葛根菊苣茯苓方对高尿酸血症大鼠的作用与机制研究

目的通过建立高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠模型,探讨葛根菊苣茯苓方的降尿酸作用与可能机制。方法将42只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、葛根菊苣茯苓方低、中、高剂量(6.15 g/kg、12.3 g/kg、24.6 g/kg)组,别嘌醇组(0.03 g/kg),正常+葛根菊苣茯苓方组(正常给药组)。除正常组与正常给药组外,其余各组大鼠每日灌胃氧嗪酸钾1.5 g/kg、腺嘌呤0.1 g/kg建立HUA模型,连续21 d。从第8天开始,除正常组与模型组外,其余各组大鼠每日灌胃葛根菊苣茯苓方及别嘌醇干预治疗,持续14 d。造模结束后,采集大鼠血液,测定血尿酸(serum uric acid,SUA)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;取大鼠肝脏及肾脏,计算肾脏系数;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肾脏、肝脏病理变化;Western blot检测肾脏中有机阴离子转运体(organic anion,OAT)1、OAT3、尿酸转运体(recombinant urate transporter,URAT)1、三磷酸腺苷结合转运蛋白(ATP-binding cassette sub-family G member,ABCG)2、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter type,GLUT)9蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏表面皱缩,色泽变浅,肾小管代偿性扩张,可见尿酸盐结晶;肾脏质量增加(P<0.05),肾脏系数增大(P<0.05);血清SUA、BUN、XOD、SCr、ADA含量与肾脏组织URAT1、GLUT9蛋白表达显著上升(P<0.05);ABCG2、OAT1、OAT3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠上述指标有明显改善,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论葛根菊苣茯苓方可以通过调节尿酸盐转运相关蛋白降低HUA大鼠的高尿酸水平。

半夏厚朴汤通过抑制炎症反应改善CIH小鼠肺脏损伤的机制研究

目的本研究旨在观察半夏厚朴汤(Banxia houpu decoction,BHD)对慢性间歇性低氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH)暴露小鼠肺脏损伤的改善作用,并探讨其可能的分子机制。方法将30只健康的6-8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成:常氧组(CON)、慢性间歇性低氧暴露组(CIH)、慢性间歇性低氧+半夏厚朴汤组(CIH+BHD)。CON组暴露于常氧环境,CIH组与CIH+BHD组暴露于间歇性低氧的环境中。其中,CIH+BHD组于每日放入低氧舱前30 min给予半夏厚朴汤灌胃(7 g·kg^(-1)·d^(-1)),而CIH组与CON组给予同等体积生理盐水。造模5周结束后取材,应用HE染色观察各组小鼠肺脏的病理学改变;免疫组化方法检测各组小鼠NF-κB、IL-6、TNF-α的蛋白表达情况;Westernblot检测NLRP3炎性小体(包括NLRP3、ASC、caspase-1)、IL-6、TNF-α、TLR4/MyD88/NF-κB、TXNIP和IL-18的蛋白表达。结果CIH处理后,小鼠肺组织病理学改变为肺泡壁增厚、炎性细胞浸润;免疫组化结果显示CIH暴露后NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;Western blot检测CIH暴露后NLRP3炎性小体(包括NLRP3、ASC、caspase-1)、IL-6、TNF-α、TLR4/MyD88/NF-κB、TXNIP和IL-18的蛋白表达升高。与CIH组相比,CIH+BHD组小鼠肺脏病理切片可见肺泡壁厚度大致正常,炎性细胞浸润情况改善;免疫组化和Western blot中检测的相关指标均有下降的表现。结论半夏厚朴汤可能是通过抑制炎症反应改善CIH暴露后小鼠肺脏损伤。

慢性间歇性低氧暴露对大鼠肝脏铁代谢的影响及机制研究

目的:通过建立慢性间歇性低氧(CIH)大鼠模型,探讨CIH暴露对肝脏铁代谢的影响及可能的机制。方法:将20只SD大鼠随机分为常氧对照组(对照组)和模型组(CIH组),将模型组大鼠置于动物间歇性低氧舱内,前1.5min向舱内充入100%氮气使氧气浓度降至5%,后1.5min充入100%氧气使氧气浓度升至21%,每一循环3min,8h/d,35d;常氧对照组大鼠置于相同舱内,充入正常空气。HE染色观察肝脏损伤情况,比色法检测血清铁和总铁结合力(TIBC);普鲁士蓝染色观察肝脏铁含量;Western blot检测肝脏二价金属转运蛋白[DMT1(+ire)、DMT1(-ire)]、膜铁转运蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、铁蛋白(FTL)、p-STAT3、STAT3蛋白表达;Q-PCR检测肝脏铁调素(hepcidin)、DMT1(+ire)、DMT1(-ire)、FPN1、TfR1、白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肝脏细胞结构紊乱,出现脂肪空泡、细胞核萎缩;与对照组相比,模型组大鼠TfR1和DMT1(+ire)mRNA及蛋白表达显著上升(P<0.05),FPN1蛋白表达明显下降(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠铁沉积显著增多,血清铁含量和转铁蛋白饱和度显著下降(P<0.01),FTL蛋白表达升高(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠肝脏中hepcidin及IL-6 mRNA表达升高(P<0.05),p-STAT3/STAT3蛋白表达比值升高(P<0.05)。结论:CIH暴露可能通过IL-6/STAT3通路调控hepcidin-FPN1系统造成肝脏中的铁沉积。

补中益气汤对慢性间歇性低氧诱发的小鼠肺间质纤维化的作用

目的:观察慢性间歇性低氧(CIH)对小鼠肺组织转化生长因子-β(TGF-β)、P-samd3和血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、表达的影响以及补中益气汤对CIH小鼠肺间质沉积损害的干预作用。方法:随机将50只SPF级C57BL小鼠分为5组(n=10):空白对照组、CIH模型组、CIH+低、中、高剂量补中益气汤组。分别置于常氧或CIH条件下,中药组给予对应剂量药物。在第35日无创肺功能检测后处死。HE染色评估病理学改变,Masson染色行胶原沉积评估;Western blot法检测TGF-β1、P-smad3等通道蛋白和下游α-SMA、Collagen I的蛋白表达水平;ELISA法检测血清中TGF-β1、LN、HA的质量浓度。结果:HE染色显示,CIH小鼠肺泡塌陷,肺间隔增厚,上皮细胞坏死;Masson显示,CIH小鼠肺间质大量胶原纤维增生、沉积,而补中益气汤干预组肺组织上述改变较CIH模型组明显减轻。CIH模型组肺组织中TGF-β1、P-smad3及Collagen I、CollagenⅢ、α-SMA蛋白表达水平与空白对照组相比明显上调(P<0.05),血清中TGF-β1、LN的表达明显上调(P<0.05)。补中益气汤干预组肺组织中TGF-β1、P-smad3、Collagen I蛋白及SMA-α的表达水平相较于CIH组有明显下调(P<0.05)。结论:补中益气汤可抑制CIH小鼠肺泡结构改变和肺间质的胶原过度沉积。其机制可能与补中益气汤下调TGF-β/smads信号通路的相关蛋白表达有关。

半夏厚朴汤及其拆方改善慢性间歇性低氧小鼠机体铁代谢

目的观察半夏厚朴汤(BHF)及其拆方对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠机体铁代谢的调节作用。方法42只雄性C57BL/6N小鼠随机分为常氧对照组(Con)、CIH模型组(CIH)、全方组(CIH+BHF)、苏叶组(CIH+苏叶)、厚朴组(CIH+厚朴)、行气组(CIH+厚朴、苏叶)、化痰饮组(CIH+半夏、茯苓、生姜),每组6只。连续CIH暴露和灌胃给药处理21 d后检测相关指标。比色法检测血清铁,HE染色观察肝脏及十二指肠形态结构、Perls'染色观察肝脏、脾脏、十二指肠铁含量,Western Blot及免疫组织化学染色检测肝脏铁调素(hepcidin)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TfR1)、铁泵蛋白1(ferroportin 1,FPN1)、铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)蛋白表达。结果与Con组比较,CIH组小鼠血清铁含量降低,小肠黏膜(十二指肠)与肝脏组织结构损伤,肝脏、小肠铁沉积增加(P<0.05),脾脏铁含量减少(P<0.05),肝脏TfR1、FTL、hepcidin蛋白表达升高(P<0.05),FPN1蛋白表达下降(P<0.05)。与CIH组比较,全方组、行气组小鼠血清铁水平上调(P<0.05),全方组、苏叶组、厚朴组、行气组小肠黏膜与肝脏组织形态较为完整,肝脏、小肠铁沉积减轻(P<0.05),全方组、行气组脾脏铁含量回升(P<0.01,P<0.05),全方及行气组肝脏hepcidin、TfR1、FPN1和FTL蛋白表达紊乱改善(P<0.05)。结论半夏厚朴汤及其拆方能够不同程度改善CIH暴露引起的铁代谢紊乱,其中行气药可能发挥重要作用。

多发性硬化动物模型中小胶质细胞动态变化对少突胶质细胞的影响

多发性硬化(MS)是一种由自身免疫机制触发的中枢神经系统(CNS)慢性炎症性脱髓鞘疾病,是导致年轻人神经功能残疾的主要原因。在MS中,多种神经胶质细胞参与疾病的发生发展进程,其中少突胶质细胞(OL)和髓鞘被自身免疫介导的炎症破坏,少突胶质前体细胞(OPC)生成OL受损导致持续性脱髓鞘、髓鞘碎片积聚和轴索损伤,临床表现为CNS残疾。而参与炎性反应和髓鞘碎片清除等过程的小胶质细胞对于OPC的分化和OL的成熟发挥核心作用,能够直接或间接影响髓鞘的再生进程,两者之间存在交互式影响机制。认识两者之间的联系能够更好地揭示MS的发病机制并制订新的治疗策略,解决MS临床治疗中的关键科学问题。本文通过总结小胶质细胞在MS及其经典动物模型中的动态变化,探讨这一过程中小胶质细胞与OL之间的内在联系,聚焦通过靶向调控小胶质细胞发挥有益作用,从而促进OPC分化和髓鞘再生,以期为MS治疗提供新的研究方向。

补中益气汤基于ACE2-Ang(1-7)-Mas轴减轻CIH诱发的肺脏炎症损伤

目的:探讨补中益气汤对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肺脏炎症的干预作用,并初步阐明其作用机制。方法:将40只健康的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成:常氧组、模型组(CIH)和补中益气汤低、中、高剂量组。常氧组暴露于常氧环境中,模型组与补中益气汤低、中、高剂量组暴露于间歇性低氧环境中。其中,补中益气汤低、中、高剂量每日放入低氧舱前30 min给予补中益气汤灌胃(低、中、高剂量分别为8.1、16.2、32.4 g·kg^(-1)·d-1),而模型组与常氧组给予同等体积生理盐水。造模5周后,应用EMKA型动物肺功能仪检测小鼠肺功能,肺功能检测完毕后取材。应用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺脏的病理学改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肺组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测IL-6、IL-8、TNF-α、血管紧张素转化酶2(ACE2)、线粒体组装受体(Mas)蛋白的表达。结果:与常氧组比较,模型组小鼠肺功能出现明显异常(P<0.05,P<0.01),肺组织出现肺泡壁增厚、炎性细胞浸润等改变;血清中IL-6、IL-8、TNF-α和肺组织中AngⅡ的含量显著上升(P<0.01),Ang(1-7)含量显著下降(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α蛋白表达显著升高、ACE2、Mas蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组小鼠肺功能有所改善(P<0.05,P<0.01),肺脏HE染色可见肺泡壁厚度大致正常,炎性细胞浸润减少;免疫组化和Western blot检测炎症相关蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),ACE2、Mas蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴抑制炎症反应改善CIH暴露后小鼠的肺脏损伤。

当归补血汤含药血清对间歇性低氧暴露H9c2心肌细胞损伤的作用及机制

该研究利用间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型,观察当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)含药血清对H9c2心肌细胞损伤的作用及机制。将H9c2细胞分为5组:对照(control,CON)组、间歇性低氧(IH)组、间歇性低氧加DBD含药血清处理(IH+DBD)组、间歇性低氧加自噬增强剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组(IH+RAPA)、间歇性低氧加DBD含药血清处理和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)(IH+DBD+3-MA)组。丹酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色检测细胞自噬小体变化情况;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶(creatine kinase,CK)试剂盒检测心肌细胞活性、细胞培养液中LDH和CK的含量,观察细胞损伤情况;原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡情况;JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位变化情况;Western blot方法检测线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ型(microtubule-associated proteins light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ型(microtubule-associated proteins light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、P62、Parkin和凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3前体(pro caspase-3)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因、Bcl-2-associated X(Bax)蛋白的表达变化情况。结果显示,与CON组比较,IH组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著降低,P62表达显著升高,细胞存活率显著下降,培养液中LDH及CK含量显著升高,TUNEL阳性细胞数量显著增加,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax比值显著下降,线粒体膜电位显著下降。与IH组比较,IH+DBD组及IH+RAPA组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著升高,P62表达显著降低,细胞存活率显著增加,培养液中LDH及CK含量显著减少,TUNEL阳性细胞数量显著减少,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax显著升高,线粒体膜电位显著升高;IH+DBD+3-MA组差异无统计学意义。与IH+DBD组比较,IH+DBD+3-MA组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著降低,P62表达显著升高,细胞存活率显著下降,培养液中LDH及CK含量显著升高,TUNEL阳性细胞数量显著增加,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax比值显著下降,线粒体膜电位显著下降。综上,当归补血汤可以促进IH暴露H9c2心肌细胞的线粒体自噬,抑制心肌细胞凋亡,改善心肌细胞损伤。

益气养阴方药对慢性间歇性低氧暴露小鼠气阴两虚症状的影响

目的:探讨4种益气养阴方药对慢性间歇性低氧(CIH)暴露小鼠气阴两虚症状的改善作用。方法:36只雄性C57BL/6小鼠随机分为常氧对照组、慢性间歇性低氧组、生脉饮组、沙参麦冬汤组、生脉地黄汤组和生脉地黄汤加丹参组,每组6只。常氧对照组暴露于常氧环境,其他组暴露于CIH环境(低氧舱氧气浓度在5%~21%循环,5 min/循环,每天8 h,共35 d)。同时,各中药组于每日上午灌胃相应中药,常氧对照组与慢性间歇性低氧组灌胃等体积纯水。造模结束后测量小鼠摄食、摄水量及体质量,应用旷场实验观测自发活动,高架十字平台迷宫实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验检测焦虑、抑郁情况,B超检测心功能,检测小鼠出血、凝血时间及肝肾功能。结果:与常氧对照组比较,慢性间歇性低氧组小鼠体质量和摄食量显著减少(P<0.01),摄水量显著增多(P<0.01),出现自发活动量减少和焦虑抑郁样行为(P<0.01),心脏收缩和舒张功能下降(P<0.01),肝肾功能异常(P<0.01);与慢性间歇性低氧组比较,各中药组小鼠体质量、摄食量增多和摄水量减少(P<0.05,P<0.01),自发活动量显著增加且焦虑抑郁样行为显著减轻(P<0.01,P<0.05),心脏和肝肾功能障碍显著改善(P<0.05,P<0.01)。结论:益气养阴方药可有效缓解CIH暴露小鼠的气阴两虚症状,改善肝肾功能障碍,为CIH诱导机体损伤提供了针对性中医药治疗方案。

沙参麦冬汤在间歇性低氧条件下对小鼠非小细胞肺癌细胞LLC增殖和侵袭的抑制作用

目的:探讨沙参麦冬汤(Shashen-Maidong Decoction,SMD)含药血清在间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)条件下对小鼠非小细胞肺癌LLC细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响,及其可能的作用机制。方法:用C57/BL6小鼠制备SMD含药血清。在IH条件下用不同浓度的SMD含药血清处理LLC细胞,分别采用CCK-8法和结晶紫染色法检测SMD含药血清对LLC细胞增殖能力的影响,用TUNEL法检测SMD含药血清对细胞凋亡的影响,用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测SMD含药血清对细胞迁移和侵袭能力的影响。采用荧光探针DCFHDA法原位观测LLC细胞中活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的生成情况以反映细胞氧化应激水平。采用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 2,NOX2)和NOX4蛋白的表达水平。结果:与常氧组相比,IH条件下LLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01),凋亡水平明显下降(P<0.01),而氧化应激水平增高(P<0.01)。SMD含药血清干预后显著抑制了IH环境下LLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),并促进了LLC细胞的凋亡(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与常氧组相比,IH条件下LLC细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9、NOX2和NOX4蛋白的表达水平明显上调,E-cadherin蛋白的表达水平明显下调(P<0.05);采用SMD含药血清处理后能显著下调LLC细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9、NOX2和NOX4蛋白的表达水平,同时上调E-cadherin蛋白的表达水平(P<0.05)。结论:SMD含药血清促进了IH环境下LLC细胞的凋亡,抑制了LLC细胞的增殖及迁移和侵袭,其机制可能与降低细胞的氧化应激水平有关。