用盐酸胍变性、二硫苏糖醇还原的溶菌酶为模型蛋白,考察人工伴侣一步法辅助溶菌酶复性时的最佳谷胱甘肽浓度。结果表明,当复性体系中溶菌酶浓度不同时,得到最大复性收率的GSSG与GSH的浓度有所差异。酶的质量浓度在0.06,0.1,0.2 mg/mL的条件下,随酶带入的还原型DTT的作用可以不予考虑,GSSG与GSH物质的量浓度比维持在1∶1时可以得到最大复性收率;酶的质量浓度在0.6 mg/mL的条件下,应当考虑DTT的作用,此时,需将变化后的GSSG与GSH物质的量浓度比维持在1∶1时,才能得到较大复性收率。

溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性(标准酶活)的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤。为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法。在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化。同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合。对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出。这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活。

胰岛分离纯化研究进展

目的综述胰岛分离纯化各步骤及常用方法,并介绍最新研究进展。方法查阅近年国内外胰岛分离纯化的相关文献,综合分析供体选择、胰腺消化分离、胰岛纯化和分离效果鉴定等流程。结果分离纯化效果取决于每一步材料和操作方法的选择及各操作步骤的衔接。结论胰岛移植是治疗1型糖尿病最有效的手段,胰岛分离纯化的优化及标准化操作可解决胰岛来源不足问题。