异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤后细胞凋亡及其机制研究

目的:观察异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响并从氧化应激和线粒体介导的凋亡方面探讨其作用机制。方法:应用Langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血/再灌注损伤模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注模型(I/R)组、异丙酚15、30、60μmol.L-1组。除正常对照组外,各组分别平衡灌注20 min后,常温全心停灌25 min,再灌注30 min。Powerlab/8s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30 min时的各项心功能指标并测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性;检测心肌线粒体活力、膜肿胀度、锰超氧化物岐化酶(Mn-SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;流式细胞术检测Bcl-2和Bax的表达,免疫组化法测定天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3,9,8蛋白的表达。结果:与I/R组相比,异丙酚30、60μmol.L-1能明显改善缺血/再灌注后的心功能,减弱冠脉流出液中LDH、CK的活性(P<0.05);心肌线粒体活力有所恢复,膜肿胀度减轻,Mn-SOD活性升高,MDA生成明显减少(P<0.05),心肌细胞凋亡明显减少,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,caspase-3,9阳性表达细胞数明显减少(P<0.05)。结论:异丙酚明显减轻缺血/再灌注所致的心肌线粒体的过氧化损伤,抑制线粒体途径的凋亡,可能是其心肌保护作用机制之一。

复方消经痛胶囊质量标准研究

目的 :建立复方消经痛胶囊 (黄芪、人参、当归、川芎等 )的质量标准。方法 :建立人参、当归、川芎的薄层鉴别方法和黄芪甲苷的TLC含量测定方法。采用单波长反射法锯齿扫描 ,测定波长为 5 30nm。结果 :在TCL色谱中能检出人参、当归、川芎 ,阴性对照无干扰。黄芪甲苷的线性范围为 1.1～ 5 .5 μg(r =0 .9983) ,平均回收率为 10 0 .1% ,RSD =1.5 9% (n=6 )。结论 :定性、定量方法简便 ,准确 ,专属性强 ,重现性好 。

参附注射液质控指标的研究——人参总皂甙的含量测定

本文报道了采用薄层层析——比色法测定参附注射液中有效成分——人参总皂甙含量的条件及如何排除影响因素。并以拟定的方法测定和比较了不同原料、不同工艺和不同批号的九批人参及其复方制剂总皂甙的含量。

氨基胍对内毒素性肺损伤细胞凋亡的影响

目的观察选择性一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)对大鼠内毒素性肺损伤(ALI)细胞凋亡的影响,探讨AG对肺损伤组织的保护作用及其机制。方法健康♂SD大鼠,随机分为:①对照组;②模型组(LPS组);③AG治疗组。其中LPS组和AG治疗组按治疗时间又分为给LPS3h后治疗3h(3h+3h)组和给LPS6h后治疗3h(6h+3h)组,AG治疗组分别于给LPS3h和6h后给AG(100mg·kg-1),ip给药,LPS组给等量的生理盐水;(3h+3h)组于注射LPS6h后处死大鼠;(6h+3h)组于注射LPS9h后处死大鼠,每组8只动物。模型组、AG治疗组iv注射LPS复制内毒素性肺损伤大鼠模型,对照组给等量生理盐水。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中NOSmRNA表达变化;电镜、流式细胞术(FCM)检测肺细胞凋亡率;Westernblot法检测Caspase-3蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达;光镜、电镜观察肺组织病理变化。结果与对照组比较,大鼠肺损伤后,iNOSmRNA表达增强,eNOSmRNA表达减弱,nNOSmRNA表达没有明显变化;细胞凋亡率、Caspase3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax降低;肺损伤3h用AG治疗3h后,iNOSmRNA表达、细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达低于对照组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于对照组,肺组织病理改变减轻;肺损伤6h用AG治疗3h后,治疗效果较差。结论AG在较早时候给药可减轻内毒素性肺损伤,可能与减弱iNOSmRNA和Caspase-3表达、增强Bcl-2蛋白表达、减弱Bax蛋白表达、调节Bcl-2蛋白/Bax蛋白平衡有关。

异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响并从氧化应激和线粒体介导的凋亡方面探讨其作用机制。方法应用langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血/再灌注损伤模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注模型(I/R)组、异丙酚15、30、60μmol.L-1组。除正常对照外,各组分别平衡灌注20min后,常温全心停灌25min,再灌注30min。Powerlab/8s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30min时的各项心功能指标并测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)活性;检测心肌线粒体活力、膜肿胀度、锰超氧化物岐化酶活性(Mn-SOD)和丙二醛(MDA)含量;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;流式细胞术检测Bcl-2和Bax的表达,免疫组化法测定天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,9,8蛋白的表达。结果与I/R组相比,异丙酚30、60μmol.L-1能明显改善缺血/再灌后的心功能,减弱冠脉流出液中LDH、CK的活性(P<0.05);心肌线粒体活力有所恢复,膜肿胀度减轻,升高Mn-SOD活性,MDA生成明显减少(P<0.05),心肌细胞凋亡明显减少,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Caspase-3,9阳性表达细胞数明显减少(P<0.05)。结论异丙酚明显减轻缺血/再灌所致的心肌线粒体的过氧化损伤,抑制线粒体途径的凋亡,可能是其心肌保护作用机制之一。

氨基胍对局灶性脑缺血大鼠线粒体损伤的影响

目的观察选择性诱生型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对局灶性脑缺血大鼠脑线粒体损伤的作用,探讨其改善缺血性脑损伤的作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、AG治疗组,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分别于缺血后2、6、12h给药治疗3d,迅速断头取脑,差速离心法提取缺血侧脑组织线粒体,测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性,以及线粒体一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量;电镜观察了缺血后皮层神经元超微结构的改变及AG对此改变的影响。结果在大鼠MCAO后线粒体NO生成明显增加,线粒体总ATP酶、SOD、GSHPx活性均有明显下降,线粒体MDA含量明显升高;缺血2、6、12h给予AG治疗3d与缺血对照组相比NO生成有所下降,总ATP酶、SOD、GSHPx活性均升高,MDA含量下降。电镜结果显示脑缺血后皮层神经元水肿,线粒体肿胀、嵴断裂、溶解、消失,且随缺血时间延长损伤加重;AG能明显改善脑缺血引起的神经元水肿、线粒体肿胀和空泡化。结论AG能明显抑制脑缺血后线粒体NO生成,改善线粒体能量供应,增加线粒体抗氧化作用,从而减轻脑缺血损伤。

异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤时NF-κB活化和细胞凋亡的影响

目的:观察异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注时核因子-κB(NF-κB)的活化和细胞凋亡的影响,以探讨异丙酚的心肌保护作用机制。方法:采用阻断大鼠左冠状动脉前降支30min,再灌注2h心肌缺血/再灌注损伤模型。60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)和异丙酚3、6、12mg/(kg.h)组。光、电镜观察心肌组织的形态学变化。免疫组化染色分析心肌组织中NF-κB的核移位,Western blot检测心肌组织NF-κB和caspase-3的表达。原位末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。结果:I/R组心肌纤维排列紊乱,心肌细胞水肿;线粒体膜肿胀,嵴排列紊乱甚至溶解消失。与I/R组相比,6,12mg/(kg·h)组异丙酚组心肌损伤明显减轻。与Sham组相比,I/R组NF-κB活化,明显从细胞浆移位于细胞核,表达量也显著增加(P<0.05);心肌caspase-3表达增强(P<0.01),心肌细胞凋亡指数升高(P<0.05)。而异丙酚6mg/(kg·h)、12mg/(kg·h)组,NF-κB从细胞浆向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量也明显低于I/R组(P均<0.05);心肌caspase-3表达减弱,心肌细胞凋亡指数减少(与I/R组相比,P<0.05)。结论:异丙酚的心肌保护作用可能与其抑制NF-κB的活化,下调caspase-3的表达,从而抑制心肌细胞凋亡有关。

黄芪和白芍复方制剂干预痛经模型鼠后血液流变学指标变化

目的:观察黄芪和白芍复方制剂治疗痛经的效果,分析其药理作用。方法:实验于2002-01/2003-12在河北省医学科学院药物研究室完成。选用雌性SD大鼠110只,雌性昆明种小鼠50只。实验共分3个层次:①实验1:选用雌性大鼠50只,随机分为5组:痛经模型组,田七痛经胶囊组,黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组,每组10只。实验前大鼠背部皮下注射己烯雌酚4d。在注射己烯雌酚的当天开始给药。田七痛经胶囊组按1.6g/kg剂量灌胃田七痛经胶囊混悬液[主要成分为三七、延胡索、小茴香等,广州敬修堂(药业)股份有限公司生产,批号:01220619,0.4g/粒],黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组按1.6,0.8,0.4g/kg剂量灌胃黄芪和白芍复方制剂混悬液(由黄芪、白芍、益母草、熟地、当归等9味中药组成,由河北省医学科学院药物研究室研制,批号:200207102,0.5g/粒,胶囊内容物为棕黑色粉末,每克相当于原生药5.74g。实验时将黄芪和白芍复方制剂内容物置于乳钵中研细加水研匀,制成不同浓度的混悬液),痛经模型组灌胃等容积生理盐水。注射己烯雌酚第4天及给药后1h,每只大鼠腹腔注射催产素2U,观察30min内引起扭体反应次,而后用放免法测定血浆β-内啡肽水平。②实验2:将雌性小鼠50只随机分为5组:痛经模型组,田七痛经胶囊组,黄芪和白芍复方制剂高、中、低3个剂量组,每组10只。小鼠皮下注射己烯雌酚混悬液,连续9d,从第10天起,每天上午皮下注射己烯雌酚,下午灌胃给药,田七痛经胶囊组按2.0g/kg剂量灌胃田七痛经胶囊混悬液,黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组按2.0,1.0,0.5g/kg剂量灌胃黄芪和白芍复方制剂混悬液,痛经模型组灌胃等容积生理盐水。连续3d,于末次给药后30min腹腔注射催产素,记录注射后30min内扭体反应次数。③实验3:将其余健康雌性大鼠60只随机分为6组:对照组[灌胃等容量自来水灌胃20mL/(kg·d)],血瘀模型组[蒸馏水灌胃20mL/(kg·d)],复方丹参片组[灌胃复方丹参片(主要成分为丹参、三七、冰片,石家庄神威药业股份有限公司生产,批号:034070,0.25g/片)混悬液含生药4g/(kg·d)],黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组[按1.6,0.8,0.4g/kg剂量灌胃黄芪和白芍复方制剂混悬液20mL/(kg·d)],每组10只。每组均连续7d。第8天对照组皮下注射生理盐水,其他各组均皮下注射盐酸肾上腺素(8μg/kg)2次,2次间隔2h,第2次给药后立即将动物置冰水中5min,处置后24h。采用锥板旋转法测定全血黏度和全血还原黏度,利用上述参数计算红细胞指数。④计量资料差异比较采用t检验。结果:复方丹参片组及黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组进行血液流变学指标检测时采血失败分别为1,1,2,2只,进入结果分析分别为9,9,8,8只,其余各组无脱失值。①实验1:田七痛经胶囊组和黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组大鼠30min扭体次数明显少于痛经模型组(P<0.05～0.01)。黄芪和白芍复方制剂高剂量组大鼠血浆中β-内啡肽水平明显高于痛经模型组(P<0.05)。②实验2:黄芪和白芍复方制剂对痛经小鼠模型30min扭体次数的影响田七痛经胶囊组和黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组催产素所致小鼠30min扭体次数明显少于痛经模型组(P<0.05～0.01)。③实验3:黄芪和白芍复方制剂高、中、低剂量组和复方丹参片组全血黏度均明显低于血瘀模型组(P<0.05～0.01);复方丹参片组和黄芪和白芍复方制剂中剂量组红细胞阳性指数明显低于模型组(P<0.01,0.05)。结论:①黄芪和白芍复方制剂对痛经有治疗作用,其作用发挥可能与改善体内内源性疼痛物质β-内啡肽含量有关。②黄芪和白芍复方制剂还可通过改善血液流变学指标,起到活血化瘀作用,从而治疗痛经。

丙泊酚通过抑制线粒体途径的细胞凋亡保护心肌缺血再灌注损伤(英文)

目的观察丙泊酚对离体大鼠心肌缺血再灌注(I-R)损伤的影响,并从线粒体过氧化损伤方面探讨其可能的作用机制。方法应用Langendorff离体心脏灌流系统,全心停灌25 min,再灌注30 min建立心肌I-R损伤模型。记录各项心功能指标;测定心肌线粒体呼吸链的完整性、膜肿胀度和丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达,免疫组化法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,-9和-8的表达。结果与I-R组相比,缺血前10 min开始,并于再灌注期间持续灌流丙泊酚30和60μmol·L^(-1)能明显改善I- R后的心功能;心肌线粒体呼吸链损伤有所恢复,膜肿胀度减轻,MDA生成明显减少,心肌细胞凋亡率明显降低,Bcl-2表达增加,Bax表达减少,caspase-3和caspase-9阳性细胞数明显减少。结论丙泊酚减轻I-R所致的心肌线粒体过氧化损伤,抑制线粒体途径的细胞凋亡。

异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤时核因子-κB信号途径的影响

目的观察异丙酚对大鼠在体心肌缺血/再灌注时核因子-κB(NF-κB)信号途径的影响,以探讨异丙酚的心肌保护作用机制。方法阻断大鼠左冠状动脉前降支30min,再灌注2h引起心肌缺血/再灌注损伤。60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)和异丙酚3、6、12mg·kg-1·h-1组。分别于缺血前、缺血30min末、再灌注2h末记录心率、平均动脉压,并计算心率-血压指数。ELISA及放射免疫法分别测定血清、心肌中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的含量。分别用原位杂交法(ISH)和半定量RT-PCR法检测心肌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、粘附分子1(ICAM-1)的mRNA的表达。免疫组化染色分析心肌组织中NF-κB的核移位,Western blot检测心肌组织NF-κB的表达量。结果缺血/再灌注后各组大鼠的平均动脉压、血压-心率指数均呈进行性下降(与Sham组相比P<0.05)。异丙酚12mg·kg-1·h-1组在缺血/再灌注后的平均动脉压和血压-心率指数明显高于I/R组(P<0.05)。与Sham组相比,I/R组NF-κB活化,明显从细胞质移位于细胞核,表达量也增加(P<0.05);血清、心肌中TNF-α、IL-1β含量明显升高(P<0.01),心肌中iNOSmR-NA、ICAM-1 mRNA表达增强(P<0.01)。而异丙酚6、12mg·kg-1·h-1组,NF-κB从细胞质向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量也明显低于I/R组(均P<0.05);血清、心肌中TNF-α、IL-1β含量明显较I/R组降低(P<0.05),心肌中iNOS mRNA、ICAM-1 mRNA表达减弱(与I/R组相比,P<0.05,P<0.01)。结论异丙酚能减轻缺血/再灌注损伤,同时明显抑制心肌缺血/再灌注时NF-κB的活化,阻断NF-κB相关信号通路的传导,下调TNF-α、IL-1β、ICAM-1和iNOS等炎症相关因子的表达。

L-精氨酸和氨基胍对实验性脑缺血损伤的影响

目的观察一氧化氮 (nitricoxide ,NO)供体L 精氨酸 (L arginine)和一氧化氮合酶抑制剂氨基胍 (aminoguanidine,AG)对实验性大鼠局灶性脑缺血损伤的治疗作用以及一氧化氮在脑缺血损伤中的作用规律。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血 (MCAO)模型后注射L 精氨酸和AG ,研究大鼠脑缺血后脑梗塞体积变化 ;脑组织中NO、丙二醛 (MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶 (SOD)活性的变化 ;缺血脑组织病理变化。结果单独给予L 精氨酸或氨基胍均可明显缩小脑梗塞体积 ,明显降低缺血脑组织MDA含量 ,增强SOD活性 ;L 精氨酸还可明显增加缺血脑组织NO含量 ,氨基胍可明显抑制缺血脑组织NOS活性 ;L 精氨酸与氨基胍合用时 ,上述各项指标与缺血组比较无明显变化。结论L 精氨酸与氨基胍分别单独应用 ,对脑缺血性损伤具有治疗作用 。

异丙酚对第三丁基过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的心肌细胞凋亡的影响并探讨可能的机制。方法采用SD新生大鼠进行心肌细胞原代培养。实验分为5组:正常对照组、t-BHP组和异丙酚1、10、30μmol.L-1组。分光光度计法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物岐化酶(SOD)活性;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞线粒体活性,罗丹明123(Rhodamine123)荧光染色、流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3的表达。结果与正常对照组相比,100μmol.L-1的t-BHP处理心肌细胞4 h后,细胞内GSH水平明显下降(P<0.05),MDA含量增加(P<0.01),抗氧化酶SOD活性降低(P<0.01),细胞线粒体活性降低(P<0.01),线粒体膜电位ΔΨm明显下降(P<0.01),细胞凋亡率和caspase-3的表达明显升高(P<0.01);异丙酚10、30μmol.L-1能减少过氧化氢所致的细胞中MDA含量升高;提高SOD活性和GSH水平;提高线粒体活性、膜电位;抑制心肌细胞凋亡和caspase-3的表达升高(P(0.05,P(0.01)。结论异丙酚能减弱过氧化氢所致的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是通过减少活性氧自由基导致的细胞膜氧化损伤、提高线粒体活性、维持线粒体的膜电位,从而抑制心肌细胞凋亡的发生。

小麦黄素水剂中小麦黄素含量的反相高效液相色谱法测定

建立反相高效液相色谱测定小麦黄素水剂中小麦黄素(麦黄酮)含量的方法。采用SpherisorbC18 柱 ,以甲醇 -水 -乙酸 (体积比65∶35∶2)为流动相 ,流速1mL/min ,检测波长352nm。小麦黄素在5～100mg/L范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系 ,相关系数r=0.9986 ,该法灵敏、准确 ,重复性好 ,平均回收率为97 %。

反相高效液相色谱法测定小麦黄素水剂中的小麦黄素含量

目的建立反相高效液相色谱测定小麦黄素水剂中小麦黄素含量的方法.方法采用SpeherisorbC18柱,以甲醇-水-2%乙酸(65:35:2)为流动相,流速1ml@min-1,检测波长352nm.结果小麦黄素在0.005～0.100g@L-1范围内呈良好的线性关系,相关系数r≥0.9986,方法灵敏、准确、重复性好,平均回收率为96.94%.结论本实验建立的反相高效液相色谱法为测定小麦黄素水剂中的小麦黄素含量提供了可靠的分析方法.

川芎提取物对神经刺激所致猪脑动脉反应的影响

目的观察川芎提取物对神经刺激引起的猪脑动脉反应的作用及其与一氧化氮的关系。方法采用离体去除内皮血管方法,测定脑动脉条的等容张力变化及药物的作用。结果川芎提取物对电刺激或化学刺激引起的血管舒张反应具有增强作用,此作用不受酚妥拉明和哌唑嗪、心得安、阿托品、消炎痛的影响,但可被一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸抑制,该抑制作用又可为一氧化氮供体L-精氨酸逆转。结论川芎提取物对电刺激或化学刺激所致血管舒张反应的增强作用可能与一氧化氮有关。

中药抗脑衰胶囊对小鼠免疫功能的影响

目的 :观察抗脑衰胶囊对小鼠免疫功能的影响。方法 :采用碳粒阔清速率的测定、溶血素抗体生成的测定以及迟发性超敏反应等试验方法。结果 :抗脑衰胶囊可增加小鼠免疫器官重量 ,改善特异性及非特异性免疫功能 ,提高小鼠网状内皮系统吞噬功能 ,促进溶血素生成。结论 :抗脑衰胶囊可改善小鼠的免疫功能。