尿酸对老年膝骨关节炎病人软骨GLUT9、URAT1表达的影响

目的探讨老年膝骨关节炎病人血清UA水平与软骨组织中UA转运蛋白的相关性。方法收集2018~2019年就诊于河北省人民医院骨科的老年膝骨关节炎(KOA)病人30例。以所有入选者UA中位数水平(254.6μmol/L)将病人分为血清UA<254.6μmol/L组(A组)和UA≥254.6μmol/L组(B组),检测并比较2组软骨组织中葡萄糖易化转运蛋白9(GLUT9)和尿酸盐转运蛋白1(URAT1)的mRNA和蛋白的表达水平。结果与B组相比,A组病人的体质量、BMI较小,VAS评分较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,VAS评分与UA水平呈正相关(r=0.396,P<0.05)。B组病人关节软骨中GLUT9、URAT1的mRNA和蛋白表达水平均较A组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论UA水平的升高可能通过增加软骨中GLUT9及URAT1蛋白的表达,使软骨细胞内UA水平升高,诱导软骨细胞氧化损伤,从而参与KOA的发病。

利拉鲁肽通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻糖尿病大鼠心肌炎症和氧化应激损伤

目的探讨利拉鲁肽(liraglutide,LRG)改善2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌炎症和氧化应激损伤的可能机制。方法选取40只雄性SD大鼠,分为对照组(CON)、T2DM组、LRG组、LRG+AMPK抑制剂Compound C组(LRG+CC)。4周后,检测大鼠血糖、血脂;彩色多普勒超声检测大鼠心功能;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌炎症、氧化应激、凋亡、自噬及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达。结果LRG能降低T2DM大鼠高血糖、高血脂,改善心功能指标;LRG能降低T2DM大鼠心肌IL-6、TNF-α、IL-1β、NOX2、NOX4、cleaved caspase-3、Bax、p-mTOR/mTOR表达及MDA含量,增加Bcl-2、Atg5、Beclin-1、LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK表达及SOD、GSH活性,从而抑制心肌炎症、氧化应激和凋亡,并增强自噬,但使用AMPK抑制剂Compound C能够明显逆转LRG的作用。结论LRG可通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻T2DM大鼠心肌炎症和氧化应激损伤。

老鹳草素治疗去卵巢小鼠骨质疏松症的实验研究

目的观察老鹳草素对去卵巢小鼠骨质疏松症的治疗作用,并探讨其可能机制。方法将18只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,每组6只。假手术组仅实施手术暴露两侧卵巢,切除卵巢旁边少量脂肪组织,保留卵巢。模型组、治疗组小鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉后,沿背部近髂脊处做一长约2 cm×3 cm纵行切口,逐层切开皮肤后切除双侧卵巢,缝合切口。治疗组在去卵巢手术前5 d灌胃给予老鹳草素20 mg·kg-1·d-1,假手术组灌胃给予等量0.9%氯化钠溶液。疗程3个月。实验结束后处死3组小鼠,测定血清生化指标[碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨钙素(BGP)、雌二醇(E2)]。双能X线骨密度测量仪、micro-CT测定股骨干骺端骨密度(BMD)及计量学参数。光学显微镜下观察股骨下端骨髓腔中脂肪细胞数量。Real time-PCR和Western blot检测股骨组织Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果将与假手术组比较,模型组小鼠血清ALP、TRAP、BGP水平显著升高,E2水平显著降低,股骨干骺端BMD、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积/总体积、股骨下端Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著减少,骨小梁体积、股骨下端骨髓腔中脂肪细胞数量、GSK 3β-mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05);治疗组小鼠血清ALP、TRAP、BGP水平较模型组显著降低,E2水平较模型组显著升高,股骨干骺端BMD、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积/总体积、股骨下端Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较模型组显著增加,骨小梁体积、股骨下端骨髓腔中脂肪细胞数量、GSK-3βmRNA和蛋白表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论将老鹳草素对去卵巢骨质疏松小鼠模型有一定治疗作用,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

MicroRNA-155靶向SOCS1基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的影响

目的探讨MicroRNA-155靶向细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)1基因对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)内皮细胞炎症损伤的作用。方法构建动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,分离、培养、鉴定大鼠原代冠状动脉内皮细胞,使用同型半胱氨酸与细胞共孵育24 h,进行冠心病应激,将细胞分组。双荧光素酶报告基因实验验证MicroRNA-155和SOCS1的靶向关系。实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测心肌组织和各组细胞中MicroRNA-155和SOCS1表达水平。四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞活力。使用Hochest33258染色检验细胞凋亡率。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和IL-18表达。结果与正常组相比,AS组血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Ca^(2+)水平均明显提高(P<0.05);AS组心肌组织中MicroRNA-155水平显著升高,SOCS1 mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.05);SOCS1证实为MicroRNA-155的靶基因。与空白对照组相比,MicroRNA-155mimics组SOCS1蛋白水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,IL-1β、IL-6和IL-18表达水平上升,IL-10表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);而MicroRNA-155 inhibitor组的SOCS1 mRNA及蛋白水平上调,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,IL-1β、IL-6和IL-18表达水平下降,IL-10表达水平上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MicroRNA-155通过靶向抑制SOCS1基因,进而增加冠心病大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡率及增加促炎症因子的表达,从而发挥对心肌微血管内皮细胞的促炎作用。

内脏脂肪指数在甲状腺功能正常人群血尿酸/血肌酐比值与代谢综合征发生风险间的中介效应研究

背景 我国代谢综合征(MS)患病率逐年升高,血尿酸(SUA)水平与MS的发生密切相关,由于SUA受肾功能影响,采用标化SUA〔SUA/血肌酐比值(SUA/Scr)〕可更好地预测MS。内脏脂肪指数(VAI)是衡量内脏脂肪蓄积程度的重要指标,可更直接地预测MS的发生风险。但目前在甲状腺功能正常人群中,关于VAI是否介导SUA/ Scr与MS关联的研究较少。目的 探讨VAI在甲状腺功能正常人群中SUA/Scr与MS发生风险间的中介效应。方法 选取2020年1月至2021年6月于河北省人民医院体检中心进行年度体检的10 042例体检人群。收集研究对象的基本信息,并进行体格检查和生化检测,计算SUA/Scr和VAI。采用中华医学会糖尿病学分会制定的标准诊断MS。将研究对象分别按照SUA/Scr水平四分位数和VAI四分位数,各分为4组:Q1~Q4组和V1~V4组。采用Pearson相关分析探究SUA/Scr与VAI的相关性;多因素Logistic回归分析探讨SUA/Scr和VAI对MS发生的影响;采用bootstrap方法分析VAI是否介导SUA/Scr与MS之间的关联。结果 10 042例研究对象中,MS患者1 833例(18.25%),非MS患者8 209例(81.75%)。Pearson相关分析结果显示,SUA/Scr与VAI呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,与Q1组相比,Q2组〔OR=1.310,95%CI(1.039,1.651)〕、Q3组〔OR=1.372,95%CI(1.089,1.729)〕、Q4组〔OR=1.744,95%CI(1.381,2.203)〕人群发生MS的风险增加(P<0.05);与V1组相比,V3组〔OR=6.721,95%CI(4.600,9.819)〕、V4组〔OR=33.327,95%CI(21.509,51.640)〕人群MS的发病风险增加(P<0.01)。中介效应分析表明,SUA/Scr对MS发病率具有直接影响〔β=0.154,95%CI(0.104,0.205)〕,并且VAI部分介导了SUA/Scr对MS发病率的影响〔β=0.183,95%CI(0.156,0.213)〕,中介效应占总效应的54.25%。结论 甲状腺功能正常人群SUA/Scr和VAI是MS发生风险的预测指标,VAI部分介导了SUA/Scr对MS发病率的影响。

利拉鲁肽通过调控自噬和Na^(+),K^(+)-ATPase活性抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的探讨利拉鲁肽(liraglutide,LRG)抑制高糖(HG)诱导的心肌细胞肥大的可能机制。方法体外培养H9c2细胞,分为对照(CON)组、HG组、低、中、高剂量LRG(LRG-L、LRG-M、LRG-H)组、LRG-H+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。鬼笔环肽染色观察细胞表面积;试剂盒测定细胞膜Na^(+),K^(+)-ATPase(NKA)活性;Real time-PCR和Western blot测定NKAα1、NKAα2 mRNA和蛋白表达;单丹磺胺戊二胺(MDC)荧光染色观察自噬囊泡数量;Western blot测定肥大标志基因(ANP、β-MHC)、自噬标志基因(Beclin-1、LC3、p62)蛋白表达。随后将H9c2细胞分为CON组、HG组、LRG-H组、LRG-H+Sirt1抑制剂EX 527组、LRG-H+AMPK抑制剂Compound C(CC)组,再次检测上述指标;Western blot测定Sirt1/AMPK/mTOR通路相关蛋白表达。结果LRG可抑制心肌细胞肥大,下调ANP、β-MHC蛋白表达;LRG可促进NKA活性恢复,上调NKAα2 mRNA和蛋白表达;LRG可增加自噬囊泡数量,上调Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达,下调p62蛋白表达;LRG可上调Sirt1、p-AMPK/AMPK蛋白表达,下调p-mTOR/mTOR蛋白表达;使用自噬抑制剂3-MA、Sirt1抑制剂EX 527、AMPK抑制剂CC则部分逆转了LRG的作用。结论LRG可抑制高糖所致心肌细胞肥大,其机制与调控Sirt1/AMPK/mTOR通路激活自噬及促进NKA活性恢复有关。

苦参碱通过上调KLF4/Nrf2通路减轻H_(2)O_(2)诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤

目的:基于KLF4/Nrf2途径探讨苦参碱对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化损伤的作用及机制。方法:培养HUVECs,采用CCK-8方法筛选苦参碱实验浓度。将HUVECs分为对照组、模型组和低、中、高浓度(0.5、1和2 mmol/L)苦参碱组,以H_(2)O_(2)(0.5 mmol/L)诱导建立HUVECs氧化损伤模型,检测细胞活力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(gluta-thione peroxidase,GPX)活性;RT-qPCR和Western blot方法检测细胞中Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)的mRNA和蛋白表达水平。进一步采用siRNA技术敲减KLF4基因表达,与苦参碱共同作用,观察上述指标的变化。结果:与模型组比较,苦参碱组细胞活力上升(P<0.05),ROS水平和MDA含量降低(P<0.05),SOD和GPX活性上升(P<0.05),KLF4、Nrf2、HO-1、NOQ1及γ-GCS表达水平升高(P<0.05)。抑制KLF4的表达后,苦参碱逆转H_(2)O_(2)引起的细胞活力降低、ROS升高及抗氧化应激分子表达的作用均显著减弱(P<0.05)。结论:苦参碱能够通过激活KLF4/Nrf2通路、抑制氧化应激来减轻H_(2)O_(2)诱导的HUVECs氧化损伤。

利拉鲁肽改善2型糖尿病大鼠空间学习和记忆能力机制的研究

目的探讨利拉鲁肽对T2DM大鼠空间学习和记忆功能的影响及相关机制。方法SD大鼠随机分为对照组(NC,n=12)、T2DM组(n=10)及利拉鲁肽组(Lir,n=10)。Morris水迷宫法检测各组空间学习记忆能力,原位末端标记(TUNEL)法检测海马神经元凋亡,荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,Western blot法检测血红素加氧酶(HO-1)、NADPH氧化酶1(NOX1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果Lir组在目标象限内停留时间比高于T2DM组(P<0.05)。Lir组第3~5天逃避潜伏期低于T2DM组(P<0.05)。Lir组海马神经元凋亡显著降低,染色质浓染、细胞核固缩现象减轻。与T2DM组比较,Lir组海马组织丙二醛降低,总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、HO-1蛋白表达、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、NOX1蛋白表达、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论利拉鲁肽改善T2DM大鼠空间学习和记忆功能,作用机制可能与增强海马组织抗氧化抗炎能力,减少神经元凋亡相关。

男性体检人群血尿酸水平对前臂骨密度的影响及其与体质量指数的交互作用

目的探讨男性体检人群血清尿酸(serum uric acid,SUA)水平对前臂骨密度(bone mineral density,BMD)的影响及SUA与体质量指数(body mass index,BMI)对BMD影响的交互作用。方法选取2020年1~12月于河北省人民医院体检中心进行年度体检的50岁及以上的2270名男性。采用双能X线骨密度仪测定非优势侧前臂桡骨远端1/3处BMD值,计算T值,根据T值分为骨量正常组、骨量减少组和骨质疏松组。SUA水平在正常范围者按四分位分为Q1~Q4组,高于正常范围者为Q5组。探讨各组SUA变化及与BMD的关系,分析骨量异常的影响因素,建立相乘和相加效应模型分析影响因素间的交互作用。结果骨质疏松组SUA水平低于骨量正常组和骨量减少组,Q1~Q5组BMD值、T值、骨量减少患病率、骨质疏松症患病率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。双变量相关性分析显示,BMD值、T值均与SUA呈正相关性(P<0.05)。有序多分类Logistic回归分析显示,年龄、收缩压(SBP)、患有高血压与骨量异常的风险呈正相关性,BMI、SUA与骨量异常的风险呈负相关性(P<0.05)。SUA与BMI对骨量影响存在相乘交互作用,不存在相加交互作用,RERI、AP和S的估计值(95%CI)分别为-0.114(-0.622,0.394)、-0.177(-0.980,0.627)和1.475(0.189,11.485)。结论在50岁以上的男性体检人群中,年龄、SBP、患有高血压是骨量异常的危险因素,BMI、SUA是骨量异常的保护因素。BMI与SUA之间存在相乘交互作用,不存在相加交互作用。

《关于软骨发育不全患者的诊断、多学科管理和终身护理的国际共识声明》要点解读

软骨发育不全是导致儿童生长发育障碍的一类罕见疾病,主要表现为骨骼发育不良及不成比例的身材矮小,可导致呼吸异常、听力受损、脊柱受累、四肢关节畸形等多种问题,从而使患者一生中面临各种治疗、康复等问题,极大地影响了患者的生活质量。然而目前软骨发育不全的临床治疗和护理路径并未完全统一,为了促进该病临床治疗方案的标准化,国际专家小组提出了《关于软骨发育不全患者的诊断、多学科管理和终身护理的国际共识声明》。本文就该共识针对患者整个生命周期的管理及可能涉及的临床问题的多学科管理进行了要点解读,以促进该病的规范化治疗、临床结局优化,提高患者生活质量,降低病死率。

齐墩果酸对2型糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制的研究

目的探讨齐墩果酸(OA)对T2DM大鼠肾脏保护作用及可能机制。方法35只SD大鼠随机选取25只构建T2DM大鼠模型,建模后剩余20只,分为T2DM组(n=6)、低剂量OA组(LOA,n=6)、高剂量OA组(HOA,n=8),另外10只为正常对照(NC)组。比较各组生化指标、24 h尿量及UAlb,油红O染色观察肾脏脂质沉积情况,Western blot法检测肾脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK和过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达。结果与NC组比较,T2DM组24 h尿量、FPG、TG、TC、LDL-C、血肌酐(Scr)、血尿酸(SUA)、24 hUAlb升高(P<0.05),体重、HDL-C、p-AMPK、PGC-1α蛋白表达降低(P<0.05)。与T2DM组比较,LOA、HOA组HDL-C、p-AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05),24 h尿量、FPG、TG、TC、LDL-C、Scr、SUA、24 hUAlb降低(P<0.05)。与LOA组比较,HOA组HDL-C、p-AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05),24 h尿量、FPG、TG、TC、LDL-C、Scr、SUA、24 hUAlb降低(P<0.05)。与NC组比较,T2DM组肾小管上皮细胞内可见大量红色染色的脂滴沉积。与T2DM组比较,LOA、HOA组脂滴沉积均减少,HOA组改善更显著。结论OA能减轻T2DM大鼠肾脏损伤,可能与激活AMPK/PGC-1α通路相关。

高频超声在自体动静脉内瘘并发症诊断及治疗中的应用价值

目的 探讨高频彩色多普勒超声在血液透析患者自体动静脉内瘘并发症诊断及临床治疗策略中的应用价值。方法 用高频彩色多普勒超声检查111例临床诊断动静脉内瘘功能不良的血液透析患者,通过高频超声观察桡动脉、头静脉及瘘口处的二维结构及血流特征,分析动静脉内瘘失功的原因。结果 在111例动静脉内瘘失功的患者中,发现狭窄50例(45.05%),其中头静脉狭窄34例,桡动脉狭窄8例,头静脉、桡动脉均存在狭窄1例;吻合口狭窄7例;血栓形成32例(28.83%),其中头静脉血栓20例(合并闭塞3例),瘘口处血栓9例,桡动脉血栓3例;狭窄合并血栓18例(16.21%);动脉瘤形成合并狭窄及血栓6例(5.41%),窃血综合征5例(4.50%),根据内瘘失功的时间及症状,结合超声报告,临床给予每位患者制定个性化治疗方案。结论 高频彩色多普勒超声在血液透析自体动静脉内瘘失功病因的诊断中具有重要的临床应用价值,能指导临床采取有效的治疗措施,挽救动静脉瘘功能,提高患者透析质量。

GKLF基因在胃癌组织和细胞株中的表达及与胃癌耐药的关系

目的:观察GKLF基因在胃癌组织和细胞株中的表达情况及与耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP-1)表达的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法、Real time-PCR和Western-blot检测胃癌组织和细胞株中GKLF、Pgp、MRP-1表达情况,分析GKLF蛋白表达与临床病理特征及P-gp、MRP-1蛋白表达的相关性。分别将携带GKLF基因的重组慢病毒颗粒或靶向GKLF基因的特异性siRNA转染耐药人胃癌细胞SGC7901/VCR。Real time-PCR和Western-blot检测过表达或敲低GKLF后P-gp变化。结果:胃癌组织GKLF蛋白阳性表达率及mRNA表达水平显著低于癌旁组织,P-gp、MRP-1蛋白阳性表达率及mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P <0. 05);且GKLF蛋白表达与TNM临床分期、淋巴结是否转移密切相关,并与P-gp、MRP-1蛋白表达具有负相关性(P <0. 05)。在多种胃癌细胞中均存在GKLF基因表达显著下调和P-gp、MRP-1基因表达上调,尤其在胃癌耐药SGC7901/VCR细胞表达变化更为显著(P <0. 05)。过表达GKLF后SGC7901/VCR细胞Pgp、MRP-1 mRNA和蛋白表达、存活率、穿膜数显著下调,而沉默GKLF后SGC7901/VCR细胞P-gp、MRP-1 mRNA和蛋白表达、存活率、穿膜数显著上调(P <0. 05)。结论:GKLF基因在胃癌组织和细胞系中表达下调,且与耐药相关基因P-gp、MRP-1表达具有负相关性。上调GKLF表达可能通过调控P-gp、MRP-1表达逆转胃癌对化疗药物的耐药性。

Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15、30μmol·L^(-1)组。MTT比色法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA);流式细胞仪检测细胞周期;荧光定量RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4、CDK5)、细胞周期抑制蛋白(p53、p21、p27)的表达。结果 Roscovitine能抑制VSMC增殖;抑制细胞周期从G_0/G_1期向S期转化。与TNF-α组比较,Roscovitine 5、10、15、30μmol·L^(-1)组能降低细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E蛋白表达,降低细胞周期蛋白依赖激酶CDK4、CDK5蛋白表达,升高细胞周期抑制蛋白p53、p21、p27蛋白表达(P<0.05)。结论 Roscovitine可抑制大鼠VSMC细胞周期进程及增殖活性。

罗格列酮对高脂喂养大鼠骨骼肌PGC-1α和GLUT4表达的影响

目的观察罗格列酮对高脂饮食喂养老年大鼠骨骼肌过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)表达的影响以及胰岛素敏感性的变化。方法 21~23月龄的老年Wistar大鼠被随机分为对照组、高脂组、高脂+罗格列酮干预组(干预组),每组20只,对照组给予基础饲料,高脂组给予高脂饲料,干预组在给予高脂饲料同时增加罗格列酮灌胃,3 mg·kg-1·d-1。检测喂养8周末3组血清三酰甘油、游离脂肪酸、骨骼肌三酰甘油水平、血糖相关指标[空腹血糖、空腹胰岛素、葡萄糖输注率]和体重。应用正常葡萄糖高胰岛素钳夹试验评估胰岛素敏感性,之后处死老鼠取材,检测其骨骼肌PGC-1α和GLUT4的mRNA及蛋白表达水平的变化。结果高脂喂养8周后,高脂组空腹血清三酰甘油、血清游离脂肪酸及骨骼肌中三酰甘油的检测结果与对照组比较明显升高,葡萄糖输注率明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高脂组比,干预组血清三酰甘油、血清游离脂肪酸及骨骼肌三酰甘油水平较明显下降(P<0.05),葡萄糖输注率比较对照组升高(P<0.05)。与对照组比较,高脂组骨骼肌PGC-1α和GLUT4的表达下降,干预组PGC-1α和GLUT4的表达均显著高于高脂组(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05)。结论高脂饮食能够诱导大鼠产生胰岛素抵抗状态,伴有PGC-1α及GLUT4在骨骼肌中表达下调,罗格列酮干预后可改善胰岛素抵抗状态,增加骨骼肌PGC-1α及GLUT4的表达。

重组人生长激素替代治疗对矮身材儿童非对称性二甲基精氨酸水平的影响

目的分析矮身材儿童重组人生长激素(rhGH)治疗前后血清非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平变化。方法选取生长激素缺乏症(GHD)或特发性身材矮小(ISS)的矮身材儿童63例,健康对照儿童27例为研究对象。观察矮身材儿童治疗前ADMA水平,身高标准差积分(HtSDS)、血脂、葡萄糖代谢参数、动脉硬化指数(Ai)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、定量胰岛素敏感性检测指数(QUICKI)等指标变化,并与rhGH治疗6个月和12个月以及健康儿童进行比较。结果GHD组30例、ISS组33例、对照组27例。治疗前GHD组LDL-C、ADMA高于对照组;GHD组、ISS组的Ai水平均高于对照组,而IGF-1水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。rhGH治疗6个月和12个月后,GHD和ISS患儿的HtSDS均较治疗前升高,IGF-1水平均高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。GHD患儿rhGH治疗12个月的TG水平低于治疗前及治疗6个月,治疗12个月血浆ADMA水平低于治疗前;ISS患儿治疗12个月的ADMA水平均低于治疗前和治疗6个月,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GHD患儿ADMA水平明显高于健康儿童,提示矮身材儿童尤其GHD患儿动脉硬化性心血管疾病的发生风险增加。rhGH替代治疗12个月可有效降低矮身材儿童ADMA水平、改善血脂谱,可能在一定程度上减轻动脉硬化性心血管疾病发生风险。

利拉鲁肽对糖尿病大鼠心肌损伤的改善作用研究

目的观察利拉鲁肽(LRG)能否通过调控NOD样受体家族3(NLRP3)炎性小体延缓2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌病变及其机制。方法按照体重将大鼠随机分为3组:正常组、模型组和实验组,每组10只。实验组皮下注射LRG 200μg·kg ^-1,正常组和模型组给予等剂量0.9%NaCl,1次/日,连续4周。以试剂盒法测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;计算心脏质量指数(HMI)、左心室质量指数(LVWI);以免疫印迹法测定心肌组织NLRP3和沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平(灰度值)。结果正常组、模型组和实验组CK分别为(370.85±38.73),(615.12±52.57)和(493.49±45.32)U·mL^-1;这3组的LDH分别为(686.12±63.05),(1161.60±154.05)和(885.53±109.62)U·L^-1;这3组的HMI分别为(2.22±0.25),(3.04±0.16)和(2.51±0.25)mg·g^-1;这3组的LVWI分别为(1.59±0.18),(2.24±0.16)和(1.85±0.26)mg·g^-1;这3组的NLRP3蛋白表达分别为0.31±0.05,0.81±0.05和0.55±0.11;这3组的SIRT1蛋白表达分别为0.70±0.10,0.21±0.03和0.49±0.05;上述指标:模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 LRG能够延缓T2DM心肌病变,其机制可能与激活SIRT1从而抑制NLRP3炎性小体的活化及减轻心肌炎性损伤有关。

氧化苦参碱对高脂饮食诱导胰岛素抵抗载质蛋白E基因敲除小鼠肝脏三酰甘油代谢酶的影响

目的探讨氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠肝脏三酰甘油代谢酶的影响。方法72只ApoE-/-小鼠高脂喂养16周，随机分为模型组，氧化苦参碱25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组，灌胃8周，C57BL/6J小鼠设为对照组。测定血清生化指标，高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验评价胰岛素抵抗，苏木素伊红（HE）染色观察肝脏病理变化，实时荧光定量聚合酶链反应（QRT-PCR）和免疫印迹分析（Western blot）检测肝组织三酰甘油代谢酶基因表达。结果氧化苦参碱能不同程度降低小鼠体重、血糖、三酰甘油、胆固醇，减轻肝脏病理变化；氧化苦参碱25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组葡萄糖输注率（18.5±1.6）mU·kg-1·min^-1、（20.1±1.8）mU·kg-1·min^-1、（21.3±2.3）mU·kg-1·min^-1，高于模型组（16.5±1.6）mU·kg-1·min^-1（P〈0.05）。与模型组比较，氧化苦参碱组肝脏激素敏感性脂肪酶（HSL）、脂肪三酰甘油酶（ATGL）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）mRNA表达均升高，二酯酰甘油酰基转移酶基因（DGAT1）mRNA表达下降（F＝53.81、21.06、23.67、35.37，均P〈0.05），氧化苦参碱50 mg/kg、100 mg/kg组HSL、ATGL、PPARγ蛋白表达升高，DGAT1蛋白表达下降（F＝53.62、22.87、28.13、33.54，均P〈0.05）。结论氧化苦参碱能改善高脂诱导小鼠的胰岛素抵抗，与调节肝脏三酰甘油代谢酶有关。

利拉鲁肽对高糖诱导的H9c2心肌细胞焦亡的保护作用

目的研究利拉鲁肽(LRG)对高糖诱导的H9c2心肌细胞焦亡的保护作用和机制。方法分别用不同剂量的LRG和高糖处理细胞48 h,挑选出LRG最佳干预剂量。将H9c2细胞分为6组:对照组、高糖组和低、中、高剂量LRG(LRG-L、LRG-M、LRG-H)组、LRG-H+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率;用流式细胞术检测细胞焦亡情况;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症体相关基因表达;用蛋白质印迹法检测NLRP3炎症体、自噬、沉默信息调节因子1/腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Sirt1/AMPK/mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果对照组、高糖组、LRG-L组、LRG-M组、LRG-H组、LRG-H+3-MA组细胞焦亡率分别为(1.62±0.74)%、(15.30±0.98)%、(12.68±0.66)%、(9.70±0.67)%、(7.24±0.83)%、(13.66±0.70)%;IL-1β水平分别为(22.33±4.76)、(74.51±5.56)、(61.33±6.00)、(48.94±4.20)、(37.62±4.03)、(64.10±6.07)ng·L^(-1);NLRP3蛋白表达量分别为1.01±0.11、6.44±0.48、5.31±0.21、4.16±0.20、3.18±0.46、5.26±0.43;Beclin-1蛋白表达量分别为1.01±0.11、0.25±0.04、0.44±0.03、0.63±0.03、0.84±0.08、0.40±0.07。上述指标,高糖组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);LRG-L组、LRG-M组、LRG-H组与高糖组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);LRG-H+3-MA组和LRG-H组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。LRG各剂量组Sirt1、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论LRG通过调控Sirt1/AMPK/mTOR信号通路增强细胞自噬,抑制NLRP3炎症体活化,从而减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应

研究苦参碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)炎症反应的影响,探讨其机制是否与miR-25-3p介导Krüppel样转录因子4(Krüppel like transcription factor 4,Klf4)途径有关。以TNF-α诱导建立HUVECs炎症模型。不同浓度苦参碱(0.625、1.25、2.5 mmol·L^(-1))作用24、48 h后,CCK-8方法检测细胞增殖。2.5 mmol·L^(-1)苦参碱处理48 h后采用实时荧光定量PCR检测TNF-α、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、Klf4 mRNA表达和miR-25-3p表达,免疫印迹法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4蛋白表达。转染anti-miR-25-3p至HUVECs,上述方法检测miR-25-3p对TNF-α诱导的细胞增殖及相关炎症因子的表达。进一步转染miR-25-3p至细胞,与苦参碱共同孵育,检测增殖及炎症因子、miR-25-3p和Klf4表达的变化。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与Klf4靶向关系。结果显示,苦参碱能抑制TNF-α诱导的HUVECs增殖,降低TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA和蛋白表达,提高Klf4 mRNA和蛋白表达、降低miR-25-3p表达;生物信息学分析显示,miR-25-3p与Klf4的序列存在特异性互补结合位点,双荧光素酶活性报告实验证实miR-25-3p在HUVECs中靶向负调控Klf4表达;抑制miR-25-3p表达可降低TNF-α诱导的细胞增殖、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA和蛋白表达;过表达miR-25-3p能够逆转苦参碱对TNF-α诱导的细胞增殖及TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4 mRNA和蛋白表达的作用。实验结果表明苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的HUVECs炎症反应。