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题名脂肪间充质干细胞对脑出血大鼠自噬的影响及机制探究
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作者
范语彤
白兆荣
张耀国
李鹏飞
高俊玲
周洪霞
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机构
华北理工大学基础医学院人体解剖学系
河北省慢性疾病基础医学重点实验室暨唐山市慢性病临床基础研究重点实验室
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出处
《河北医科大学学报》
CAS
2023年第5期502-511,共10页
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基金
河北省省级科技计划项目(H2019105137)。
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文摘
目的探讨脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠自噬的影响并探讨其可能的作用机制。方法在无菌环境下分离健康SD大鼠腹股沟周围脂肪,体外培养ADSCs,并培养至第4代,应用流式细胞仪对ADSCs表面标志物进行测定。雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、ICH组、ADSCs组。ICH组和ADSCs组大鼠建立ICH模型,Sham组同样的方法建立模型,但不注射自体血。建模术后2 h,ADSCs组经右侧纹状体区域注射给予5μL细胞悬液(1×10^(5)个细胞),Sham组和ICH组给予等体积的生理盐水。建模成功后分别于第12 h、1 d、3 d、5 d、7 d对大鼠进行Longa神经功能评分,处死大鼠后,HE染色观察大鼠脑组织病理改变、尼氏染色观察未受损神经元数量、测定脑组织水含量、免疫组织化学染色法检测细胞内自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(recombinant human beclin 1,Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(in vitro kinase assay for serine/threonine protein kinase AKT/mammalian target of rapamycin,AKT/mTOR)信号通路磷酸化的表达情况。蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测1 d、3 d脑组织内LC3、Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化蛋白表达水平。结果流式细胞仪检测所培养的大鼠ADSCs中黏附分子CD29、CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达。与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织病理症状均明显增加,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量,自噬相关蛋白LC3和Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平均明显上调(P<0.05)。与ICH组相比,ADSCs组大鼠脑组织病理症状均明显减轻,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量明显降低(P<0.05),自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达水平明显下降(P<0.05),AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论ADSCs移植治疗脑出血可发挥神经保护作用,这种作用可能与通过激活AKT/mTOR信号通路抑制ICH大鼠细胞自噬水平进而减轻大鼠脑损伤程度有关。
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关键词
脑出血
间质干细胞
自噬
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Keywords
cerebral hemorrhage
mesenchymal stem cells
autophagy
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分类号
R743.74
[医药卫生—神经病学与精神病学]
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