车前子多糖抗炎作用机制的实验研究

目的:观察不同浓度车前子多糖(PSP)对各期炎症模型的影响,探讨其可能机制。方法:将小鼠和大鼠随机各分为阴性对照组、阳性对照组和PSP低、中、高剂量组,每组10只。采用二甲苯致耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增高,蛋清致大鼠背部气囊滑膜炎,棉球诱发小鼠肉芽肿,探讨PSP的抗炎作用。称体质量测定各组小鼠耳的炎症肿胀程度及肉芽增生水平,用化学方法检测各组小鼠腹腔洗涤液中的伊文思蓝含量、滑膜炎渗出液容积、渗出液中的白细胞(WBC)计数和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,渗出液和血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组相比,车前子多糖能够抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加,以及小鼠棉球肉芽肿的形成差异有统计学意义(P<0.01);其较阴性对照组还能明显减少渗出液容积,降低渗出液中WBC、MDA、TNF-α含量及血清中MDA水平,并能提高渗出液和血清中SOD的活性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)结论:PSP能够减轻各期炎症形成,机制可能与抑制炎性因子的渗出、消除自由基和抑制脂质过氧化有关。

水杨酸钠对大鼠海马神经元电压门控性钙离子通道的影响

目的：研究水杨酸钠对大鼠海马神经元上电压门控性钙离子通道的作用，为海马参与耳鸣引起的情绪变化提供电生理学的依据。方法利用脑片膜片钳技术观察水杨酸钠对大鼠海马神经元电压门控性钙离子通道电生理学特性的影响。结果水杨酸钠对电压门控性钙离子通道电流（ ICa ）有抑制作用，而且具有浓度依赖性（0.1~10 mmol · L-1）。水杨酸钠对海马神经元ICa的半抑制浓度（ IC50）为1.64。1 mmol·L-1水杨酸钠对ICa的稳态激活动力学有明显影响，使ICa的稳态激活曲线向超极化方向移动大约9 mV左右，但是对其稳态失活动力学没有明显影响。结论水杨酸钠以浓度依赖的方式抑制 ICa ，对其稳态激活动力学有明显影响。水杨酸钠对大鼠海马神经元上ICa的影响可能与海马参与耳鸣引起的情绪变化相关。

车前子对抗高脂血症大鼠脂质过氧化作用(英文)

背景:近年研究发现,车前草种子外壳是很好的可溶性膳食纤维源,可用来添加到食品中,调整胆固醇含量。目的:观察车前子对高脂血症大鼠血脂及其体内脂质过氧化作用的干预结果。设计:完全随机分组设计,对照动物实验。单位:河北省新药药理毒理实验室。材料:①选用健康一级SD大鼠24只,鼠龄60～70d,体质量(210±22)g,雌雄不拘。②基础饲料由河北省实验动物中心配制,各成分质量分数:面粉0.25,麸皮0.1,玉米面0.22,豆饼0.22,鱼粉0.08,骨粉0.02,草粉0.05,食盐0.01,酵母粉0.02,葵花子0.03。高脂饲料由河北省实验动物中心配制,各成分质量分数:基础饲料0.9,胆固醇0.015,猪油0.08,猪胆盐0.003。③测定血脂试剂盒由保定长城临床试剂公司出品;测超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力和丙二醛水平试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。方法:实验于2004-06/12在河北省新药药理毒理研究实验室完成。①随机将24只大鼠分为3组:正常对照组,模型组,车前子组,每组8只。正常对照组:进食基础饲料。模型组:进食高脂饲料。车前子组:进食高脂饲料+车前子15g/kg,普通饮水。实验动物分笼饲养,每只摄食25g/d,自由饮水,实验周期为12周。②实验结束时,麻醉大鼠,采用相应试剂盒测定血清三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平;采用相应试剂盒测血清超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力和丙二醛水平,心肌组织超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量,肝组织过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。③两组间计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:造模12周后,各组大鼠血脂水平及机体抗氧化能力比较。结果:大鼠24只均进入结果分析。①造模12周后,模型组大鼠血清和心肌组织超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组和车前子组(P<0.05),血清丙二醛水平和心肌丙二醛含量均明显高于正常对照组和车前子组(P<0.05)。②造模12周后,模型组大鼠血清和心肌组织过氧化氢酶和肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活力均明显低于正常对照组和车前子组(P<0.05)。③造模12周后,模型组大鼠血清总胆固醇和三酰甘油水平明显高于正常对照组和车前子组(P<0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇水平和高密度脂蛋白胆固醇/总胆固醇明显低于正常对照组和车前子组(P<0.05)。结论:提示15g/kg剂量车前子可明显降低高脂血症大鼠血脂,增加机体抗氧化能力。

Kir2.1/Kir2.3嵌合体的构建与表达

目的构建Kir2.1/Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础。方法利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1C3,NIP3C1,N3P1C3。将不同的嵌合体质粒分别用NheI线性化后,转录为cRNA表达于非洲爪蟾卵母细胞,用双电极电压钳记录电流。结果不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒构建成功,在非洲爪蟾卵母细胞上可以记录到电流表达。结论成功构建Kir2.1/Kir2.3嵌合体并完成了嵌合体通道的异源性表达和电压钳记录。

FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响

目的构建FLAG标记的内向整流钾通道(inwardly rectifying K channel,Kir)2.3通道蛋白,为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础。方法运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.3通道氨基末端,构建重组质粒DNA,FLAG-Kir2.3-pGEMHE;采用菌落PCR方法挑取阳性克隆,表达于非洲爪蟾卵母细胞,验证加入标记后是否影响Kir2.3通道蛋白的功能;进行免疫细胞化学实验,检测FLAG标记短肽表达情况。结果经测序验证,FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功,没有碱基突变。FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能,FLAG-Kir2.3成功表达于非洲爪蟾卵母细胞,双电极电压钳可以记录到电流。免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达。结论成功构建重组质粒DNA,FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达。

肾上腺素对于心室乳头肌细胞复极化过程中主要离子通道的调节作用

心肌缺血、心衰、心绞痛、心肌离子通道病变等状态下,遇到情绪激动、应激状态或其它交感张力异常增高时,或使用外源性肾上腺素时,体内儿茶酚胺类物质明显增多,会诱发快速心律失常,甚至出现室颤或猝死的情况。这与激动α与β受体、调节心肌离子通道功能、影响心肌动作电位,导致心肌兴奋性改变有密切关系。该文从心肌电生理的角度,分析了肾上腺素受体对心肌复极过程中主要离子通道功能的调节,以及对动作电位时程的影响,加深对儿茶酚胺类物质引发室性心律失常机制的理解。

大鼠结肠平滑肌细胞分离及电生理功能鉴定

目的建立大鼠结肠平滑肌细胞分离技术,评价单个结肠平滑肌细胞质量和电生理特征。方法通过改良Bitar法建立大鼠结肠平滑肌细胞的分离方法 ,全细胞膜片钳技术记录结肠平滑肌细胞钙电流,证实结肠平滑肌细胞的电生理特性。结果分离的大鼠平滑肌细胞呈梭形,横纹清晰,遮光性较强,长度各异。全细胞膜片钳记录细胞膜钙电流,证实所分离的细胞具有典型的钙电流特征。结论 Bitar法经改良后可以成功获得适合电生理实验需要的单个大鼠结肠平滑肌细胞,且易于操作,重现性好。

氧化应激参与戊地昔布诱导的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞凋亡

目的探讨氧化应激在选择性环氧化酶-2抑制剂戊地昔布诱导人乳腺癌MCF-7/ADR细胞凋亡中的作用。方法用噻唑蓝法检测药物对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞生长的作用;用流式细胞仪和Hoechst 33258染色检测人乳腺癌MCF-7/ADR细胞凋亡;用试剂盒检测还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的含量;用激光共聚焦检测细胞内活性氧水平。结果 1戊地昔布可诱导人乳腺癌MCF-7/ADR细胞凋亡,抑制细胞生长。2Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK可拮抗戊地昔布的作用。3戊地昔布可降低细胞还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比值,提高MCF-7/ADR细胞内的活性氧水平,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用。结论戊地昔布可诱导人乳腺癌MCF-7/ADR细胞凋亡,与其升高细胞内的活性氧有关。