实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

目的建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法。方法根据Gen Bank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。结果多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带。肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。结论本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测。

啮齿类动物模型在三种人类高致病性冠状病毒传染病中的研究与应用进展

严重急性呼吸综合征(Severe Acute respiratory syndrome,SARS)、中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)和COVID-19都具有较高的致死率,且都缺乏安全有效的疫苗和抗病毒药物,对人类的生命安全构成威胁,会引发严重的公共卫生事件。SARS-CoV、MERS-CoV以及SARS-CoV-2同属冠状病毒属,虽然SARS和MERS无新发病例或新发病例少,但仍可为COVID-19研究提供参考。啮齿类动物是最常见的实验动物,也最常用于人类疾病模型构建。本文将就啮齿类动物模型在SARS、MERS和COVID中的具体应用进行综述,以期助力科研工作者合理选择动物模型提供理论支持。

趋化因子和小胶质细胞在阿尔茨海默病神经炎症中的作用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以痴呆为主要症状的慢性进行性神经退行性疾病,主要神经病理学特征包括老年斑、神经原纤维缠结、神经炎症和神经元丢失。AD中的β-淀粉样蛋白沉积和错误折叠的Tau蛋白诱导小胶质细胞的激活,引起细胞因子、趋化因子的分泌,共同形成神经炎症反应影响AD的发展。本文总结了小胶质细胞激活和趋化因子释放在AD神经炎症中发挥的作用,为AD的治疗提供新的思路。

甲型血友病的基因诊断研究

目的建立甲型血友病的基因诊断方法。方法对33例甲型血友病患者以一期法检测血浆凝血因子FⅧ(F8)活性。采用长距离聚合酶链式反应扩增法(LD-PCR)进行FⅧ内含子22倒位检测,并对反应体系进行优化;聚合酶链式反应(PCR)技术检测内含子1倒位,凝胶成像技术分析扩增产物。捕获测序技术检测是否存在其他突变类型。结果 33例患者的FⅧ活性检测结果均小于1%,为重型;LD-PCR技术检测出13例患者存在Int22倒位,倒位发生率为39.4%;Int1倒位患者1人,发生率3%;对13例内含子22倒位患者进行测序比对,未发现其他基因突变。结论 LD-PCR技术和多重PCR技术可以有效的检测重型甲型血友病FⅧ的基因倒位。

金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR方法的建立与初步应用

目的建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法,为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法。方法根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌Las I基因、肺炎克雷伯杆菌Pho E基因和细菌通用16S rRNA基因设计出特异性引物;经过多重PCR引物浓度和退火温度的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系对人工感染标本、实验动物粪便样本进行验证检测,与传统检测方法对比。结果多重PCR分别扩增出金黄色葡萄球菌(153 bp)、绿脓杆菌(600 bp)、肺炎克雷伯杆菌(368 bp)和通用(520 bp)的目的条带。多重敏感性为10 pg,特异性检测未从其他细菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测出不同组合的人工感染标本,从76只粪便检测出绿脓杆菌阳性1例,与传统检测方法结果一致。结论本文建立的多重PCR方法具有特异、灵敏、简便、快速等优点,为实验动物微生物的快速检测提供了可靠的方法。

大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×10~2 copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。

卵巢过度刺激综合征大鼠模型的建立

目的 筛选、比较卵巢过度刺激综合征大鼠模型(OHSS)的建立方法,为OHSS机制研究及治疗药物的开发提供良好的动物模型。方法 将60只3~5周龄的Wistar和SD大鼠随机分组后注射不同剂量的孕马血清(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(h CG)进行OHSS模型的建立,并通过大体病理学检查、脏器指数测量、血液孕激素、雌激素及VEGF浓度测定等方法对所建立模型进行综合评价。结果 3周龄SD大鼠出现了明显的卵巢增大,血管通透性增加,血清VEGF水平上升等OHSS典型改变,更适用于进行OHSS大鼠模型的建立。结论 比较并筛选得到了可靠造模方法,为后续的OHSS发病机制研究及治疗药物开发提供了良好的动物模型。

石家庄地区不孕不育相关染色体分析

目的探讨染色体数目、结构和多态性异常与不孕不育临床表现的关系。方法按照常规G显带方法制备外周血淋巴细胞染色体,并对其核型进行数目和结构的分析,必要的做C显带和Y染色体微缺失。结果 7658例不孕不育病例中251染色体核型异常,异常率为3.28%,其中数目异常93例,结构异常158例,比例分别为1.22%、2.06%,染色体多态性630例,比例为8.23%。结论细胞学遗传学对于不孕不育患者在优生优育中具有指导意义。