白细胞介素24基因抑制体内胶质瘤生长的机制研究

目的:探讨人白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因抑制胶质瘤生长的作用机制。方法:建立人胶质瘤裸鼠动物模型,瘤内注射含有IL-24基因的重组腺病毒Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,Western印迹法检测肿瘤组织中IL-24、双链RNA激活的蛋白激酶(double-stranded RNA activated protein kinase,PKR)、p-PKR、p38-MAPK和p-p38-MAPK蛋白的表达情况。结果:Ad5F35-IL24重组腺病毒感染裸鼠胶质瘤组织后,IL-24蛋白呈现高表达,胶质瘤的生长受到明显抑制(P<0.01);TUNEL法检测发现肿瘤细胞凋亡率明显升高(P<0.05);Western印迹法检测发现Ad5F35-IL24感染后PKR和p38-MAPK的蛋白表达及其磷酸化均较对照组显著升高(P<0.01)。结论:IL-24具有抑制胶质瘤生长和诱导其细胞凋亡的作用,其机制与上调并激活PKR和p38-MAPK蛋白途径有关。

白介素-24抑制胶质瘤细胞生长的体内外实验研究

目的探讨白介素-24基因转染对胶质瘤生长的影响。方法将载有人白介素-24cDNA的新型重组腺病毒(Ad5F35-IL24)感染人胶质瘤细胞系U251,体外观察Ad5F35-IL24对该细胞系生长的影响;建立人胶质瘤动物模型,瘤内注射Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况;用流式细胞仪检测其凋亡和Bax/Bcl-2的表达情况。结果Ad5F35-IL24感染U251细胞和肿瘤组织后,IL-24蛋白高表达,U251细胞和组织的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,Bax/Bcl-2也明显升高。结论白介素-24具有抑制人胶质瘤细胞系U251生长和诱导凋亡作用。Ad5F35-IL24转导白介素-24基因可能是一种有效的胶质瘤基因治疗途径。

白细胞介素24抑制人卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨IL-24抑制人卵巢癌细胞增殖的可能机制。方法:用载有人白介素24cDNA的新型重组腺病毒(Ad5F35-IL24)及对照病毒Ad5F35-EGFP感染人卵巢癌细胞HO8910,用蛋白质印迹方法检测IL-24的表达水平,用MTT法和台盼蓝染色观察Ad5F35-IL24对该细胞系生长的影响;用流式细胞仪检测其凋亡和促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。结果:Ad5F35-IL24感染HO8910细胞后IL-24蛋白高表达,HO8910细胞的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,Bax明显升高,Bcl-2明显降低。结论:白介素24具有抑制人卵巢癌细胞系HO8910增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡作用又与促凋亡蛋白的升高和抗凋亡蛋白的降低有关。

白细胞介素24和替尼泊苷联合抑制裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的机制研究

目的观察白细胞介素24(IL-24)与替尼泊苷(VM-26)对裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用是否相互协同增效。方法先建立人胶质瘤动物模型,随机分组,瘤内注射Ad5F35-IL-24,腹腔注射VM-26,观察肿瘤生长情况;再用Western blot分析IL-24蛋白表达情况。接着用免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织的血管密度(MVD)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果 Ad5F35-IL-24感染胶质瘤组织后IL-24蛋白高表达,Ad5F35-IL-24+VM-26组的胶质瘤的生长受到抑制最明显,Ad5F35-IL-24+VM-26组的微血管生成明显减少(P<0.05),且其VEGF和bFGF表达也明显减少(P<0.05)。结论 IL-24和VM-26对裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用相互协同增效,其机制可能与IL-24诱导胶质瘤组织中VEGF和bFGF表达的减少,抑制胶质瘤微血管生成有关。

循环微小RNA与乳腺癌的研究进展

微小RNA(miRNAs)是一类内源性非编码单链微小RNA,参与细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程。近年来研究发现miRNAs可由细胞内释放到细胞外液,如血清、血浆、组织液及各类体液中,即循环miRNAs。在疾病状态下如乳腺癌,循环miRNAs表达谱发生改变,良好的稳定性及疾病相关性使得miRNAs成为肿瘤等疾病的非创伤性新型生物标志物,是肿瘤诊断与防治的研究热点。现就循环miRNAs与乳腺癌的相关研究进展做一综述。

调节性T细胞在慢性冠状动脉综合征患者残余炎症风险中的意义

目的:探讨合并残余炎症风险的慢性冠状动脉综合征患者调节性T细胞的表达及临床意义。方法:选取确诊慢性冠状动脉综合征的患者,且LDL-C水平已达治疗目标,根据hsCRP水平筛选并分为血清hsCRP正常组(0~2 mg/L)及hsCRP升高组(≥2 mg/L);检测两组患者外周血调节性T细胞及炎症标志物水平,并进行差异及相关性分析。结果:相比于hsCRP正常组,hsCRP升高组外周血调节性T细胞及抗炎细胞因子表达显著降低,致炎细胞因子表达显著升高(P<0.05);受试者血清hsCRP与调节性T细胞表达、炎症标志物明显相关(P<0.05)。结论:调节性T细胞可能参与慢性冠状动脉综合征患者残余炎症形成。

肾阳虚大鼠下丘脑神经元型NOS mRNA表达及补肾药的调整作用

目的 :研究补肾中药对肾阳虚大鼠下丘脑组织中NO cAMP信号传导系统的影响 ,以探讨肾阳虚的发病机制。方法 :用醋酸可的松肌肉注射法建立大鼠肾阳虚模型 ,采用放射免疫分析法测定cGMP含量 ,用反转录PCR半定量法测定nNOSmRNA水平 ,观察补肾药复方对肾阳虚大鼠血清NO水平及下丘脑组织中NO、NOS活性 ,nNOSmRNA水平和cGMP水平的影响。结果 :肾阳虚大鼠血清和下丘脑组织NO水平较对照组分别增加 175%和 2 2 3% ,下丘脑组织NOS活性升高 ,nNOS表达增强 ,血清和下丘脑组织cGMP水平升高。补肾药对上述指标有不同程度的下调。肾阳虚证时下丘脑NOS cGMP信号传导系统作用增强 ,补肾药对其具有调整作用。结论 :实验结果揭示NO cAMP系统在肾阳虚证发病机制中起一定作用 。

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脑组织HO-1 mRNA表达

目的 :探讨脑组织血红素氧合酶 1(HO- 1)在实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)发病中的作用及可能的信号转导机制。 方法 :健康成年雌性 Wistar大鼠 78只 ,随机分为 3组 (n=2 6 ) :对照组 ,不做任何处理 ;EAE组 ,应用豚鼠脊髓匀浆 -完全弗氏佐剂诱导大鼠 EAE模型 ;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)组 ,EAE模型诱导前 1h腹腔注射 NF- κB特异性抑制剂PDTC10 0 mg/ kg,以后 1次 / d,连续 7d。诱导后 1、7、14、2 1d以 RT- PCR法测定 EAE大鼠脑组织中 HO- 1m RNA表达的动态变化 ,并观察其与症状之间的关系。结果 :对照组大鼠脑组织仅有少量 HO- 1m RNA表达 (0 .2 7± 0 .0 5 ) ;诱导 EAE后 ,随着大鼠 EAE症状的出现和加重 ,脑组织 HO- 1m RNA水平逐渐升高 ;在发病潜伏期 (免疫后 7d)达高峰 (1.11± 0 .12 ) ;发病期(免疫后 14 d)保持较高水平 (1.0 6± 0 .18) ;恢复期 (免疫后 2 1d)逐渐下降 (0 .37± 0 .10 ) ,大鼠 EAE症状也逐渐恢复。应用NF- κB特异性抑制剂 PDTC后 ,大鼠 EAE症状明显减轻 ,脑组织 HO- 1m RNA水平显著下降 ,显示脑组织 HO- 1m RNA的动态变化与 EAE病情密切相关 ;NF- κB特异性抑制剂可以调节 HO- 1m RNA表达水平。 结论 :脑组织 HO- 1m RNA表达在EAE发病中起着重要的作用 ,应用 NF-

通心络对急性冠脉综合征患者预后及内皮功能的影响

目的研究中成药通心络对急性冠脉综合征(ACS)患者血管内皮功能及心血管事件的影响。方法将120例经冠脉造影证实为冠脉狭窄超过50%的ACS患者随机分为对照组和试验组各60例。对照组给予降压、降糖、调脂、抗血小板、抗凝、改善心肌供血等治疗,试验组在此基础上加用中成药通心络。治疗前及治疗后6、12个月,分别利用高分辨率超声测定肱动脉血流介导的内皮依赖性舒张功能(FMD)、血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)及其比值、总一氧化氮合酶(TNOS)以及血脂的变化,同时观察两组患者因不稳定型心绞痛住院、急性心肌梗死、血管重建、死亡等事件发生情况。结果(1)试验组和对照组患者12个月内因不稳定型心绞痛的住院率间差别有显著性意义(P<0.05)。(2)6个月及12个月时试验组患者的FMD、NO水平与对照组间差别均有显著性意义(P<0.05),ET水平间差别无显著性意义(P>0.05)。6个月时试验组患者NO/ET水平与对照组间差别有显著性意义(P<0.05);12个月时试验组患者TNOS水平与对照组间差别有显著性意义(P<0.05)。(3)6个月时患者的FMD与NO呈正相关(P<0.01),12个月时NO与TNOS呈正相关(P<0.01)。结论通心络可显著减少ACS患者因不稳定型心绞痛的住院率;在常规治疗冠心病的基础上,加服通心络可进一步改善肱动脉血流介导的内皮舒张功能,提高血一氧化氮的浓度、降低内皮素浓度,提高NO/ET比值;通心络改善内皮功能与用药后TNOS增高,促进NO合成有关。

中药对大鼠中毒性肝纤维化ALR表达丰度的影响

目的 :从分子水平检测中药预防肝纤维化的作用及机理。方法 :利用CCl4复合因素对SD大鼠制造肝纤维化模型 ,然后用中药灌胃进行预防 ,检测其生化指标、肝纤维化指标、病理情况以及肝组织中AL RmRNA表达量。结果 :HA、PCⅢ、LN、PLD的升降与病理组织切片反映的肝纤维化程度相一致 ,在肝纤维化形成的同时给予中药预防 ,ALRmRNA的表达增强。结论 :联合检测生化、肝纤维化指标 ,可提高肝纤维化早期诊断 ;通过促进ALR的表达可延缓或减轻肝硬化的发生。

PM2.5暴露与老年急性心肌梗死患者调节性T细胞的相关性

目的探讨PM2.5与老年急性心肌梗死患者调节性T细胞(Treg)表达的相关性。方法入选100例老年急性心肌梗死患者,根据PM2.5浓度分为:优良组(0~75μg/m^(3)污染指数)、轻度组(76~115μg/m^(3)污染指数)、中度组(116~150μg/m^(3)污染指数)、重度组(>150μg/m^(3)污染指数)。流式细胞术检测各组外周血Treg的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β1、干扰素(IFN)-γ水平。结果各组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平差异无统计学意义(P>0.05),重度组肌钙蛋白(cTn)T、肌酸激酶同工酶(CKMB)水平显著高于优良组(P<0.05),重度组peak-CKMB水平显著高于优良组和轻度组(P<0.05)。各组CD4^(+)T细胞和CD4^(+)CD25^(+)T细胞水平差异无统计学意义(P>0.05)。优良组、轻度组、中度组CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg占CD4^(+)CD25^(+)T细胞的比例差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于重度组(P<0.05)。中、重度组IFN-γ水平显著高于优良组及轻度组(P<0.05);重度组IL-10、TGF-β1水平显著低于优良组(P<0.05)。结论PM2.5重度污染可能导致老年急性心肌梗死患者Treg的表达降低。

津力达对胰岛素抵抗大鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨津力达改善大鼠胰岛素敏感性的分子作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为正常组和高脂饮食组,分别予以普通饲料及高脂饲料喂养。喂养后6周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验,鉴定胰岛素抵抗大鼠造模成功。随后将高脂喂养组分为5组,分别为模型组、津力达低、中、高剂量组(0.75,1.5,3.0 g·kg-1)和二甲双胍组(0.2 g·kg-1)。药物干预8周后行钳夹实验和ip葡萄糖耐量实验,并留取大鼠血清,测定空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS),糖化血红蛋白(Hb A1c),葡萄糖输注率(GIR),甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)水平;并留取大鼠肝脏标本,RT-PCR检测肝脏胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),蛋白激酶B(AKT),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达水平,Western blot检测IRS-1和AKT的总蛋白及磷酸化蛋白表达水平,并计算p-AKT/AKT和p-IRS-1/IRS-1。结果:与正常组比较,模型组FBG,FINS,Hb A1c,TC及VLDL-C水平明显升高(P<0.05),INSR,IRS-1,PI3K,AKT和GLUT2 mRNA表达下降,HDL-C,GIR含量明显降低(P<0.05),p-IRS-1/IRS-1明显升高,p-AKT/AKT明显降低(P<0.05);与模型组比较,津力达干预后,大鼠葡萄糖输注率明显升高,FBG,FINS,Hb A1c,TG,TC,LDL-C及VLDL-C水平明显降低(P<0.05),对HDL-C无明显影响,津力达明显上调肝脏INS,IRS-1,AKT和GLUT2 mRNA表达(P<0.05),升高GIR含量,对PI3K无显著影响;津力达干预组p-IRS-1/IRS-1明显降低,p-AKT/AKT明显升高(P<0.05)。结论:津力达可改善胰岛素抵抗,纠正糖脂代谢紊乱,可能与上调PI3K/AKT信号通路有关。

中药津力达对高脂喂养大鼠肝脏氧化应激及JNK、p38MAPK通路的影响

目的:研究中药津力达对高脂喂养的大鼠肝脏氧化应激及JNK、p38MAPK通路的影响。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组和高脂喂养组,分别予以普通饲料和高脂饲料喂养。造模6周后将高脂喂养组随机分为高脂组、津力达低、中、高剂量组和二甲双胍组,干预8周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验,试剂盒测定肝脏氧化应激标志物含量,DHE染色观察肝细胞ROS含量,Western blot检测JNK和p38MAPK的总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。结果:与高脂组相比,津力达干预后大鼠葡萄糖输注率显著升高(P<0.05);肝脏氧化应激水平降低,LPO含量降低(P<0.05),ROS生成减少,GSH水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px、CAT活性增强(P<0.05);且津力达各剂量组p-JNK/JNK和p-p38MAPK/MAPK显著降低(P<0.05)。结论:津力达可改善高脂喂养大鼠的胰岛素敏感性,减轻肝脏氧化应激,可能与抑制JNK及p38MAPK信号通路有关。

硫化氢对脂多糖致ALI大鼠肺组织线粒体的影响

目的观察硫化氢（H2S）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织线粒体超微结构及功能的影响。方法40只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS损伤组及低、中、高剂量NaHS组，每组8只。LPS损伤组经舌下静脉注射LPS5mg／kg，低、中、高剂量NaHS组注射LPS3h后腹腔注射0．78、1．56和3．12mg／kgNaHS2mL／kg，对照组经舌下静脉注射2mL／kg生理盐水。制模后6h处死大鼠取肺组织，采用低温差速离心法提取肺组织线粒体，透射电镜下观察线粒体超微结构改变；采用硫代巴比妥酸法测定线粒体丙二醛（MDA）含量；采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性；应用全波长酶标仪测定线粒体活性和肿胀度。结果透射电镜下显示，对照组线粒体结构基本正常；LPS损伤组线粒体明显肿胀，嵴数量减少或消失，板层小体结构融合或消失，粗面内质网脱颗粒现象明显；低剂量NaHS组线粒体超微结构损伤程度减轻，中、高剂量NaHS组则明显减轻。与对照组比较，LPS损伤组线粒体MDA含量明显升高（nmol／mg：26．30±1．45比11．16±1．20），SOD、GSH—Px和ATP酶活性明显降低[SOD（U／mg）：18．78±1．13比27．44±1．97，GSH—Px（U／nag）：63．91±1．99比128．15±3．47，ATP酶（U／mg）：4．83±0．25比9．92±0．65]；线粒体活性明显降低（A值：0．164±0．025比0．319±0．045），线粒体肿胀度明显升高（A值：0．182±0．012比0．273±0．023），差异有统计学意义（均P〈0．01）。与LPS损伤组比较，低、中、高剂量NaHS组线粒体MDA含量明显降低（nmol／mg：21．89±1．23、17．63±1．56、12．19±1．30比26．30±1．45），SOD、GSH—Px和ArrP酶活性明显升高[SOD（U／rag）：20．13±0．85、21．38±1．22、24．05±1．56比18．78±1．13，GSH—Px（U／rag）：82．06±1．65、101．45±2．14、117．80±2．12比63．91±1．99，ATP酶（U／mg）：5．34±0．23、7．06±0．37、8．78±0．44比4．83±0．25]；线粒体活性明显升高（A值：0．194±0．018、0．230±0．032、0．297±0．038比0．164±0．025），而线粒体肿胀度明显降低（A值：0．195±0．008、0．219±0．017、0．249±0．018比0．182±0．012），差异均有统计学意义（均P〈0．05）；且NaHS的保护作用呈剂量依赖性。结论LPS致ALI大鼠肺组织线粒体结构损伤、功能减弱；H2S可能通过降低LPS诱导的肺组织线粒体氧化损伤，从而保护线粒体结构和功能，并存在一定的量效关系。