lncRNA OSTN-AS1下调miR-4461表达促进前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)OSTN反义RNA1(OSTN antisense RNA1,OSTN-AS1)对前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制.方法以前列腺上皮细胞RWPE-1为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LNCaP细胞中OSTN-AS1、miR-4461表达.转染OSTN-AS1小干扰RNA(si-OSTN-AS1)或miR-4461模拟物、或共转染si-OSTN-AS1与miR-4461抑制剂至LNCaP细胞,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白[Ki-67、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9]表达.双荧光素酶报告基因实验验证OSTN-AS1与miR-4461的调控关系.结果LNCaP细胞中OSTN-AS1表达量较RWPE-1细胞升高(3.38±0.26 vs.1.00±0.00,P<0.05),miR-4461表达量较RWPE-1细胞降低(0.46±0.04 vs.1.00±0.00,P<0.05).干扰OSTN-AS1或过表达miR-4461后,LNCaP细胞增殖活性、划痕愈合率、侵袭数降低,同时细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达量也降低(P_(均)<0.05).OSTN-AS1靶向结合miR-4461,且干扰OSTN-AS1表达的LNCaP细胞中miR-4461表达量增加(P<0.05).下调miR-4461逆转了干扰OSTN-AS1对LNCaP细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白表达的影响.结论干扰OSTN-AS1可通过靶向上调miR-4461抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭.

OSTN-AS1/miR-330调控前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨OSTN的反义RNA 1(OSTN-AS1)对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法收集25例前列腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织RT-qPCR检测组织中OSTN-AS1和miR-330的表达。体外培养前列腺癌PC-3M细胞,分别转染OSTN-AS1小干扰RNA、miR-330抑制剂或共转染OSTN-AS1小干扰RNA与miR-330抑制剂。流式细胞仪检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell检测细胞迁移和侵袭,RT-qPCR检测miR-330和MMP-2的mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证OSTN-AS1与miR-330及miR-330与MMP-2调控关系。将转染后的PC-3M细胞接种至裸鼠皮下,饲养4周后,剥离肿瘤并称重。结果前列腺癌组织中OSTN-AS1表达升高(P<0.05),而miR-330表达降低(P<0.05)。下调OSTN-AS1可阻滞体外PC-3M细胞的细胞周期进程,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,同时抑制体内肿瘤生长。下调miR-330促进体外PC-3M细胞的细胞周期进程及增殖、迁移和侵袭能力,同时促进体内肿瘤生长。OSTN-AS1负调控miR-330表达,miR-330负调控MMP-2表达。下调OSTN-AS1对体外PC-3M细胞的细胞周期、增殖、迁移和侵袭的抑制作用及体内肿瘤生长抑制作用可被下调miR-330逆转。结论 OSTN-AS1可能通过调控miR-330/MMP-2轴促进前列腺癌发展进程,其可能成为前列腺癌治疗的分子靶点。

lncRNA OSTN-AS1通过靶向调控miR-330-5p表达对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA OSTN的反义RNA 1(lncRNA OSTN-AS1)对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养人前列腺癌细胞DU145、人前列腺正常上皮细胞RWPE-1,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncRNA OSTN-AS1、miR-330-5p的表达量;以DU145细胞为研究对象,随机分组:si-NC组、si-OSTN-AS1组、miR-NC组、miR-330-5p组、si-OSTN-AS1+anti-miR-NC组、si-OSTN-AS1+anti-miR-330-5p组;细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测miR-330-5p过表达对野生型载体WT-OSTN-AS1荧光素酶活性的影响。结果与RWPE-1细胞比较,DU145细胞中lncRNA OSTN-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-330-5p的表达量降低(P<0.05);与si-NC组比较,siOSTN-AS1组细胞活力、划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05);miR-330-5p过表达可降低WT-OSTN-AS1的荧光素酶活性(P<0.05);与si-OSTN-AS1+anti-miR-NC组比较,si-OSTN-AS1+anti-miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率升高(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多(P<0.05)。结论下调lncRNA OSTN-AS1表达可通过上调miR-330-5p表达而减弱前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。

lncRNA OSTN-AS1调控前列腺癌细胞生物学行为的机制研究

目的探讨长链非编码RNA OSTN-AS1(lncRNA OSTN-AS1)靶向miR-1207-3p在前列腺癌(PCa)中的作用和分子机制。方法通过RT-qPCR检测OSTN-AS1和微小RNA-1207-3p(miR-1207-3p)在PCa组织中的水平。双荧光素酶报告基因检测验证miR-1207-3p与OSTN-AS1之间的靶点关系。在PCa细胞LNCaP中分别转染si-OSTNAS1(si-OSTN-AS1组)、si-NC(si-NC组)、pcDNA(pcDNA组)、pcDNA-OSTN-AS1(pcDNA-OSTN-AS1组)、miR-NC(miRNC组)、miR-1207-3p模拟物(miR-1207-3p模拟物组)、si-OSTN-AS1+anti-miR-NC(si-OSTN-AS1+anti-miR-NC组)、si-OSTN-AS1+anti-miR-1207-3p(si-OSTN-AS1+anti-miR-1207-3p组)。分别通过CCK-8法、transwell侵袭实验、克隆形成法、划痕愈合实验检测细胞活力、侵袭、克隆和迁移能力。结果PCa组织中OSTN-AS1表达上调(1.00±0.13 vs3.61±0.33)(P<0.05),miR-1207-3p表达下调(1.00±0.09 vs 0.27±0.04)(P<0.05)。miR-1207-3p是OSTN-AS1的靶基因。干扰OSTN-AS1表达后LNCaP细胞活力(0.73±0.06 vs 0.52±0.05)、划痕愈合率(64.87±5.48%vs26.34±2.37%)显著降低(P<0.05),miR-1207-3p水平显著升高(P<0.05),侵袭数(124.11±11.99 vs 56.14±4.59)、克隆形成数(85.99±7.55 vs 38.07±3.54)显著减少(P<0.05)。过表达OSTN-AS1后LNCaP细胞miR-1207-3p水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-1207-3p后LNCaP细胞活力(0.76±0.05 vs 0.59±0.05)、划痕愈合率(66.74±4.92%vs 35.44±3.48%)显著降低(P<0.05),侵袭数(125.81±11.93 vs 62.61±5.46)、克隆形成数(88.27±6.29 vs 44.17±4.18)显著减少(P<0.05)。下调miR-1207-3p表达部分逆转了干扰OSTN-AS1表达对LNCaP细胞活力以及侵袭、克隆和迁移能力的影响(P<0.05)。结论干扰OSTN-AS1通过促进miR-1207-3p表达可抑制PCa细胞增殖、迁移和侵袭。